人内皮抑素-白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达与鉴定

目的构建编码人内皮抑素-白蛋白的融合基因,并在毕赤酵母(pichia pastoris)中获得高效表达。方法通过重叠延伸PCR的方法 ,构建编码人内皮抑素-白蛋白的融合基因,并克隆至pGEM-T载体中,测序正确后,将其亚克隆至酵母表达载体pPIC9中,然后将鉴定正确的重组表达载体pPIC9/ES-HSA线性化后转化入GS115宿主菌。采用原位双膜法筛选高表达菌株,对高表达菌株进行扩大培养,将表达上清液盐析后分别经阳离子交换层析、阴离子交换层析和亲和层析纯化,获得了重组融合蛋白,采用MTT法测定融合蛋白中内皮抑素的活性。结果成功构建了人内皮抑素-白蛋白融合基因和重组表达质粒pPIC9/ES-HSA,并筛选到表达较为理想的重组菌株pPIC9/ES-HSA/GS115,经甲醇诱导表达后纯化,融合蛋白的纯度达到92%以上,并具有抑制人血管内皮细胞系ECV-304细胞的增殖活性。结论本方法可成功获得具有人内皮抑素生物活性的重组人内皮抑素-人血清白蛋白融合蛋白。     

Effect of Endostar Combined with Gemcitabine on the Mouse Model of Human Pancreatic Cancer

IntroductionPancreatic canceris an unsolved health problem.The 5-year survival rateis only 3%and median over-all survival is<6 months,a situationthat has remained unchangedfor the past three decades.Surgical re-sectionis the only potentially curative ther…     

重组人血管内皮抑素联合顺铂体外干预人胃癌细胞生长的研究

目的研究重组人血管内皮抑制素（恩度）联合顺铂对人胃癌细胞株BGC823和SGC7901增殖及凋亡的影响,并探讨其抑制增殖及诱导凋亡的机制。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度顺铂单药（单药组）及其与恩度联合应用（联合组）对BGC823和SGC7901细胞的增殖抑制率;采用流式细胞术分析凋亡细胞比例;采用Westernblot法分析增殖相关蛋白Ki-67及凋亡相关蛋白Bcl-2表达的变化。结果联合组对BGC823和SGC7901细胞的抑制率明显高于单药组;流式细胞术结果表明,正常对照组、单药组和联合组细胞的早期凋亡率依次增加;与单药组比较,联合组Ki-67、Bcl-2基因（蛋白）表达率显著降低。结论与顺铂单独应用相比,恩度联合顺铂对BGC823和SGC7901细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡能力均明显增强。     

动脉内重组人血管内皮抑制素联合化疗栓塞术治疗原发性肝癌的疗效及CT灌注参数变化

目的 探讨动脉内重组人血管内皮抑制素（恩度）联合化疗栓塞术（TACE）治疗原发性肝癌（PHC）前后CT灌注参数变化.方法 选取PHC患者40例,随机分为观察组及对照组各20例,对照组给予单纯TACE,观察组给予动脉内恩度联合TACE术,观察术前及术后1个月的CT灌注参数变化.结果 2组间客观缓解率（RR）及不良反应发生率无显著差异（P＞0.05）,但观察组临床受益率（CBR）显著高于对照组（P＜0.05）;术后,观察组患者血流量（BF）、肝动脉灌注值（ALP）、肝脏灌注指数（HPI）参数较术前显著下降（P＜0.05或P＜0.01）,且显著优于对照组（P＜0.05）.结论 动脉内恩度联合TACE术治疗PHC患者能显著提高CBR,不良反应未见显著增加,且CT灌注参数变化显著优于单纯TACE术.     

