自体特异性免疫效应淋巴细胞抑制转HBV基因小鼠HBV复制的研究

目的:探讨经乙肝病毒（HBV）转基因小鼠树突状细胞（DCs）体外诱导的特异性免疫效应细胞（IECs）对自体HBV复制的影响。方法:从转HBV基因小鼠体内提取DCs,体外诱导为成熟DCs,与淋巴细胞共培养,诱导为特异性IECs,将其经阴茎背静脉注入小鼠体内。实验分为2组:生理盐水（NS）组、IEC组,观察6个时间点:0 h、2、4、6、8周和12周;通过生化检测肝功能,PCR检测血清中HBV DNA水平、ELISA检测细胞因子、免疫组化检测肝组织内的HBsAg 和HBcAg,评估IECs对小鼠体内HBV复制的影响。结果:IEC组小鼠于6、8周和12周时,肝功能明显改善,HBV DNA水平明显降低,HBsAg和HBcAg明显减少,且均优于NS组（P﹤0.05）。结论:特异性IECs可修复转HBV基因小鼠肝脏功能、抑制HBV复制,相关的细胞因子参与其作用。     

人工发酵虫草菌粉对糖尿病大鼠肾脏IL-17、p38 MAPK和NF-κB表达的影响

目的: 探讨人工发酵虫草菌粉对糖尿病大鼠肾脏白细胞介素17（IL-17）、p38 MAPK和NF-κB表达的影响。方法:雄性SD大鼠45只,随机选择15只为正常对照组（NC组）,其余30只大鼠通过一次性尾静脉注射链脲佐菌素（STZ,45 mg/kg）诱导建立糖尿病模型,造模成功的28只大鼠随机分为糖尿病组（DM组）和人工发酵虫草菌粉治疗组（虫草组,1 g/(kg·d）,每组各14只。虫草组给予每日1次人工发酵虫草菌粉溶液灌胃,NC组和DM组给予等体积生理盐水灌胃。18周末取材。计算肾重指数,检测血尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、24 h尿微量白尿蛋白（24 h UMA）。HE染色观察肾脏组织形态学变化;Masson染色观察肾脏纤维化程度;电镜观察各组大鼠肾小球超微结构改变;免疫组化法比较各组大鼠肾脏IL-17、p38 MAPK、NF-κB的表达水平。结果:(1) DM组肾重指数、BUN、Scr、24 h UMA较NC组明显升高,虫草组肾重指数、BUN、Scr、24 h UMA较DM组明显降低。(2) DM组肾脏纤维化明显,虫草组大鼠肾脏纤维化较DM组明显减轻。(3)电镜下,DM组大鼠肾小球毛细血管基底膜增厚,部分足细胞突起融合,系膜细胞增生;虫草组大鼠肾小球病变较DM组明显减轻。(4) DM组肾脏IL-17、p38 MAPK、NF-κB表达均显著上升,人工发酵虫草菌粉干预降低了肾脏IL-17、p38 MAPK、NF-κB的表达。结论:肾脏IL-17、p38 MAPK和NF-κB表达增多在糖尿病肾病发病过程中起到重要作用。人工发酵虫草菌粉可能通过减少肾脏IL-17、p38 MAPK、NF-κB的表达来改善糖尿病肾病。     

