补肾益气方药左归丸和益气聪明汤对老年大鼠学习记忆能力及相关基因表达的影响

目的:观察补肾方药(左归丸)、益气方药(益气聪明汤)及两方合用(合剂)对老年大鼠空间学习能力及学习记忆相关基因表达变化的影响,并探索相关表观遗传酶的变化。方法:以自然衰老(24月龄) SD雄性大鼠为动物模型,随机分为老年组,左归丸组(12. 12 g·kg~(-1)),益气聪明汤组(10. 18 g·kg~(-1)),合剂组(11. 15 g·kg~(-1))和老年皮质酮(glucocorticoid,GC)拮抗组(5×10-3g·kg~(-1)),另设青年组(同品系5月龄)。采用Morris水迷宫法观察各组大鼠空间记忆能力,激光共聚焦法观察各组大鼠大脑海马区乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)与甲基化Cp G岛结合蛋白2(methyl Cp G binding protein 2,MeCP2)的共定位情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织HDAC2,组蛋白乙酰转移酶1(histone acetyltransferase 1,HAT1),糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR),突触蛋白I(synapsin,Syn-1)表达变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测HDAC2 mRNA的表达及各药物对上述指标异常变化的改善作用。结果:与青年组(正常组)比较,老年组(模型组)大鼠潜伏期显著延长(P 0. 05),穿越平台次数显著减少(P 0. 05);与老年组(模型组)比较,左归丸组、益气聪明汤组大鼠潜伏期显著缩短(P 0. 05),穿越平台次数有所增加。与青年组比较,老年组大鼠HDAC2蛋白与mRNA表达显著增多(P 0. 05,P 0. 01),且在细胞核内与MeCP2的共表达明显增多; HAT1,GR和Syn-I表达显著降低(P 0. 05,P 0. 01)。各给药组均能不同程度改善上述指标的异常变化,但益气方药以及两方合剂对HAT1无改善作用。结论:补肾方药左归丸、益气方药益气聪明汤可通过增加老年大鼠学习记忆相关蛋白GR,Syn-1与表观遗传修饰酶HAT1的表达,降低HDAC2的表达,并同时减少HDAC2蛋白与MeCP2的细胞核内共定位,以改善老年大鼠空间学习记忆能力。     

左归丸对去卵巢大鼠下丘脑Orexin及其受体mRNA表达的影响

目的:观察去卵巢骨质疏松症大鼠下丘脑食欲素(Orexin)及其受体mRNA水平,探讨绝经后骨质疏松症(PMOP)的发病机制以及左归丸的作用机制。方法:去势法建立骨质疏松症模型,32只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、雌二醇组和左归丸组,每组8只。灌胃给药12周后,通过显微CT(μ-CT)检测股骨骨密度(BMD)和骨小梁微观三维形态结构,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠骨组织形态学变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清骨转换标志物骨钙素(OCN),I型前胶原氨基端前肽(PINP),抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠下丘脑Orexin,食欲素受体1(OX1R)和食欲素受体2(OX2R) mRNA表达水平。结果:与假手术组比较,μ-CT示模型组大鼠BMD,骨体积分数(BV/TV),骨小梁厚度(Tb. Th)和骨小梁数量(Tb. N)显著下降(P 0. 01)而骨小梁间隙(Tb. Sp)升高(P 0. 01),骨小梁明显稀疏,间距加宽,结构出现较大的空白区域; HE染色示骨小梁明显稀少,结构不完整,排列疏松,间距变宽; ELISA示血清OCN,PINP含量降低,TRAP含量升高(P 0. 01);下丘脑Orexin,OX1R,OX2R mRNA表达下调(P 0. 01)。经左归丸治疗后,大鼠BMD,BV/TV,Tb. Th,Tb. N升高(P 0. 05,P 0. 01),Tb. Sp降低(P 0. 01),骨小梁变密,空隙率下降,分布均匀,排列尚可,微观结构明显改善;血清OCN,PINP含量增加(P 0. 05,P 0. 01)而TRAP含量降低(P 0. 01);下丘脑Orexin,OX1R,OX2R mRNA表达明显上调(P 0. 05,P 0. 01)。结论:下丘脑Orexin及其受体mRNA水平降低可能是PMOP发病的机制之一。左归丸可通过上调下丘脑Orexin及其受体mRNA表达,从而纠正骨代谢失衡,改善骨小梁微结构,提高骨密度,发挥治疗PMOP的作用。     

