基于代谢组学的六味地黄丸干预大鼠甲亢模型的作用研究

目的该文采用血清代谢组学探讨正常大鼠皮下注射L-左旋甲状腺素钠诱导甲亢模型的作用机制和六味地黄丸干预甲亢模型的作用研究。方法选用SD大鼠按35μg.(100 g)-1皮下注射L-左旋甲状腺素钠造模1周后,给予4.7 g.kg-1的六味地黄丸干预3周,同时以正常大鼠作为对照,采用UPLC-QTOF-MS技术对不同组别大鼠的血清进行了分析。结果甲亢大鼠的体内草酰乙酸、磷酸二羟基丙酮、乙基葡糖苷酸、甘油三酯、溶血磷脂、胆固醇等明显上调;而六味地黄丸干预后,这些物质的水平出现明显下调。结论推测甲亢大鼠机体内的三羧酸循环发生障碍,糖、脂质、氨基酸代谢均出现紊乱,给予六味地黄丸后紊乱得到一定的改善。同时,这种方法为全面建立一种基于代谢组学的手段来诊断甲亢的病因和评价六味地黄丸治疗作用,提供一定的参考。     

基于“伴随标志物”在线控制技术的绞股蓝总皂苷纯化工艺及成分鉴定研究

基于"伴随标志物"紫外在线检测技术以绞股蓝总皂苷(GPS)为目标,优化绞股蓝中GPS的纯化工艺,采用UPLC-QTOF-MS技术对GPS进行定性。"伴随标志物"紫外在线检测研究表明,上样终点为流出液吸光度为原药液的1/2时,洗脱终点为洗脱流出液吸光度基本稳定。UPLC-QTOF-MS鉴定出GPS提取物中的16个皂苷,其中新皂苷3个。该研究优选出的纯化工艺简单、检测方便、易于在线测定、实时记录,能较好的运用到大生产或生产的自动化中。质谱定性鉴定结果表明,基于"伴随标志物"紫外在线检测技术能很好地保留药材中的主要药效成分,为过程控制和质量溯源提供了分析工具。     

抗 HIV 先导物 DAAN-10341 的体外代谢产物筛查

目的应用超高效液相色谱．四极杆飞行时间质谱联用技术（UPLC—QTOF—MS／MS）并辅以代谢数据采集和处理软件,对新型非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTIs）的先导物DAAN-10341在大鼠肝微粒体的代谢产物进行快速筛查和鉴定,并对其结构中的代谢位点进行分析。方法应用质量亏损过滤技术在UPLC—QTOF—MS／MS上比较分析0h与2h孵育样品的数据,在大鼠肝微粒体孵育液中筛查得到了DAAN-10341的16个代谢产物。应用仪器的碰撞能量梯度功能（MSE）对部分产物进行MS。分析,获得代谢产物的碎片,推断碎裂途径及产物结构。结果先导物DAAN-10341在大鼠肝微粒体中的Ⅰ相代谢反应以氧化（羟基化）为主;Ⅱ相代谢主要以葡糖醛酸结合反应与谷胱甘肽结合反应为主。结论本文通过分析新型抗H／V先导物DAAN-10341的结构和代谢转化,发现易于发生代谢的位点和结构特征,为该类先导物结构优化和后续的临床前评价提供科学指导。     

亚低温对心脏骤停后大鼠心肌保护的代谢组学研究

目的基于超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)技术寻找CA后大鼠心肌损伤的潜在生物标志物,初步揭示亚低温对心肌保护作用的机制。方法建立窒息性CA模型,将20只自主循环恢复后的SD大鼠随机分为常温组、亚低温组,ROSC后24h收集心肌组织样本进行代谢组学检测,采用SIMCA-P 14.1和MetaboAnalyst 4.0对预处理后的数据进行代谢轮廓分析,筛选差异代谢物,将内源性代谢物进行代谢通路分析。结果成功制作了大鼠窒息性CA模型,心肌HE染色显示,常温组大鼠心肌结构紊乱,心肌纤维断裂,间质充血,细胞核染色不均匀,亚低温治疗后改善了心肌损伤程度;代谢组学检测结果显示,常温组和亚低温组心肌代谢指纹不同,共筛选出20种差异代谢物,代谢通路分析提示嘌呤代谢、缬氨酸/亮氨酸/异亮氨酸代谢在亚低温干预后显著改变。结论亚低温治疗在一定程度上减轻CA后心肌损伤程度,嘌呤代谢和氨基酸代谢参与了亚低温对心肌的保护。     

五味子对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌体外抑菌活性部位的筛选和UPLC-QTOF-MS/MS分析活性组分化学成分