基于安德森模型的多重慢病患者就医机构选择及影响因素研究

背景　近年来,多重慢病现象严重。探究多重慢病患者就医机构选择及其影响因素,有利于引导多重慢病患者有序就医,进而推动有序就医格局的形成和医疗卫生资源的优化。目的　了解多重慢病患者就医机构选择及其影响因素,为推动分级诊疗制度和合理配置卫生资源提供参考依据。方法　于2019年8-11月,基于安德森健康行为模型,利用中国家庭追踪调查2016年数据,根据研究需要筛选出患有2种及以上慢性病的成人样本（n=666）,通过前倾因素（性别、年龄、婚姻状况、文化程度）,使能因素（户口性质、家庭成员数、年收入、医疗保险、照护人员、看病点满意度、看病点水平）,需求因素（健康状况、健康变化情况、因病住院、两周不适）建立影响多重慢病患者就医机构选择的多因素Logistic回归模型。结果　被调查的666例多重慢病患者中,83例（12.5%）以诊所为一般就医机构,71例（10.7%）以社区卫生服务站或村卫生室为一般就医机构,104例（15.6%）以社区卫生服务中心或乡镇卫生院为一般就医机构,58例（8.7%）以专科医院为一般就医机构,350例（52.6%）以综合医院为一般就医机构。不同年龄、户口性质、家庭成员数、年收入、医疗保险、看病点水平、因病住院情况的多重慢病患者就医机构选择情况比较,差异有统计学意义（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果表明：前倾因素中的年龄变量,使能因素中的户口性质变量、家庭成员数变量、年收入变量、医疗保险变量、看病点水平变量,需求因素中的因病住院变量是影响多重慢病患者就医机构选择的因素（P<0.05）。结论　应完善区域卫生规划,通过网格化划分服务范围合理配置卫生资源以满足多重慢病患者就诊需求;提高基层医疗卫生机构服务能力,积极转变卫生服务提供模式,为多重慢病患者提供优质高效的医疗卫生服务,吸引多重慢病患者基层首诊;提高多重慢病患者的医疗保障力度,为低收入患者和重点人群形成全方位、多层次的社会保障网络体系;加大宣传教育,使多重慢病患者树立科学就医观念以改变传统就医模式,推动分级诊疗制度的实施。     

不同血清型腺相关病毒载体转染小鼠视网膜后的表达效率

目的:研究不同血清型腺相关病毒 (adeno-associated virus,AAV) 载体介导的外源基因在视网膜中的表达效率, 同时比较AAV载体和两种眼科常用启动子组合后转染小鼠视网膜的表达效率高低,为视网膜色素变性基因治疗选择合适的AAV载体与启动子提供依据。方法:AAV病毒根据衣壳蛋白不同可分为不同血清型,本课题选取视网膜疾病基因治疗中常用的AAV2/2、AAV2/5、AAV2/8和AAV2/9四种血清型AAV载体,并以绿色荧光蛋白 (green fluorescent protein, GFP) 作为报告基因,用GFP的表达强度判断AAV载体介导的外源基因在视网膜中的表达效率。AAV载体纯化后滴度为1.00×10 ¹³ mg/L,注射1 μL至C57BL/6J小鼠视网膜下腔, 于2周取眼球做成冰冻切片,在共聚焦显微镜下观察 GFP在小鼠视网膜各层的表达情况。选取在感光细胞内特异性表达最强的AAV2/8于第4周取眼球冰冻切片继续观察是否能持续稳定表达。随后选取眼科基因治疗最常用的广谱启动子CMV和由CMV增强子与鸡β-肌动蛋白启动子组成的CAG启动子,并构建AAV2/8-GFP-CMV和AAV2/8-GFP-CAG两种不同启动子的病毒载体注射至视网膜下腔,于2周取眼球做成冰冻切片,在共聚焦显微镜下观察不同启动子的AAV2/8在小鼠视网膜各层的表达情况。结果: 注射AAV-GFP后未见典型的术后细菌感染及明显免疫反应。AAV2/2、AAV2/5、AAV2/8和AAV2/9四种血清型AAV载体视网膜下腔注射2周后,AAV2/8和AAV2/9在小鼠视网膜的GFP绿色荧光明显,说明这两种AAV载体转染小鼠视网膜后的表达效率高,而在这两种血清型中,AAV2/8的GFP绿色荧光主要集中在感光细胞内,AAV2/9 在视网膜全层均有表达,说明AAV2/8对视网膜感光细胞特异性更强。对AAV2/8的进一步实验表明在视网膜下腔注射4周后小鼠视网膜的GFP绿色荧光明显,说明AAV2/8载体介导的外源基因能在体内稳定表达。使用CMV启动子时GFP在感光细胞与视网膜色素上皮细胞均有表达,而使用CAG启动子时GFP主要在感光细胞表达。结论:视网膜下腔注射AAV病毒载体可在视网膜细胞内稳定表达报告基因;AAV2/2、AAV2/5、AAV2/8和AAV2/9四种血清型AAV载体中,AAV2/8和AAV2/9在视网膜表达能力最强,AAV2/8对视网膜感光细胞特异性最好;CMV和CAG两种启动子,CAG启动子对感光细胞特异性更高。     