从肾论治绝经后膝骨关节炎肝肾亏虚证的临床观察

目的:评价从肾论治的左归丸加减治疗绝经后膝骨关节炎(KOA)肝肾亏虚证的临床疗效及对内分泌激素和软骨代谢的影响。方法:将140例KOA患者根据随机按数字表法分为对照组和观察组各70例。两组患者均口服予盐酸氨基葡萄糖胶囊,1粒/次,2次/d,疗程共12周,疼痛明显加用塞来昔布胶囊,0. 2 g/次,1次/d,共4周。对照组口服抗骨增生丸,3 g/次,3次/d。观察组加服左归丸加减,1剂/d,两组疗程均为连续治疗12周。采用疼痛视觉模拟(VAS)评分评价治疗前后活动时和静息时疼痛程度;进行治疗前后西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数可视化量表(WOMAC)评分、膝关节骨性关节炎严重性指数(ISOA),肝肾亏虚证、焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS)评分;检测治疗前后血清雌二醇(E2),促卵泡生成素(FSH),促黄体生成素(LH),转化生长因子-β(TGF-β),白细胞介素-1β(IL-1β),基质金属蛋白酶-3(MMP-3),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:治疗后观察组患者活动时VAS和静息时VAS均低于对照组(P0. 01);观察组WOMAC总分及疼痛、僵硬、关节功能3个因子评分均低于对照组(P0. 01);观察组患者肝肾亏虚证,SAS和SDS评分均低于对照组(P0. 01);观察组ISOA总分和症状体征、最大步行距离、日常生活3个维度评分均低于对照组(P0. 01);观察组E2水平高于对照组,FSH,LH水平均低于对照组(P0. 01);观察组患者TGF-β水平高于对照组,TNF-α,IL-1β和MMP-3水平均低于对照组(P0. 01);观察组临床总有效率分别为89. 23%(58/65),高于对照组的74. 60%(47/63)(χ2=4. 793,P0. 05)。结论:采用左归丸加减内服从肾论治绝经后KOA肝肾亏虚证患者可明显减轻症状,改善关节功能,调节内分泌激素水平,减轻焦虑、抑郁,并可调节软骨代谢的环境,抑制炎症反应,提高了患者日常生活能力和临床疗效。     

CCK-8与MTT法检测左归丸含药血清干预BMSCs增殖条件的比较

目的 探讨CCK-8与MTT法在检测左归丸含药血清干预大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖时所需的最佳实验条件,并比较两种方法的优缺点.方法 用左归丸含药血清进行干预P3 BMSCs,孵育结束后,分别加入CCK-8与MTT试剂,检测两种方法的最佳波...     

