Inhibition of Period1 Gene Attenuates the Morphine-Induced ERK-CREB Activation in Frontal Cortex,Hippocampus, and Striatum in Mice

Objective: Recent studies demonstrated that the Period1 gene (Per1) is involved in behavioral alterations induced by addictive drugs. We explored the effects of inhibiting expression in brain of Per1 on morphine conditioned place preference (CPP) and morphine-induced phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase (ERK) and cAMP-response element binding protein (CREB) in mice. Methods: During the first three sessions of conditioning, the male mice were intracerebroventricularlly (i.c.v.) injected with vehicle or deoxyribozyme 164 (DRz164) which cleaves per1 mRNA before subcutaneous (s.c.) injection morphine. The control group was given i.c.v. injection vehicle and s.c. injection saline instead of morphine. After testing CPP, mice were sacrificed and phosphorylated ERK and CREB in the frontal cortex, hippocampus, and striatum were examined by immunohistochemistry. Results: Mice pretreated with DRz164 did not acquire morphine CPP. Pretreatment with DRz164 significant attenuated the morphine-induced activation of ERK and CREB in the frontal cortex, hippocampus, and striatum. Conclusions: Our results indicated that per1 plays an important role in morphine reward, and ERK–CREB pathway was involved in the effects of per1. We suggested that per1 gene may be a potential treatment target for drug addition.     

八肽胆囊收缩素对吗啡戒断大鼠蓝斑和中脑导水管周围灰质CREB及p-CREB的影响

目的 探讨八肽胆囊收缩素（CCK-8）及其受体拮抗剂对吗啡戒断症状的影响及其相应的信号转导机制。方法 建立吗啡依赖及戒断动物模型,每组6只。应用改良柳田知司法对戒断症状评分,并采用免疫组织化学方法检测大鼠蓝斑和中脑导水管周围灰质内CREB及p-CREB的变化。结果 腹腔及侧脑室注射CCK-8,CCK1及CCK2受体拮抗剂均可明显降低戒断症状评分;吗啡依赖后蓝斑和中脑导水管内p-CREB明显增高,戒断后蓝斑内p-CREB水平较依赖组进一步增高,而中脑导水管内p-CREB却较依赖组下降。腹腔及侧脑室注射CCK-8,CCK1及CCK2受体拮抗剂均可逆转戒断后中脑导水管内p-CREB的降低;腹腔及侧脑室注射CCK1 及CCK2受体拮抗剂可逆转戒断后蓝斑内p-CREB的升高,而CCK-8却对蓝斑内p-CREB的表达无明显影响。结论 CCK-8可通过对蓝斑和中脑导水管内p-CREB的调节减轻吗啡戒断症状,且表现出明显的脑区特异性。     

低频电针降低神经病理痛大鼠背根神经节p-CREB的表达

目的:观察低频脉冲电针对慢性神经病理痛大鼠背根神经节磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)表达的影响.方法:36只成年雄性SD大鼠,随机分为空白对照组、假手术组、模型对照组和电针治疗组,每组9只.模型对照组和电针治疗组采用右侧慢性坐骨神经结扎的方法,建立慢性神经病理痛模型.电针组大鼠给予低频电针刺激双侧"夹脊...     

慢性酒精中毒大鼠学习记忆障碍与海马p-CREB表达

目的 通过建立慢性酒精中毒致大鼠学习记忆障碍模型,定量分析大鼠海马各亚区磷酸化环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(p-CREB)的分布与表达.方法 60只成年雄性SD大鼠随机平均分为4组:对照组、低浓度染毒组(LAA组)、中剂浓度染毒组(MAA组)、高浓度染毒组(HAA组).对照组以生理盐水灌胃,LAA组、MAA组和HAA组分别按照每天每只5ml/kg、10ml/kg、15ml/kg标准用55%酒精灌胃造模.通过Morris水迷宫检测大鼠学习记忆损伤情况,采用免疫组织化学SABC染色法检测海马CA1、CA3区及齿状回p-CREB的分布及表达.在Olympus显微镜及图像分析系统下,测定海马p-CREB阳性细胞数.结果 慢性酒精中毒后LAA组、MAA组和HAA组大鼠海马各亚区p-CREB免疫阳性细胞数量逐渐减少.对照组海马p-CREB 阳性反应物分布较多,以CA3和CA1区着色最深,齿状回颗粒细胞层未见表达;LAA组、MAA组和HAA组海马CA1区和CA3区p-CREB免疫阳性细胞数[分别为(85.45±4.32)个,(74.42±8.94)个,(73.56±7.64)个和(245.29±15.36)个,(206.90±15.37)个,(201.96±11.37)个]与对照组海马CA1区和CA3区p-CREB免疫阳性细胞数[分别为(90.54± 6.38)个,(273.79±16.87)个]比差异有统计学意义( P <0.05),MAA组和HAA组海马CA1区和CA3区p-CREB免疫阳性细胞数与LAA组比差异有统计学意义( P <0.05).结论 高浓度白酒灌胃6周,大鼠学习记忆功能有不同程度损伤,各染毒组大鼠海马各亚区p-CREB有不同程度表达,提示p-CREB在大鼠慢性酒精中毒学习记忆障碍中可能起重要作用.     

