青藤碱抑制人外周血CD4+T淋巴细胞内NF-AT和IFN-γ表达的体外研究

目的 通过研究青藤碱(SIN)对人外周血CD4+T淋巴细胞内核因子-AT(NF-AT)和γ干扰素(IFN-γ)表达的影响来探讨其免疫作用机制.方法 免疫磁珠法分选人外周血CD4+T淋巴细胞,并分为5组进行培养.(1)阴性对照组:细胞培养液中不加入任何药物;(2)阳性对照组:细胞培养液中加入终浓度为50ng/ml的环孢素A(CsA)溶液;(3)低浓度青藤碱(L-SIN)组:细胞培养液中加入终浓度为10μmol/L的青藤碱溶液;(4)中浓度SIN(M-SIN)组:细胞培养液中加入终浓度为200 μmol/L的青藤碱溶液;(5)高浓度SIN(H-SIN)组:细胞培养液中加入终浓度为1000 μmol/L的青藤碱溶液.观察各组CD4+T淋巴细胞的增殖情况,蛋白印迹法检测各组细胞内NF-AT的蛋白表达,流式细胞术检测各组细胞内IFN-γ的表达水平.结果 与阴性对照组比较,M-SIN和H-SIN组明显抑制了CD4+T淋巴细胞的增殖(P＜0.01).青藤碱呈浓度依赖性抑制CD4+T细胞内NF-AT和IFN-γ的表达(P＜0.01),而加入CsA培养的阳性对照组NF-AT和IFN-γ表达最低.CD4+T淋巴细胞内NF-AT的表达与细胞增殖抑制率之间存在负相关关系(rs=-0.969,P=0.000).结论 青藤碱抑制人外周血CD4+T淋巴细胞内NF-AT和IFN-γ表达;其免疫作用机制可能是通过降低NF-AT的表达以抑制T淋巴细胞的活化和增殖.     

盐酸青藤碱壳聚糖纳米粒的制备及体外释放性能的研究

目的:制备盐酸青藤碱壳聚糖纳米粒,并考察其性质和体外释药特性。方法:通过微乳液-离子交联法制备盐酸青藤碱壳聚糖纳米粒,考察纳米粒的形态、粒径和zeta电位,紫外分光光度法测定其载药量和包封率,透析法研究其体外释药特性。结果:制得的纳米粒呈球形或类球形,平均粒径为98.3nm,包封率为67.2%,体外模拟释药结果表明载药纳米粒药物释放速率在24h内持续稳定。结论:微乳液-离子交联法制备盐酸青藤碱壳聚糖纳米粒简便可靠,体外释药具有明显的缓释作用。     

青藤碱压敏胶分散型贴剂的制备及体外经皮渗透性考察

目的制备青藤碱压敏胶分散型贴剂并考察其体外经皮渗透性。方法将青藤碱及各种渗透促进剂直接溶于压敏胶中制备压敏胶分散型贴剂;采用卧式双室扩散池,研究青藤碱贴剂的体外经皮渗透行为。结果由DURO-TAK87-4098型压敏胶制备的贴剂的稳态渗透速率显著高于由DURO-TAK 87-2677制备的贴剂。加入各种渗透促进剂后,促渗作用由大到小的排列顺序为(质量分数):15%肉豆蔻酸异丙酯>10%肉豆蔻酸异丙酯>10%氮酮>5%肉豆蔻酸异丙酯>10%油酸>10%N-甲基吡咯烷酮。联合应用促进剂后促渗作用由大到小的排列顺序为(质量分数):10%肉豆蔻酸异丙酯+5%薄荷醇>10%肉豆蔻酸异丙酯+5%氮酮>10%肉豆蔻酸异丙酯+10%薄荷醇>10%肉豆蔻酸异丙酯+10%氮酮,但与10%的豆蔻酸异丙酯或10%氮酮相比,没有协同作用。结论应用DURO-TAK87-4098型压敏胶制备的青藤碱压敏胶分散型贴剂有望制成长效抗炎镇痛贴剂,值得进一步深入研究。     

盐酸青藤碱纳米柔性脂质体的制备及其性质研究

目的制备盐酸青藤碱纳米柔性脂质体,探索其体外透皮给药的规律与机制。方法采用薄膜分散法制备以丙二醇为柔软剂的盐酸青藤碱纳米柔性脂质体,考察卵磷脂、胆固醇与丙二醇对脂质体包封率的影响;高效液相色谱(HPLC)法测定青藤碱的量,原子力显微镜(AFM)、透射电镜(TEM)和光子相关光谱仪(PCS)描述其物理性质。采用双室扩散池法研究其体外透皮给药规律,透皮给药结束后用扫描电镜(SEM)观察皮肤表面结构的变化。结果卵磷脂、胆固醇和丙二醇的质量分数分别为3%、0.02%、25%时,制备的柔性脂质体对盐酸青藤碱的包封率为(66±2.3)%;其外观为圆形或椭圆形,内部为多层囊泡结构,粒径为(170±26)nm,表面电位为-(43±3.4)mV。柔性脂质体能够使角质层结构变得紊乱无序,角质细胞间隙增大而提高皮肤对药物的渗透性。结论纳米柔性脂质体能够显著提高盐酸青藤碱透皮给药效果,可作为盐酸青藤碱透皮给药的新型纳米载体。     