左归丸对肾虚仔鼠胸腺内CD4-CD8-T细胞分化的影响

目的:研究左归丸对肾虚仔鼠发育过程中CD4-CD8-T细胞在胸腺内分化的影响以及补肾填精法的应用价值,探索“肾为先天之本”的理论内涵。方法:采用大鼠2∶1进行雌雄配对,3种应激法复合构建肾虚模型,将孕鼠分为正常组,模型组,胸腺肽组(0.003 g·kg^-1),左归丸低、高剂量组(2,8 g·kg^-1)。正常组不造模给予生理盐水灌胃;模型组造模给予生理盐水灌胃,胸腺肽组造模给予胸腺肽胶囊溶液灌胃,左归丸低、高剂量组造模给予左归丸悬浊液灌胃,选取胚胎16,19 d及出生第1天(E16,E19,P1)3个时期,计算仔鼠胸腺指数,电镜观察仔鼠胸腺上皮细胞超微结构形态,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测仔鼠胸腺内胸腺肽β4(TMSβ4)和胸腺肽α1(Tα1)的含量,流式细胞学检测仔鼠胸腺细胞表面CD4,CD8,CD25,CD44表达以鉴定T细胞类型。结果:电镜下模型组胸腺上皮细胞形态不规则,细胞核变形,核染色质明显聚集增加,胸腺肽组和左归丸低、高剂量组胸腺上皮细胞变形不明显;ELISA法检测结果显示,与正常组比较,模型组不同时期的TMSβ4,Tα1含量明显降低(P<0.05);与模型组比较,胸腺肽组和左归丸低、高剂量组胸腺内TMSβ4和Tα1的含量明显升高(P<0.05);流式细胞检测显示,与正常组比较,模型组在E16,E19,P13个时期CD4^-CD8^-T细胞均明显增加(P<0.05),CD4^-CD8^-CD25^-CD44^-T(DN4)明显增加(P<0.05);与模型组比较,胸腺肽组和左归丸低、高剂量组在E16,E19,P1时期CD4-CD8^-T细胞均明显减少(P<0.05),同时DN4也明显减少(P<0.05)。结论:左归丸可以改善肾虚仔鼠胸腺上皮细胞的结构,并通过增加仔鼠胸腺内TMSβ4和Tα1的分泌诱导胚胎期胸腺内T细胞从DN4至DP阶段的分化,说明左归丸通过补肾填精,促进T细胞发育成熟,调节仔鼠肾虚免疫失调状态。     

左归丸联合西药治疗再生障碍性贫血随机平行对照研究

[目的]观察左归丸联合西药治疗再生障碍性贫血疗效。[方法]使用随机平行对照方法,将104例住院患者按抽签法随机分为两组。对照组52例,环孢素A5mg／kg／次,3次／d。康力龙6mg／次,3次/d。治疗组52例左归丸（熟地25g,山药15g,山茱萸、枸杞子各12g,鹿角胶6g,菟丝子15g,杜仲12g,当归、肉桂、丹皮各10g）,水煎200mL,1剂/d,早晚温服。西药治疗同对照组。连续治疗3个月为1疗程。观测临床症状、血常规、骨髓像、不良反应。治疗1疗程,判定疗效。[结果]治疗组52例,基本痊愈21例,缓解13例,明显进步15例,无效3例,总有效率94．23％。对照组52例,基本痊愈12例,缓解9例,明显进步22例,无效9例,总有效率82．69％。临床疗效治疗组优于对照组（P〈0．05）.[结论]左归丸加减治疗再生障碍性贫血疗效显著,值得推广。     

左归丸对痴呆鼠抗氧化作用及尼氏体的影响

目的 探讨左归丸对痴呆大鼠抗氧化作用及尼氏体的影响.方法 将84只Wistar雄性大鼠随机分成6组:A组腹腔注射生理盐水再脑内海马注射生理盐水,B、C、D、E、F组以D-半乳糖腹腔注射合并B淀粉样蛋白1-40注射海马制备老年性痴呆(AD)动物模型,C、D、E、F组同时分别灌胃抗脑衰胶囊、哈伯因和左归丸[5.4和2.7g/(kg·d)].采用生化法检测各组大鼠脑匀浆过氧化氢酶(CAT)、单胺氧化酶(MAO),尼氏染色观察各组大鼠海马神经元尼氏体及电镜观察各组超微结构变化.结果 灌服后左归丸组均能明显提高AD大鼠脑组织CAT活性、抑制MAO活性(P＜0.05);左归丸治疗组尼氏体溶解明显减少;F组神经纤维结构完好,尼氏体丰富,突触结构尚可.结论 左归丸通过提高抗氧化能力和改善神经元细胞损害对AD大鼠有一定的防治作用.     

