紫草素逆转绒癌细胞JAR/MTX耐药与survivin和Bcl-2表达关系研究

目的 探讨紫草素逆转绒癌细胞耐药效应在凋亡方面的机制.方法 体外培养细胞并将其分为4组,各组加药后观察每组细胞24、48、72 h生长情况并计算细胞贴壁率,电化学发光法检测β-HCG值,S-P免疫组织化学及RT-PCR法检测survivin、Bcl-2基因表达.结果 MTX对细胞JAR/MTX毒性作用、细胞贴壁率、β-HCG下降程度与对照相比差异无统计学意义(P＞0.05);紫草素作用细胞后与对照相比差异有统计学意义(P＜0.05);二者合用作用于JAR/MTX细胞与对照相比差异显著(P＜0.01),survivin基因的mRNA和蛋白表达与对照相比差异显著(P＜0.01),Bcl-2基因的mRNA表达与对照相比差异显著(P＜0.01),蛋白表达与对照相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 紫草素可逆转JAR/MTX细胞对MTX耐药是通过下调survivin、Bcl-2基因表达增加细胞凋亡实现的;紫草素有可能成为绒癌化疗的新型增敏剂.     

紫草素及其衍生物诱导凋亡机制外的抗肿瘤机制研究进展

紫草素是从中药紫草中提取的小分子萘醌类化合物,具有明显抗肿瘤作用。紫草素抗肿瘤机制涉及多个靶点,除了传统抗凋亡机制外,还包括诱导肿瘤细胞发生坏死性凋亡、抑制拓扑异构酶、抑制丙酮酸激酶M2（PKM2）等。国内外抗肿瘤药物发展的战略要点之一是从天然产物中寻找高效低毒的活性成分,紫草素具有高效低毒作用,有望和其他化疗药物联合应用,实现化疗协同、增效、减毒作用。     

紫草素通过抑制PKM2/PHD3/HIF-1α通路诱导肝癌细胞凋亡

目的 探讨紫草素诱导人肝癌细胞SMMC-7721死亡的可能机制。方法 体外培养人肝癌细胞（SMMC-7721）和正常肝细胞（L-02）,实验分为对照组和紫草素给药组（4、8、16μmol/L）。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,MTT法检测细胞活力,试剂盒检测三磷酸腺苷（ATP）和乳酸水平,免疫共沉淀和免疫荧光双染实验明确M2型丙酮酸激酶（PKM2）、脯氨酰酸羟化酶3(PHD3)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)三者之间的作用关系及蛋白表达情况;Annexin V/PI检测细胞凋亡;Western blot观察PKM2、PHD3、HIF-1α及凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3、Bcl-2表达水平;采用小干扰核糖核酸（siRNA）干扰法建立PKM2低表达的人肝癌SMMC-7721细胞,Western blot检测PKM2低表达对人肝癌SMMC-7721细胞中的PHD3、HIF-1α蛋白表达水平的影响。结果 紫草素对SMMC-7721和L-02细胞的半抑制浓度（IC50）分别是8.0...     

紫草素对人食管癌TE-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其可能的机制

目的：观察紫草素对人食管癌TE-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并探究其作用机制。方法：采用不同浓度的 紫草素（0、 1、 5、 10 μmol/L）处理TE-1细胞,MTT法检测24、 48、 72 h后各组细胞增殖水平;紫草素处理各组TE-1细胞48 h后,采用 Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡状况,流式细胞术检测细胞的凋亡水平及周期变化,Western blotting检测TRAP1/Akt/ mTOR信号通路相关蛋白表达变化。结果：紫草素呈时间和浓度依赖性抑制TE-1细胞增殖（P<0.05或P<0.01）;与对照组相比, 紫草素能显著促进TE-1细胞凋亡（P<0.01）, 使TE-1细胞周期发生G0/G1期阻滞（P<0.05或P<0.01）,同时降低TRAP1、p-Akt以及 p-mTOR表达水平（P<0.05或P<0.01）,以上作用具有剂量依赖性。结论：紫草素能显著抑制TE-1细胞的增殖,诱导细胞发生G0/ G1期阻滞并促进其凋亡,这可能与其抑制TRAP1/Akt/mTOR信号通路有关。     

Shikonin and its derivatives inhibit the epidermal growth factor receptor signaling and synergistically kill glioblastoma cells in combination with erlotinib

Overexpression and mutation of the epidermal growth factor receptor (EGFR) gene play a causal role in tumorigenesis and resistance to treatment of glioblastoma (GBM). EGFR inhibitors such as erlotinib are currently used for the treatment of GBM; however, their efficacy has been limited due to drug resistance. New treatment strategies are therefore urgently needed. Shikonin, a natural naphthoquinone, induces both apoptosis and necroptosis in human glioma cells, but the effectiveness of erlotinib‐shikonin combination treatment as well as the underlying molecular mechanisms is unknown yet. In this study, we investigated erlotinib in combination with shikonin and 14 shikonin derivatives in parental U87MG and transfected U87MG.ΔEGFR GBM cells. Most of the shikonin derivatives revealed strong cytotoxicity. Shikonin together with five other derivatives, namely deoxyshikonin, isobutyrylshikonin, acetylshikonin, β,β‐dimethylacrylshikonin and acetylalkannin showed synergistic cytotoxicity toward U87MG.ΔEGFR in combination with erlotinib. Moreover, the combined cytotoxic effect of shikonin and erlotinib was further confirmed with another three EGFR‐expressing cell lines, BS153, A431 and DK‐MG. Shikonin not only dose‐dependently inhibited EGFR phosphorylation and decreased phosphorylation of EGFR downstream molecules, including AKT, P44/42MAPK and PLCγ1, but also together with erlotinib synergistically inhibited ΔEGFR phosphorylation in U87MG.ΔEGFR cells as determined by Loewe additivity and Bliss independence drug interaction models. These results suggest that the combination of erlotinib with shikonin or its derivatives might be a potential strategy to overcome drug resistance to erlotinib.     