水蔓菁总黄酮对前列腺炎模型小鼠前列腺及相关组织形态的影响

目的观察水蔓菁总黄酮对前列腺炎模型小鼠前列腺、睾丸及附睾病理形态学改变的影响。方法将60只小鼠随机分为正常对照组、前列腺炎模型组、前列康干预对照组和大、中、小剂量水蔓菁总黄酮干预组;采用前列腺内注入25％消痔灵注射液的方法建立小鼠前列腺炎模型;各种干预药物连续给药21d后,光镜下观察各组小鼠前列腺、睾丸、附睾的组织形态学改变化。结果模型组小鼠前列腺、睾丸和附睾组织病理改变明显;大、中、小剂量水蔓菁总黄酮干预组小鼠前列腺、睾丸、附睾组织病理改变显著轻于模型组,尤以大、中剂量干预组作用明显。结论水蔓菁总黄酮可显著缓解前列腺炎模型小鼠的前列腺、睾丸、附睾的病理形态学改变。     

青风藤电离巴布剂电致孔透皮给药的药动学研究

目的 将青风藤在电致孔电离巴布剂条件下透皮给药,用房室模型法初步分析考察电致孔巴布剂透皮给药的药动学特点。方法 制备青风藤电离巴布剂,以所含青藤碱为检测指标,采用双室扩散池、高效液相色谱法测定血药浓度,采用AIC法判断药动学房室模型。结果 青风藤电离巴布剂在电致孔条件下透皮给药符合线性乳突型单室开放模型,其模型参数K=0.056,Ka=0.232,体内药物浓度与时间的关系方程为C=2.884×(e-0.056t-e-0.232t);单纯被动扩散的模型参数K=0.058,Ka=0.149,体内药物浓度与时间的关系方程为C=2.512×(e-0.058t-e-0.149t)。结论 可以用一级吸收、一级消除的线性乳突型单室开放模型分析青风藤电离巴布剂电致孔技术透皮给药的体内药物浓度随时间的变化规律。电致孔技术与被动扩散比较,能够提高透皮给药的生物利用度。     

盐酸青藤碱多囊脂质体的制备及其释放特性研究

目的制备包封率较高且具有较好缓释性能的盐酸青藤碱多囊脂质体。方法用复乳法制备盐酸青藤碱多囊脂质体,以包封率和囊形为考察指标,采用均匀设计优选最佳处方和工艺,并考察其形状、粒径及体外释放性能。结果制得的盐酸青藤碱多囊脂质体包封率在80%以上,形状圆整,粒径较均匀,多数分布在20～30μm,体外释放符合Higuchi方程,释药t1/2为52.7 h。结论盐酸青藤碱多囊脂质体处方工艺稳定可行,包封率高且具有良好的缓释特性。     

青藤生物碱成分的研究

目的: 研究青藤 (sinomenium actum(thumb) Rehd.et wils)中具有纳洛酮戒断作用的生物碱类化学成分.方法: 采用硅胶柱层析进行分离纯化,通过理化和波谱分析鉴定其化学结构.结果: 从青藤的氯仿部分分离得到3个生物碱,经理化和波谱分析鉴定为青藤碱1 (sinomenine)、青风藤碱2(sinoacutine)和木兰碱3 (magnoflorine).结论: 青藤中可分离到3种生物碱.     

青藤碱对肺癌细胞A549中COX2、α7nAChR和A2A表达的影响

【目的】观察青藤碱(sinomenine,SIN)对环氧化酶2(COX2)、α7烟碱型乙酰胆能受体(α7nAChR)和腺苷受体(A2A)表达变化的影响,探讨青藤碱对A549细胞增殖的抑制作用及机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测青藤碱和4-甲基亚硝胺基-1-3-吡啶基-1-丁酮(NNK)对A549细胞增殖的影响;细胞划痕实验观察青藤碱和NNK对A549细胞迁移的影响;Western blot法观察青藤碱和NNK对A549细胞COX2蛋白表达的影响;RT-PCR和Western blot法观察青藤碱和NNK对A549细胞α7n ACh R、A2A表达的影响。【结果】NNK能促进增殖和迁移,青藤碱能抑制A549细胞增殖和迁移;NNK组COX2蛋白质水平增加,青藤碱组COX2蛋白质水平下降;NNK组α7n ACh R、A2A的表达增加,青藤碱组α7n ACh R、A2A表达下降。【结论】青藤碱能通过抑制COX2蛋白表达发挥抗A549细胞增殖和迁移作用;青藤碱对α7n ACh R和A2A受体的表达均有抑制作用。     

青藤碱逆转人乳腺癌MCF-7细胞他莫昔芬耐药及机制研究

目的 探究青藤碱（sinomenine,SIN）对人乳腺癌MCF-7细胞他莫昔芬（tamoxifen,TAM）耐药的逆转作用及相关机制。方法 采用高剂量短时间刺激诱导法构建MCF-7/TAM耐药株,并通过MTT法验证细胞耐药性的改变,进一步采用MTT法检测SIN和TAM对MCF-7/TAM细胞的增殖抑制作用,并采用CompuSyn软件评估两者的联合效应。流式细胞术检测SIN和TAM对MCF-7/TAM细胞凋亡和周期的影响,Western blotting检测SIN对MCF-7/TAM细胞中PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。结果 MCF-7/TAM细胞对TAM敏感性显著降低,已产生耐药性;SIN和TAM单用均能够抑制MCF-7/TAM细胞的增殖,TAM和SIN联合使用对MCF-7/TAM细胞的抑制作用显著增强,经CompuSyn软件分析显示两药具有协同作用;SIN和TAM联用能够更显著地诱导MCF-7/TAM细胞凋亡和阻滞细胞周期;MCF-7/TAM细胞中PI3K、Akt和mTOR的磷酸化水平显著高于MCF-7细胞,SIN干预后MCF-7/TAM细胞中PI3K、Akt和mTOR的磷酸化水平显著下降。结论 SIN能够通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路,从而逆转MCF-7细胞对TAM耐药。