新工艺合成奥美沙坦酯原料药的有关物质及含量测定

目的:建立RP-HPLC法测定奥美沙坦酯原料药含量及其有关物质的方法。方法 :色谱柱为WelchromC8柱(4.6*150,5um),以乙腈-磷酸缓冲盐溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0ml/min,柱温25℃,检测波长256nm。结果:确定了奥美沙坦酯合成中引入的6个杂质以及奥美沙坦酯的峰位置,主峰能与相邻杂质峰较好的分离。杂质含量均小于0.1%。结论:采用反相高效液相色谱方法简准确、快捷,可有效的控制奥美沙坦酯中的有关物质。     

液相色谱-质谱联用鉴定他克莫司的有关物质

采用液相色谱-质谱（LC-MS）联用技术研究他克莫司的有关物质。采用Agilent Eclipse Plus-C₁₈（150 mm × 4.6 mm,3.5 μm）色谱柱,以0.01%甲酸水溶液-乙腈-甲基叔丁基醚为流动相体系,对他克莫司及其强制降解试验样品中的有关物质进行梯度洗脱分离;电喷雾正离子化-四极杆-飞行时间串联质谱法（ESI-Q-TOF/MS）测定各有关物质的母离子及碎片离子的准确质荷比和元素组成,并解析鉴定有关物质的结构。在所建立的条件下,他克莫司与其有关物质分离良好,检测并鉴定出35个主要有关物质,其中2个分别为他克莫司的互变异构体Ⅰ和Ⅱ（他克莫司的有效成分）,3个为美国药典收载的已知杂质,其余30个为新鉴定的未知有关物质。研究结果可为他克莫司发酵生产过程的质量控制提供参考依据。     

结缔组织生长因子通过活化Erk-1/2信号通路促成肌纤维细胞生成

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)协同转化生长因子β1(TGFβ1)促进成肌纤维细胞生成分子机制。方法用TGFβ1预处理大鼠肾间质成纤维细胞(NRK49F),使部分细胞转化为成肌纤维细胞,然后将预处理后的细胞分为对照组,CTGF刺激组,TGFβ1刺激组和PD98059干预组。通过免疫细胞化学双染技术分别检测成肌纤维细胞标志蛋白α平滑肌肌动蛋白(αSMA)和掺入的细胞增殖标志物5溴2'脱氧尿嘧啶(BrdU);并以Western免疫印迹法检测αSMA水平。结果TGFβ1预处理的各组细胞都有胞浆内αSMA染色阳性,CTGF刺激组αSMA蛋白表达均明显高于对照组(P<0.05);但CTGF组部分αSMA阳性细胞核内BrdU阳性率明显高于对照组和TGFβ1组。进一步实验显示CTGF刺激细胞30min能明显诱导细胞内Erk1/2磷酸化,TGFβ1组无此反应。用PD98059阻断Erk1/2磷酸化可以明显抑制CTGF引起的细胞核内BrdU阳性表达和αSMA蛋白表达(P<0.05)。结论CTGF通过Erk1/2信号通路促进TGFβ1诱导的成肌纤维细胞增殖。     

反相高效液相色谱法测定苯磺酸氨氯地平胶囊的含量和有关物质

目的建立测定苯磺酸氨氯地平胶囊中苯磺酸氨氯地平含量及有关物质的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法。方法采用HypersilBDS柱(200 mm×4.6 mm,5μm),以0.01 mol/L磷酸氢二钾溶液(含0.7%三乙胺,磷酸调pH=4.0±0.1)-乙腈(70∶30)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长237 nm。结果苯磺酸氨氯地平峰和相邻杂质峰可达到有效分离(R>1.5)。苯磺酸氨氯地平质量浓度在5.0～50.0μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9,n=5);低、中、高3种质量浓度的平均回收率分别为99.17%,100.03%,99.85%,RSD分别为1.21%,0.87%,1.06%(n=3);方法的精密度和重复性良好,RSD均小于2%。结论该方法准确、简便、快速,适用于苯磺酸氨氯地平胶囊的质量控制。     

小鼠阴道黏膜干细胞生长相关因子的初步研究

目的对小鼠阴道黏膜干细胞培养上清中的细胞因子进行初步鉴定。方法收集稳定传代后的小鼠阴道黏膜干细胞培养上清,进行SDS-PAGE电泳和W estern-b lot检测,鉴定培养上清中阴道黏膜干细胞分泌的细胞因子。结果小鼠阴道黏膜干细胞培养上清中含有一种分子量约为84KD的细胞因子,经W estern-b lot方法检测该细胞因子为干细胞生长因子(HGF)。结论小鼠阴道黏膜干细胞可以分泌有活性的HGF。     