左归丸提取液对2.2.15细胞乙肝病毒标志物的影响

目的:研究左归丸提取液对乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、表面抗原(HBsAg)的抑制作用。方法:应用2.2.15细胞株作为体外抗乙型肝炎病毒(HBV)实验模型,通过细胞毒性实验以确定对细胞无毒性作用的最高药物浓度,将此浓度药物直接加到细胞培养液中,分别取第4天、第8天的细胞培养上清液,用固相放射免疫方法测定其HBsAg、HBeAg含量。结果:浓度为25、12.5、6.25、3.125mg/ml的左归丸提取液对HBsAg、HBeAg有明显抑制作用;各浓度间存在量效关系;对HBeAg的作用优于对HBsAg的作用。结论:左归丸提取液对2.2.15细胞HBV标志物有显著的抑制作用。     

不同补益方剂对老龄小鼠生精细胞凋亡的影响

目的:探讨不同补益方剂左归丸、右归丸、六味地黄丸、金匮肾气丸、五子衍宗丸、八珍汤对老龄小鼠生精细胞凋亡的影响。方法:将80只15月龄BALB/c小鼠随机分为老年组、左归丸组、右归丸组、六味地黄丸组、金匮肾气丸组、五子衍宗丸组、八珍汤组以及阳性药物(左卡尼汀)组,每组10只,另设10只2月龄BALB/c小鼠为青年组,各给药组按中药含生药2.5 g·kg-1分别灌胃给予相应药物,左卡尼汀组肌肉注射给药45 mg·kg-1,每天1次,连续4周。于末次给药24 h后将小鼠摘眼球取血,分离血浆、血清,利用酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血中丙二醛(MDA),一氧化氮合酶(NOS),促红细胞生成素(EPO),超氧化物歧化酶(SOD)以及外周血促卵泡生成激素(FSH),促黄体生成激素(LH),睾酮(T)的含量;采用免疫组化法检测各组小鼠睾丸组织Ki-67的表达;采用TUNEL法检测各组小鼠生精细胞凋亡情况。结果:与青年组比较,老年组小鼠MDA,NOS,EPO水平明显上升(P0.05);与老年组比较,各治疗组小鼠血清MDA,NOS,EPO水平明显下降(P0.05),除五子衍宗丸组和六味地黄丸组外,各治疗组小鼠血清SOD水平上升(P0.05)。与青年组比较,老年组小鼠血清FSH明显升高及LH,T含量明显下降(P0.05);与老年组比较,五子衍宗丸组小鼠血清FSH明显下降及LH,T含量明显升高(P0.05)。免疫组化法检测结果显示,与青年组比较,老年组小鼠睾丸组织内Ki-67表达水平明显下降(P0.05);与老年组比较,左卡尼汀组、六味地黄丸组、八珍汤组以及五子衍宗丸组小鼠睾丸组织Ki-67表达水平升高(P0.05)。TUNEL法检测结果显示,与青年组比较,老年组小鼠生精细胞凋亡率明显上升(P0.05);与老年组比较,各治疗组小鼠生精细胞凋亡率均明显下降,以五子衍宗丸下降率最显著(P0.05)。结论:6个不同的补益方剂对老龄小鼠生精细胞凋亡都有一定的抑制作用,其中以五子衍宗丸效果最佳。     

左归丸加减联合培哚普利叔丁胺片治疗气阴两虚夹瘀证早期糖尿病肾病临床观察

目的：观察左归丸加减联合培哚普利叔丁胺片治疗早期糖尿病肾病气阴两虚夹瘀证的疗效。方法：选择2020年9月至2021年11月广西中医药大学附属瑞康医院收治的气阴两虚夹瘀证早期糖尿病肾病患者77例,随机分为观察组(39例)和对照组(38例)。所有患者均接受基础治疗,对照组在此基础加用培哚普利叔丁胺片治疗,观察组在对照组的基础上加用左归丸加减治疗,疗程为3个月,观察治疗前后两组症状评分、血糖[空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h PBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、葡萄糖在目标范围内时间(TIR)]、肌酐(SCr)、尿素、预估肾小球率过滤(eGFR)、血清胱抑素-C(Cys-C)、血β₂-微球蛋白(Sβ₂-MB)、尿系列微量蛋白[24 h尿蛋白定量(24 h UmAlb)、24 h尿微量白蛋白定量(24 h MTP)及尿β₂-微球蛋白(Uβ₂-MB)]。结果：两组治疗前各项指标差异无统计学意义。治疗后,对照组总有效率为84.2%(32/38),观察组总有效率为94.9%(37/39),观察组疗效优...