按需腹腔灌注重组人血管内皮抑制素治疗胃癌腹水的临床观察

目的：观察重组人血管内皮抑制素按需腹腔给药治疗胃癌腹水的疗效,并评价重组人血管内皮抑制素腹腔治疗的耐受性和安全性。方法：5例口服氟尿嘧啶类药物化疗过程中的晚期胃癌患者,患者病灶稳定,但出现腹水,引流腹腔内积液后,腹腔灌注重组人血管内皮抑制素30mg。根据患者腹胀程度,按需引流腹水并腹腔灌注重组人血管内皮抑制素治疗,评价疗效、生活质量、腹水蛋白丢失量及不良反应。结果：5例患者均可进行客观疗效及安全性评价,全组患者腹水生成量减少,生活质量改善,腹水蛋白丢失量减少,无药物相关不良反应。结论：在胃癌实体病灶增殖控制的患者中,按需腹腔灌注重组人血管内皮抑制素能很好地控制恶性腹水、减轻症状、改善生活质量,安全性好。     

Pretreatment serum endostatin as a prognostic indicator in metastatic gastric carcinoma

Endostatin is the C-terminal antiangiogenic fragment of the extracellular matrix protein collagen XVIII, and is generated by tumor-derived proteases. The presence of serum endostatin in patients with gastric cancer has not been reported. The authors assessed the serum levels of endostatin in patients with gastric carcinoma and evaluated their association with the levels of vascular endothelial growth factor (VEGF) and the clinical outcome. A total of 107 patients with gastric cancer were included in the study. Pretherapeutic serum levels of endostatin and VEGF were measured using an ELISA, and compared with those in 23 healthy controls. The serum levels of endostatin and VEGF were higher in gastric cancer patients than in healthy controls (endostatin, 70.1 +/- 16.6 vs. 52.2 +/- 6.2 ng/mL [p < 0.001]; VEGF, 55.1 +/- 7.6 vs. 32.1 +/- 2.4 ng/mL [p < 0.001]; mean +/- SD). Serum endostatin levels were significantly associated with the presence of distant metastases (r = 0.556, p < 0.001) and VEGF levels (r = 0.335, p < 0.001), but not with the depth of tumor invasion, differentiation, or regional lymph node status. A serum endostatin level above the 75th percentile of the distribution for the patients (79.2 ng/mL) was associated with a poor outcome (last follow-up at 42 months; median survival time, 9 vs. 20 months [log-rank, p = 0.017]; median time to progression, 5 vs. 10 months [log-rank, p = 0.022]) in the patients with metastatic gastric cancer. The results suggest for the first time that an elevated serum level of endostatin at the diagnosis of metastatic gastric cancer could be predictive of a poor outcome.     

内皮抑素基因治疗对小鼠肿瘤组织内新生血管形成抑制作用的实验研究

目的:研究腺病毒介导的内皮抑素基因治疗对小鼠肺肿瘤组织内部血管的抑制作用。方法:皮下注射2×106LLC细胞至C57BL/6小鼠背部建立小鼠肺癌种植瘤模型,2周后瘤内注射2×109pfu内皮抑素腺病毒载体治疗。免疫组化检测内皮抑素在肿瘤组织的原位表达,观察治疗对肿瘤生长的影响。免疫组化标记计数肿瘤内部血管密度,观察治疗对肿瘤血管的影响。结果:Admendostatin治疗从第2周起就可明显减缓肿瘤生长速度,P<0.05。免疫组化显示治疗组肿瘤组织内皮抑素蛋白强阳性表达,对照组阴性或痕量表达。Admendostatin治疗组、空载体对照组和阴性对照组肿瘤血管密度用CD31和CD105抗原标记分别为37.5±4.6、65.2±5.8、68.5±4.5和10.5±3.2、39.7±5.6、42.4±4.8。治疗组与两对照组相比差异有统计学意义,P<0.05;空载体对照与阴性对照相比差异无统计学意义,P>0.05。结论:腺病毒介导的内皮抑素基因治疗可抑制小鼠皮下种植瘤的生长,其作用机制是抑制肿瘤内部新生血管的生成,应用CD105抗原标记可准确反映新生血管的变化。     

