紫草素通过下调c-MYC蛋白的表达抑制白血病NB4细胞的增殖

目的研究紫草素对人白血病NB4细胞增殖的影响及其作用机制。方法 CCK-8法检测NB4细胞增殖。流式细胞术检测细胞周期和凋亡。Western blot检测细胞c-MYC、ERK、p-ERK蛋白表达。用SPSS17.0软件包进行单因素方差分析及t检验。结果 NB4细胞经紫草素处理后,细胞活力受到明显抑制(P0.01);G1期细胞增多(P0.01),G2期和S期细胞减少(P0.01);细胞凋亡率明显增加(P0.01);c-MYC蛋白表达水平明显降低(P0.05),p-ERK水平明显升高(P0.01)。结论紫草素抑制NB4细胞增殖,可能机制是通过下调c-MYC蛋白的表达,EKR信号通路蛋白可能参与了这一过程。     

高效液相色谱测定条件的耐用性试验研究

目的：本研究以紫归敏康片中β,β′-二甲基丙烯酰紫草素含量测定确定的色谱条件为研究对象,考察其含量测定高效液相色谱（HPLC）条件的耐用性。方法：在不同的检测波长、流速、柱温、流动相配比、流动相PH、色谱柱等仪器条件下,对制剂中的指标性成分β,β′-二甲基丙烯酰紫草素进行含量测定。结果：在测试范围内,检测波长、流动相配比、流动相PH、色谱柱对含量测定无明显影响（RSD〈3.0%）,流速、柱温有较大影响（RSD〉3.0%）。结论：通过耐用性试验考察,确定了含量测定色谱条件的适宜性,保证了含量测定的准确性、重现性和可信性。     

紫草素对血管平滑肌细胞化疗性损伤保护作用的机制

目的:探讨紫草素对血管平滑肌细胞(VSMC)化疗性损伤产生预防性保护及治疗作用的机制。方法:培养兔血管平滑肌细胞,以硫酸长春新碱建立化疗性损伤模型,采用噻唑兰(MTT)法测定细胞活性,并测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)和细胞内游离Ca2+浓度,使用流式细胞术比较各组间细胞周期的改变。结果:紫草素用于预防或治疗时,实验组的细胞活性、LDH的水平及细胞内游离Ca2+浓度与模型组比较差异均有极显著性(P<0.01),与空白组相比接近,差异无显著性(P>0.05);紫草素可消除化疗药物对细胞有丝分裂阻滞作用,使G2期细胞比例恢复正常,单药时可提高正常细胞S期比例。结论:紫草素对VSMC化疗损伤具有预防性保护作用和损伤后的修复作用。     

紫草素对人胎肾小球系膜细胞增殖、凋亡及细胞外基质的影响

目的：研究紫草素对人胎肾小球系膜细胞(MC)增殖、凋亡及细胞外基质的影响。方法：采用人胎肾细胞培养法、MTT法、流式细胞仪及免疫组化的方法。结果：紫草素0．05、0．10、0．50及1，00mmol／L浓度对培养24、48、72h人MC有明显抑制作用；紫草素明显抑制高糖诱发的人MC细胞凋亡；紫草素0．05、0．10、0．50μg/ml显著抑制系膜基质层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)及胶原Ⅳ(CoⅣ)的生成。结论：紫草素具抑制人MC增殖、细胞外基质生成及细胞凋亡作用。     

新疆紫草粗提物对MGC-80人胃癌细胞的体外作用研究

目的研究不同浓度的紫草粗提物(SE)对MGC-80胃癌细胞的作用。方法荧光显微镜观察细胞形态的变化;MTT法检测不同浓度SE培养细胞后细胞的存活率;划痕试验检测不同浓度的SE对细胞迁移力的影响;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果不同浓度SE可诱导MGC-80细胞凋亡,不同浓度(0、1、2、3、4、5mg/mL)SE处理的细胞存活率分别为[24h:(100.00±2.12)、(98.15±6.20)、(97.62±2.16)、(85.11±2.30)、(72.40±3.52)、(63.17±2.49);48h:(100.00±2.21)、(95.02±1.62)、(92.20±1.70)、(63.18±2.51)、(30.28±2.17)、(22.19±2.26);72h:(100.00±1.11)、(92.12±2.71)、(92.81±2.33)、(56.30±1.82)、(22.01±1.52)、(19.85±2.29);96h:(100.00±1.59)、(93.70±2.26)、(91.26±3.17)、(53.72±2.09)、(19.49±2.11)、(13.62±1.73);120h:(100.00±1.29)、(95.17±1.18)、(92.74±1.98)、(74.05±3.40)、(18.12±3.03)、(8.09±0.78);140h:(100.00±2.27)、(96.21±2.26)、(93.31±2.12)、(73.45±3.06)、(22.66±1.49)、(12.36±1.25);168h:(100.00±1.35)、(98.60±2.17)、(96.27±1.80)、(75.30±1.72)、(24.13±1.70)、(11.89±2.12)]且细胞向划痕区的愈合速度随着SE浓度(0、1、2、3、4、5mg/mL)的增高不断减慢[24h:(35.23±2.01)、(20.17±2.03)、(17.40±2.01)、(10.31±2.10)、(7.20±1.80)、(4.18±2.08);48h:(55.10±2.12)、(30.21±2.30)、(23.68±1.89)、(12.01±2.11)、(4.88±2.15)、(1.20±1.79);72h:(64.01±2.43)、(41.02±2.30)、(30.11±2.26)、(19.30±1.61)、(3.54±1.06)、(0.81±0.60);96h:(73.28±2.71)、(60.11±2.58)、(43.90±2.05)、(18.01±2.12)、(8.71±1.35)、(0.65±0.71)];当SE的浓度≥3 mg/mL时,细胞周期G1期比例上升(浓度=3 mg/mL时,G1为70.2%、浓度=4mg/mL时,G1为63.9%、浓度=5 mg/mL时,G1为80.3%),并伴随S期比例下降(浓度=3mg/mL时,S为21.0%、浓度=4mg/mL时,S为12.2%、浓度=5mg/mL时,S为13.8%)。结论紫草SE能够诱导MGC-80细胞凋亡及改变细胞周期分布。     