吡那地尔对缺血缺氧PC12细胞凋亡及p-CREB信号通路的影响

目的观察KATP通道开放剂吡那地尔对缺血缺氧PC12细胞凋亡的影响,探讨KATP通道开放剂对缺血缺氧PC12细胞凋亡的信号转导机制。方法取传代后3d的PC12细胞,分为正常对照组、缺血对照组、吡那地尔预处理组、吡那地尔+格列吡嗪处理组共4组。采用Annexin-VFITC/PI双染流式细胞分析仪检测凋亡率,应用Western-blotting检测p-CREB蛋白表达水平,观察KATP开放剂对缺血缺氧PC12细胞凋亡的保护作用。结果与缺血对照组相比,吡那地尔预处理组PC12细胞凋亡率明显降低(p0.05),吡那地尔预处理组PC12细胞p-CREB蛋白表达增加(p0.05)。结论 KATP通道开放剂吡那地尔能明显降低缺血缺氧后PC12细胞凋亡,增加p-CREB蛋白表达,CREB可能是KATP通道开放剂减少缺血缺氧后PC12细胞凋亡的途径之一。     

人参皂苷Rg1促智信号转导途径研究

目的探究人参皂苷Rg1(G-Rg1)促智信号转导途径,观察G-Rg1对环腺苷酸(cAMP)、磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)和磷酸二酯酶(PDE)的影响。方法正常成年大鼠口服G-Rg120mg.kg-1,连续3d后,分别采用酶联免疫法和免疫组织化学法检测脑区cAMP和p-CREB水平的变化。体外给予G-Rg1后,检测海马匀浆液中PDE活性的变化。结果大鼠口服G-Rg1后,海马组织cAMP水平升高,海马和脑皮质p-CREB增强,G-Rg1降低海马PDE活性,抑制cAMP降解。结论G-Rg1能提高脑内cAMP、p-CREB水平,抑制PDE活性,表明G-Rg1可以通过激活cAMP-PKA-CREB信号通路发挥促智作用。     

多次氯胺酮麻醉对未成年大鼠学习记忆能力和磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白的影响

目的 探讨多次氯胺酮麻醉对未成年大鼠记忆能力的影响及其可能机制.方法 21日龄筛选合格SD大鼠64只,分为氯胺酮组(包括k1和k7两个亚组:氯胺酮75 mg/kg腹腔注射,每日1次,连续注射7d,分别于第8天和第14天进行首次训练,一部分训练结束1 h取材,一部分3d后再次训练)、生理盐水组(注射等体积的生理盐水)、假训练组(取生理盐水组平均训练时间、次数训练,训练结束1 h取材)、正常组(迷宫中适应5min取材).采用Y型迷宫进行记忆能力测试,应用免疫组化法检测海马磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白(p-CREB)的表达.结果 k1组学习次数、时间[分别为(51.88±15.93)次,(53.38±19.03)rain]高于生理盐水组[分别为(25.50±6.78)次,(21.88±8.11)rain](P<0.05),k1组记忆保持率、p-CREB蛋白阳性神经元[分别为(61.25±6.41)%,(28.62±2.92)个]低于生理盐水组[分别为(87.50±13.89)%,(71.13±7.23)个](P<0.05);而k7组[分别为(22.75±7.65)次,(24.13±9.01)min,(87.50±10.35)%,(71.00±6.93)个],与生理盐水组相比差异无统计学意义.正常组p-CREB蛋白阳性神经元[(7.75±1.28)个]低于生理盐水组和氯胺酮组(P<0.05),但与假训练组[(7.75±1.49)个]相比差异无统计学意义.结论 多次氯胺酮麻醉可短期影响未成年大鼠记忆能力,其机制可能与抑制海马p-CREB表达有关.     

邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯对小鼠睾丸损伤及 p-CREB蛋白 表达的影响

目的：探讨邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯（DEHP）对小鼠睾丸损伤及睾丸组织磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（p-CREB）表达的影响。方法：选用ICR初断乳雄性小鼠40只,随机分为对照组（玉米油）和DEHP染毒组（250、500、1 000 mg/kg）,经口灌胃,1次/天,6天/周,连续8周,于末次染毒24 h后处死动物,称取睾丸、附睾质量计算脏器系数并进行精子计数,检测睾丸组织形态学改变,采用免疫组织化学SP法检测睾丸组织p-CREB蛋白的表达。结果：与对照组相比,250、500和1 000 mg/kg DEHP染毒组小鼠附睾脏器系数及精子计数均明显降低（P < 0.05）,1 000 mg/kg组小鼠睾丸系数亦明显下降,差异有统计学意义（P < 0.05）。各DEHP染毒组小鼠睾丸曲细精管上皮细胞出现层次减少、排列疏松、紊乱等改变;随着染毒剂量升高,睾丸组织中p-CREB蛋白表达下降,DEHP 500和1 000 mg/kg组较对照组差异有统计学意义（P < 0.05）。结论：DEHP可致小鼠曲细精管生精上皮细胞损伤、精子数下降、p-CREB蛋白表达减少。