SBi4211通过抑制S100B/RAGE表达减轻gp120诱导的中枢神经损伤

目的 研究S100B 抑制剂SBi4211（heptamidine）在人类免疫缺陷病毒-1（HIV-1）包膜蛋白gp120损伤中枢神经系统的作用。方法 通过U251细胞和SH-SY5Y细胞建立非接触式星形胶质细胞-神经元共培养体系,由gp120蛋白处理U251细胞激活神经炎症反应造成神经元损伤,体外水平探讨SBi4211在gp120诱导的中枢神经毒性中的作用;体内实验中,以8月龄gp120转基因小鼠模拟HIV相关神经认知障碍（HAND）模型,实验分为对照组、gp120组以及gp120+SBi4211组（SBi4211处理组）。采用CCK-8、流式细胞术检测神经元活性及凋亡情况,ELISA检测S100B及炎症因子IL-6、TNF-α表达水平,Western blot和免疫组织化学染色分析RAGE、GFAP、NeuN、Syn、MAP-2蛋白表达情况。结果 体外实验结果显示SBi4211可以显著抑制gp120刺激后U251细胞S100B、RAGE的表达（P<0.001）,降低炎症因子iNOS、IL-6和TNF-α的表达水平（P<0.001）,维持神经元相关标记蛋白NeuN、Syn的表达（P<0.001）。体内实验结果显示SBi4211显著降低gp120转基因小鼠S100B、RAGE表达及炎症水平（P<0.05）,并且抑制脑内星形胶质细胞活化,保护神经元的完整性（P<0.05）。结论 SBi4211可能通过下调S100B/RAGE表达,抑制gp120引发的神经炎症反应,继而阻断gp120的中枢神经毒性作用。     

慢性阻塞性肺疾病住院患者医院感染的卫生经济学评价

目的 研究医院感染(NI)对慢性阻塞性肺疾病患者住院费用的影响。方法 选取某三级甲等医院呼吸内科病区118例发生NI的慢性阻塞性肺疾病住院患者作为病例组,采用1∶1条件配比非感染病例作为对照组,比较两组患者的一般情况,慢性阻塞性肺疾病对两组患者的住院天数及住院费用的影响。结果 慢性阻塞性肺疾病发生NI患者住院天数延长,住院费用增加,P<0.01;各分项费用中除其他费用外,两组患者花费差异均具有统计学意义P<0.01。结论 慢性阻塞性肺疾病患者NI延长住院时间,增加住院费用。采取有效措施控制NI将会产生良好的经济效益和社会效益。     

柴胡疏肝散加减治疗慢性萎缩性胃炎肝胃不和证的Meta分析*

目的系统评价柴胡疏肝散加减治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)肝胃不和证的临床疗效以及安全性。方法 检索Pubmed,Web of Science,Cochrane Library,CNKI,VIP和万方数据库,纳入所有柴胡疏肝散加减治疗慢性萎缩性胃炎肝胃不和证的临床随机对照试验(RCTs),检索时间为建库至2019年10月1日,采用RevMan5.3软件进行Meta分析。结果 最终纳入11项研究,共1 068例患者。Meta分析结果显示:与常规西药治疗相比,柴胡疏肝散能有效提高肝胃不和型萎缩性胃炎患者的临床总有效率[RR=1.25,95%CI(1.19,1.33),P<0.000 01]、症状疗效总有效率[RR=1.57,95%CI(1.30,1.89）,P<0.000 01]及血清胃泌素G17水平[MD=3.61,95%CI(2.89,4.33),P<0.000 01],并能改善胃粘膜萎缩[MD=-1.53,95%CI(-1.93,-1.12),P<0.000 01]、肠上皮化生[MD=-0.79,95%CI(-0.96,-0.63),P<0.000 01]、异型增生度[MD=-0.69,95%CI(-0.84,-0.55),P<0.000 01]的病理检查积分,2组疗效差异具有统计学意义。结论 柴胡疏肝散加减治疗肝胃不和型慢性萎缩性胃炎疗效优于常规西药治疗。     