β, β-Dimethylacrylshikonin induces mitochondria-dependent apoptosis of human lung adenocarcinoma cells in vitro via p38 pathway activation

Aim:

β, β-Dimethylacrylshikonin (DMAS) is an anticancer compound extracted from the roots of Lithospermum erythrorhizon. In the present study, we investigated the effects of DMAS on human lung adenocarcinoma cells in vitro and explored the mechanisms of its anti-cancer action.

Methods:

Human lung adenocarcinoma A549 cells were tested. Cell viability was assessed using an MTT assay, and cell apoptosis was evaluated with flow cytometry and DAPI staining. The expression of the related proteins was detected using Western blotting. The mitochondrial membrane potential was measured using a JC-1 kit, and subcellular distribution of cytochrome c was analyzed using immunofluorescence staining.

Results:

Treatment of A549 cells with DMAS suppressed the cell viability in dose- and time-dependent manners (the IC₅₀ value was 14.22 and 10.61 μmol/L, respectively, at 24 and 48 h). DMAS (7.5, 10, and 15 μmol/L) dose-dependently induced apoptosis, down-regulated cIAP-2 and XIAP expression, and up-regulated Bax and Bak expression in the cells. Furthermore, DMAS resulted in loss of mitochondrial membrane potential and release of cytochrome c in the cells, and activated caspase-9, caspase-8, and caspase-3, and subsequently cleaved PARP, which was abolished by pretreatment with Z-VAD-FMK, a pan-caspase inhibitor. DMAS induced sustained p38 phosphorylation in the cells, while pretreatment with SB203580, a specific p38 inhibitor, blocked DMAS-induced p38 activation and apoptosis.

Conclusion:

DMAS inhibits the growth of human lung adenocarcinoma A549 cells in vitro via activation of p38 signaling pathway.     

紫草素通过抑制人睾丸癌I-10和精原细胞瘤TCAM-2糖酵解诱导细胞死亡

目的 探究紫草素对睾丸癌细胞I-10和精原细胞瘤TCAM-2死亡形式的影响,并从线粒体功能和糖酵解方面探讨其可能机制。方法 I-10细胞组加入浓度分别为0 μmol/L（对照组）、1.2、1.4、1.6 μmol/L的紫草素,TCAM-2细胞组加入浓度分别为0 μmol/L（对照组）、0.5、1、1.5 μmol/L的紫草素,JC-1试剂盒和ROS试剂盒分别用来检测线粒体膜电位和活性氧的变化;乳酸试剂盒检测胞内乳酸变化;MTT法检测细胞增殖抑制;透射电镜观察细胞死亡形式;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测线粒体通路相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase 3和自噬相关蛋白LC3B以及糖酵解相关蛋白PKM2、GLUT1、HK2的相对表达水平。结果 MTT结果表明,紫草素能够随时间和剂量依赖性的抑制I-10和TCAM-2细胞的增殖（P<0.05）,I-10组24、48、72 h的IC50值分别为1.8、1.36和1.16 μmol/L,TCAM-2组24、48、72 h的IC50值分别为2.37、0.8和0.41 μmol/ L;紫草素能通过下调I-10和TCAM-2细胞线粒体膜电位和增加细胞活性氧水平而影响其线粒体功能（P<0.05）,抑制乳酸水平影响细胞糖酵解能力（P<0.05）;透射电镜和Annexin V-FITC/PI双染法检测出紫草素能够诱导I-10和TCAM-2细胞凋亡和过度自噬现象（P<0.05）;Western blot证明,紫草素可以通过下调线粒体通路相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase 3的表达而影响I-10和TCAM-2细胞线粒体功能,下调PKM2、GLUT1、HK2影响其糖酵功能,通过上调LC3B增加细胞自噬（P<0.05）。结论 紫草素对睾丸癌细胞I-10和TCAM-2具 有增殖抑制及诱导凋亡和增加自噬作用,其机制可能为紫草素影响I-10和TCAM-2细胞能量代谢功能。     

紫草素衍生物与Bcl-xl靶标的相互作用的分子模拟研究

目的紫草素衍生物因其良好的抗肿瘤活性吸引了很多研究者的兴趣。但是还没有针对其与可能靶标蛋白Bcl-xl的作用模式的研究,此文以期通过计算机模拟指导新化合物的设计和合成。方法采用分子对接和分子动力学模拟的方法,研究了化合物Comp A与Bcl-xl之间的相互作用模式,并对相互作用进行了分析。结果 Bcl-xl活性位点区域的电荷分布情况与紫草素衍生物之间的相互作用决定了化合物的活性,在靠近A区、B区改善小分子的特性,可增加两者的相互作用和小分子活性。结论通过计算机模拟找到了紫草素衍生物结构优化的方向,可以用于指导化合物的合成和修饰。     

紫草素的超声提取

目的:研究用超声技术提取紫草素的方法.方法:采用超声波法和乙醇浸取法提取紫草素,测定溶液的吸光度值,并进行比较.结果:超声法提取在45分钟达到最大提取率,比乙醇浸取法提取率高7%.结论:超声法提取紫草素与常规提取法相比较,超声法可提高紫草素的提取率和节省提取时间.