联用技术鉴定与测定硫酸阿托品有关物质

建立高效液相离子对色谱法测定硫酸阿托品的有关物质,并利用LC-MS/MS进行结构鉴定。采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以磷酸二氢钾缓冲液(含庚烷磺酸钠,用磷酸调pH至5.0)-乙腈为流动相进行线性梯度洗脱,对硫酸阿托品及其碱、高温、氧化破坏的有关物质进行分离;并在挥发性流动相条件下通过高分辨LC-TOF/MS测定各有关物质的准确质量和LC-MS/MS二级质谱测定鉴定结构。建立的离子对色谱条件下各有关物质与主成分分离良好,检测到12个主要有关物质,其中6个为欧洲药典已知杂质,6个为国内外文献未见报道的未知杂质,经初步鉴定它们为硫酸阿托品的合成副产物和降解产物。新建立的离子对色谱法适用于硫酸阿托品中有关物质的检查,为硫酸阿托品质量控制和工艺优化提供了参考。     

法莫替丁钙镁咀嚼片有关物质控制工艺研究

目的：对法莫替丁钙镁咀嚼片制备工艺进行系统研究,确定能够控制该产品有关物质的制备工艺。方法：通过分析法莫替丁钙镁咀嚼片处方的组成,找出影响产品有关物质的因素。应用β-环糊精与羟丙基β-环糊精分别包合研究,找出最佳的包合技术,而后采用分别制粒方法,从而解决法莫替丁钙镁咀嚼片有关物质不合格问题。结果：法莫替丁钙镁咀嚼片有关物质不合格是由法莫替丁与氢氧化镁相结合引起的,采用羟丙基β-环糊精包合技术制成的法莫替丁钙镁咀嚼片的有关物质得到了很好的解决。结论：该有关物质控制工艺稳定,可行,可操作性强,可以运用于法莫替丁钙镁咀嚼片的大生产。     

甲状腺癌TGF-β1、Smad4表达及其临床病理意义

目的:研究甲状腺癌组织中转化生长因子β1(TGF-β1)及其相关蛋白Smad4的表达水平并探讨其临床病理意义。方法:采用免疫组织化学ABC法分析TGF-β1及Smad4在甲状腺癌、甲状腺瘤、癌周组织中表达。结果:TGF-β1蛋白在甲状腺癌、甲状腺瘤及癌周组织的阳性表达率分别为77.9%、20.0%、12.5%,TGF-β1蛋白在甲状腺癌的阳性表达率明显高于甲状腺瘤及癌周组织,差异有统计学意义(P&lt;0.05);Smad4在甲状腺癌、甲状腺瘤及癌周组织中的阳性表达率分别为47.1%、80.0%、87.5%,Smad4在甲状腺癌的阳性表达率低于甲状腺瘤及癌周组织,差异有统计学意义(P&lt;0.05)。TGF-β1、Smad4蛋白的阳性表达率与甲状腺癌的组织类型、淋巴结转移有关。结论:甲状腺癌组织中TGF-β1、Smad4的表达改变可能与其发生、发展相关,并促进肿瘤的浸润与转移,联合检测TGF-β1、Smad4蛋白表达可能是预测甲状腺癌患者预后的重要指标。     

LC-MS/MS法鉴定替米沙坦氨氯地平双层片中有关物质

建立LC-MS/MS法对替米沙坦氨氯地平双层片的有关物质进行鉴定。双层片中的替米沙坦层及氨氯地平层分别取样和反相高效液相色谱线性梯度法分析测定,替米沙坦及氨氯地平均与其有关物质分离良好。检测出替米沙坦中14个有关物质峰,对其中主要7个有关物质经二级质谱测定和解析鉴定了它们的结构,同时检测出氨氯地平中2个为英国药典收载的有关物质。     

RP-HPLC法检查单硝酸异山梨酯片的有关物质

目的:建立单硝酸异山梨酯片有关物质检查方法.方法:采用反相高效液相色谱法.色谱条件为:ODS柱,以甲醇-水(25:75)为流动相,检测波长为210 nm.结果:该色谱条件可有效分离单硝酸异山梨酯、2-单硝酸异山梨酯、硝酸异山梨酯及破坏性试验产物.结论:根据原料合成工艺、制剂破坏性试验,建议在单硝酸异山梨酯片有关物质检查中增加其他杂质的考察.