黄芪多糖对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的影响及其机制

探讨黄芪多糖（APS）对人肺癌顺铂（DDP）耐药A549/DDP细胞耐药性的影响,并阐明其可能的作用机制。     

血清LP-PLA2、S100B、炎性蛋白与ICU老年骨科术后患者谵妄发生及预后的关系分析

目的探究血清脂蛋白相关磷脂酶A2（LP-PLA2）、S100B蛋白（S100B）、C反应蛋白（CRP）与重症加强护理病房（ICU）老年骨科患者术后谵妄（POD）发生及预后的关系。方法选取ICU老年骨科手术患者97例作为研究对象,根据术后48 h是否发生谵妄分为POD患者24例（观察组）,术后未发生谵妄患者73例（对照组）。比较两组血清LP-PLA2、S100B、CRP水平,采用接收者操作特征（ROC）曲线及ROC曲线下面积（AUC）分析血清LP-PLA2、S100B、CRP预测POD发生的截断值、敏感度、特异度,比较观察组治疗前后血清LP-PLA2、S100B、CRP水平及不同血清水平患者临床疗效总评量表（CGI-SI）、谵妄严重程度（DRS）评分,采用Pearson分析血清LP-PLA2、S100B、CRP与CGI-SI、DRS评分的关系。结果观察组出术后恢复室前、术后24 h血清LP-PLA2、S100B、CRP水平高于对照组（P<0.05）;预测POD发生的AUC：术后24 h CRP＞术后24 h LP-PLA2＞出术后恢复室前CRP＞术后24 h S100B＞出术后恢复室前LP-PLA2＞出术后恢复室前S100B（P<0.05）;术后24 h LP-PLA2、S100B、CRP联合预测POD的AUC大于任何单一指标（P<0.05）;观察组治疗后血清LP-PLA2、S100B、CRP水平低于治疗前（P<0.05）;血清LP-PLA2、S100B、CRP高表达者CGI-SI、DRS评分高于低表达者（P<0.05）;血清LP-PLA2、S100B、CRP与CGI-SI、DRS评分呈正相关（P<0.05）。结论ICU老年骨科术后POD患者血清LP-PLA2、S100B、CRP呈高表达,可预测POD的发生风险,并与患者病情、预后有关。     

miRNA132在抑郁症患者及慢性不可预知温和应激抑郁模型大鼠中的表达

目的观察首发抑郁症患者外周血及慢性不可预知温和应激(CUMS)抑郁模型大鼠血液和前额叶皮层中miRNA132的表达水平。方法以2017年3月至2018年5月在杭州市第七人民医院精神科门诊治疗的首发抑郁症患者(抑郁组)41例及同期招募的健康志愿者(对照组)31例为研究对象,采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分评估抑郁症患者严重程度。雄性SD大鼠24只,采用配对比较法随机分为对照组和CUMS组,每组12只;分别用糖水偏好实验和强迫游泳实验检测大鼠抑郁样行为,ELISA法检测大鼠血浆皮质酮水平。采用实时荧光定量PCR法检测受试者外周血白细胞中和大鼠血液及前额叶皮层中miRNA132表达水平。结果抑郁症患者外周血白细胞miRNA132水平为2.37±0.36,明显高于对照组的1.34±0.16(t=2.355,P=0.0213);抑郁症组患者外周血白细胞miRNA132表达水平与HAMD17得分呈显著正相关(P=0.0004,r_s=0.5303,n=41)。CUMS组大鼠不动时间为(72.67±2.95)s,明显多于对照组的(40.00±5.49)s(t=2.366,P=...