重组人血管内皮抑制素窗口期联合化疗治疗晚期大肠癌的临床疗效

目的:观察重组人血管内皮抑制素(恩度)窗口期联合化疗治疗晚期大肠癌的临床疗效。方法:选取2014年6月至2018年6月于贵州省肿瘤医院就诊的不可手术的晚期大肠癌患者120例,随机分为重组人血管内皮抑制素窗口期联合化疗组(试验组)及重组人血管内皮抑制素常规方案联合化疗组(对照组)各60例。试验组方案:重组人血管内皮抑制素15 mg/d,d1～d7,间歇7天重复,用药14天为1个周期,化疗于每周期使用重组人血管内皮抑制素第5天(窗口期)开始;对照组方案:重组人血管内皮抑制素15 mg/d,d1～d14,间歇7天重复,21天为1个周期,化疗于重组人血管内皮抑制素治疗第1天开始;两组均采用m FOLFOX6或FOLFIRI方案化疗。对比分析两组的临床疗效。结果:1)试验组与对照组客观有效率(objective response rate,ORR)分别为25.0%和18.3%,疾病控制率(disease control rate,DCR)分别为80.0%和73.3%,差异均无统计学意义(P=0.375,P=0.388);2)试验组与对照组1、2、3年生存率分别为(69.6%vs. 62.5%)(...     

人血管内皮抑素腺病毒注射液抑制大鼠脉络膜新生血管实验研究

目的:探讨人血管内皮抑素腺病毒注射液(Ad-Es)玻璃体注射对半导体激光诱导的BN(Brown Norway)大鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)的抑制作用.方法: 雄性BN大鼠30只,右眼眼底采用激光光凝建立CNV模型,按随机数字表法分为三组:单次给药组、重复给药组及生理盐水对照组.光凝后21d,单次给药组玻璃体腔内注射Ad-Es 0.01mL;重复给药组玻璃体腔内注射Ad-Es 0.01mL,并于1wk后重复给药;生理盐水对照组玻璃体腔内注射生理盐水0.01mL.观察各组末次给药后7d荧光眼底血管造影荧光素渗漏情况,应用激光共焦显微镜下脉络膜血管平铺法测量各组CNV面积,光镜下观察组织细胞学变化,免疫组织化学检测CNV组织中CD105的表达.结果:FFA造影显示给药组渗漏发生率明显低于生理盐水对照组,重复给药组渗漏发生率低于单次给药组,差异均有统计学意义(P<0.05);激光共焦显微镜下CNV定量分析显示给药组CNV面积显著低于对照组,重复给药组CNV面积低于单次给药组,差异均有统计学意义(P<0.05).光镜下光凝部位新生血管内皮细胞数,给药组明显低于对照组,重复给药组低于单次给药组;CNV组织中CD105的表达,给药组明显低于生理盐水组,重复给药组低于单次给药组.结论:Ad-Es可以有效抑制动物模型的CNV生成,重复给药组抑制效果优于单次给药组,为治疗CNV提供了一种可能的新途径.     

乳化溶剂挥发法制备重组人血管内皮抑制素缓释微球

目的:制备重组人血管内皮抑制素(恩度)缓释微球,并对微球理化性质及体外释放行为进行初步考察。方法:采用乳化溶剂挥发法(W/O/O)制备恩度载药微球;对微球载药量、粒径、突释、体外释放速率及降解行为进行考察,同时利用凝胶电泳初步评价体外释放过程中恩度的完整性。结果:增加聚乳酸-羟基乙酸嵌段共聚物(PLGA)中羟基乙酸的比例、提高PLGA浓度、降低内水相体积、提高理论载药量均增加微球载药能力;降低内水相体积、提高分散速度均减小突释。增加PLGA中羟基乙酸的比例,30 d时累积释放可增加到65%。降解实验说明释放初期微球主要以扩散方式释放恩度,释放后期主要表现为微球的降解。凝胶电泳结果表明微球制备过程对蛋白质聚集性的影响不大。结论:用PLGA作为载体材料制备微球,可以延缓恩度的释放。