龙葵银消片质量标准的研究

目的建立龙葵银消片的质量控制标准。方法采用薄层色谱法(TLC法)对龙葵银消片中的紫草、山药的主要有效成分进行定性鉴别,并应用高效液相色谱法(HPLC法)测定龙葵银消片中白芷的主要有效成分欧前胡素和异欧前胡素的含量。结果紫草、山药薄层图谱斑点清晰,分离效果良好,专属性强,阴性对照无干扰。HPLC测得的欧前胡素与异欧前胡素分离度良好,阴性对照样品无干扰,欧前胡素在0.112 5～1.800 0μg范围内线性关系良好,r=0.999 9;异欧前胡素在0.096 44～0.964 4μg范围内呈现良好的线性关系,r=0.999 9;样品溶液在室温放置8 h和4℃冷藏放置48 h内比较稳定,平均加样回收率欧前胡素为97.20%(RSD=2.11%,n=6),异欧前胡素为98.06%(RSD=0.90%,n=6)。结论该方法简便、快速,回收率高、专属性好、测定结果准确可靠、重现性好,可用于龙葵银消片的质量标准控制。     

紫草素通过下调c-MYC蛋白的表达抑制白血病NB4细胞的增殖

目的研究紫草素对人白血病NB4细胞增殖的影响及其作用机制。方法 CCK-8法检测NB4细胞增殖。流式细胞术检测细胞周期和凋亡。Western blot检测细胞c-MYC、ERK、p-ERK蛋白表达。用SPSS17.0软件包进行单因素方差分析及t检验。结果 NB4细胞经紫草素处理后,细胞活力受到明显抑制(P0.01);G1期细胞增多(P0.01),G2期和S期细胞减少(P0.01);细胞凋亡率明显增加(P0.01);c-MYC蛋白表达水平明显降低(P0.05),p-ERK水平明显升高(P0.01)。结论紫草素抑制NB4细胞增殖,可能机制是通过下调c-MYC蛋白的表达,EKR信号通路蛋白可能参与了这一过程。     

shBAG3对紫草素杀伤人 U87胶质瘤细胞作用的影响及机制

目的：研究 shBAG3对紫草素杀伤人 U87胶质瘤细胞作用的影响及相关分子机制。方法：紫草素（2μmol／L）对人 U87细胞分别处理0h、4h、8h、12h 和24h 后,应用 Real －time PCR 和 Western blot 方法检测紫草素作用下 U87细胞中 BAG3的表达变化;免疫荧光显微镜下观察紫草素作用下 BAG3在细胞内的表达分布;CCK －8法检测 shBAG3对紫草素降低细胞活力的影响;应用 Western blot 检测 shBAG3联合紫草素作用下U87细胞中 Cytosolic cyto C、caspase －9和 Cleaved caspase －9的表达变化。结果：紫草素作用24h 内 BAG3在mRNA 和蛋白表达上均显著升高。与单独应用紫草素组相比,联合 shBAG3可显著增强紫草素对 U87细胞活力的抑制作用。紫草素作用24h 内 BAG3的表达分布逐渐从 U87细胞的胞浆中转移至线粒体。此外,联合shBAG3可导致 U87细胞浆中 Cytosolic cyto C 和 Cleaved caspase －9的表达显著增加。结论：紫草素杀伤 U87细胞过程中产生的 BAG3高表达可能是紫草素抗胶质瘤过程中的促存活机制之一;联合 shBAG3能够显著增强紫草素对胶质瘤细胞的肿瘤杀伤作用,其机制可能与 BAG3参与调节线粒体凋亡途径有关。     

PEG修饰的紫草素纳米结构脂质载体的制备和体外评价

[目的] 制备一种有长循环效果的聚乙二醇（PEG）修饰的紫草素纳米结构脂质载体,并对其进行理化表征和体外抗肿瘤效果评价。[方法] 采用乳化蒸发-低温固化法制备紫草素纳米结构脂质载体,通过超速离心法检测包封率;通过粒径、多分散指数（PDI）、Zeta电位、透射电镜、差示扫描量热、X射线等对制剂进行表征。采用CCK-8法考察乳腺癌MCF-7细胞的活性,以香豆素-6和Hoechst 33342为荧光探针定量考察细胞摄取行为。[结果] PEG修饰的紫草素纳米结构脂质载体粒径为（19.68±1.25）nm,多分散指数为（0.28±0.68）,Zeta电位为[-（20.27±1.27）]mV。平均包封率为98%,制剂外观圆整,分布均匀。紫草素以无定型物包载于制剂中。紫草素的抗肿瘤作用呈现浓度依赖性,中、高剂量的PEG修饰制剂组抗肿瘤活性明显高于未修饰制剂组和溶液组。细胞摄取实验结果与细胞毒性实验结果一致。[结论] 实验制备的PEG修饰的紫草素纳米结构脂质载体包封率较高,粒径小,体系稳定,具有良好的体外抗肿瘤和细胞摄取效果。