目的：研究五味子对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）体外抑菌活性部位的筛选以及分析五味子活性组分化学成分。方法：采用系统溶剂法分段萃取和AB-8大孔吸附树脂分离技术,结合管碟法对各分离组分进行体外抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性追踪检测,筛选出五味子抑菌活性最强组分。超高效液相（UPLC）、电喷雾四级杆飞行时间质谱（ESI-QTOF-MS）和二级质谱（MS/MS）对五味子抑菌活性组分进行分析。结果：筛选出70%乙醇提取的五味子依次经乙酸乙酯萃取和AB-8大孔吸附树脂水洗脱的组分（EEW component）为抗MRSA体外抑菌活性部位,同时对抗生素敏感金黄色葡萄球菌和临床分离的耐药MRSA均具有较强的抑菌活性。UPLC-QTOF-MS/MS分析体外抑菌活性组分,根据一级质谱提供的相对分子质量和二级质谱高能量碰撞碎片信息,初步鉴定了11个化合物,这11个化合物分别为奎尼酸（1）、苹果酸（2）、柠檬酸（3）、苹果酸异构体（4）、咖啡酰奎尼酸（5）、莽草酸（6）、柠檬酸单甲酯（7）、原儿茶酸（8）、富马酸单乙酯（9）、2-羟基-丙基三羧酸-2-乙酯（10）和柠檬酸二甲酯（11）。结论：本实验初步筛选了五味子抑菌活性部位,为开发天然抑菌制剂提供了方法和思路。     

Analysis of an Adulterated Herbal Medicinal Product Using Ultra-Performance Liquid Chromatography Coupled with QTOF Mass Spectrometry

The reports of severe adverse effects and fatalities associated with herbal medicinal products adulterated with synthetic compounds have raised global concerns.The objective of this study is to analyze one commercial herbal medicinal product suspected to be adulterated with synthetic drugs in order to identify potential adulterants,to verify if the product contained the herbs listed as ingredients in label claim and to determine quality consistency among different batches of the product.Analyses of suspected product obtained from seven different batches were performed using ultra performance liquid chromatography coupled to quadrupole time-of-flight mass spectrometry(UPLC-Q-TOF-MS) with multiple data processing tools and multivariate analyses.In addition,23 individual powdered herbs(12 as per label claim and 11 suspected herbs),11 marker compounds of the labeled herbs and five suspected synthetic drugs as adulterants were also concurrently analyzed to have clear understanding of product composition.Based on our analysis,the major ingredients of studied product were found to be 5 synthetic compounds:caffeine,chlorphenamine,piroxicam,betamethasone and oxethazaine.Three of them have been found to exceed their recommended doses.From the herbal composition analysis,Gan Cao(Glycyrrhizae radix et rhizoma) was found to be the main ingredient,which is not among the claimed 12 herbs that were supposed to be in the product.Other herbs detected as minor ingredients were Mu Gua(Chaenomelis fructus),Dang Gui(Angelicae sinensis radix),and Huang Qi(Astragali radix),which are among the 12 herbs that were supposed to be in the product.Based on our results we demonstrated that UPLC-QTOF MS is an effective and versatile tool for the analysis of herbal medicinal products.It is highly desirable to have a streamlined process with automatic workflow and fit-forpurpose database to increase efficiency and productivity of sample analysis.Results of this work also highlight the need for the better quality control and regulatory measures to protect consumers from the potentially harmful effects of such adulterated products.     

UPLC-QTOF-MS分析乌蔹莓成分及多组分定量研究

目的 定性分析乌蔹莓化学成分并对其主要成分建立定量分析方法。方法 采用高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-QTOF-MS）技术,选用ACQUITY UPLC HSS T₃色谱柱（2.1 mm×50 mm,1.8 μm）,以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,质谱采用电喷雾（ESI）离子源,在正、负离子模式下采集数据。运用PeakView软件对结果进行分析,根据化合物的相对保留时间、准分子离子峰和碎片离子峰等信息,并结合对照品和相关文献进行成分鉴定。采用UPLC法对4个主要成分（木犀草素-7-O-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素、芹菜素）建立含量测定方法。结果 从乌蔹莓中共推断并鉴定出31个化学成分,包括黄酮及其苷类6个,香豆素类3个,萜类及三萜类7个,脂肪酸酯类7个,其他类8个。3批乌蔹莓中木犀草素-7-O-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素、芹菜素含量范围分别为0.061%~0.15%、0.077%~0.14%、0.011%~0.028%、0.020%~0.062%。结论 该分析方法可以快速、准确地分析乌蔹莓中的化学成分,建立的定量方法为乌蔹莓质量控制及制剂开发奠定了基础。      

基于UPLC-QTOF-MS/MS法的茅苍术与 北苍术化学成分分析

目的：建立超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-QTOF-MS/MS）联用方法,对茅苍术与北苍术的75%甲醇提取物中的化学成分进行定性分析。方法：采用Agilent Infinity Lab Poroshell 120EC-C18（2.1 mm × 100 mm,2.7 μm）色谱柱分离,以0.1%甲酸溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min-1,柱温25 ℃,进样体积1 μL;检测质谱采用四极杆-飞行时间串联质谱系统（电喷雾离子源ESI）,正、负离子模式下采集数据,全扫描的质量扫描范围m/z 50~1500。结果：根据UPLC-QTOF-MS/MS提供的各成分的液相色谱保留时间、精确分子质量和特征碎片离子信息,并结合对照品及相关文献数据比对,从茅苍术与北苍术中均鉴定出78个化学成分,包括16个萜类化合物、10个聚乙烯炔类化合物、25个有机酸类化合物、17个糖苷类化合物、10个其它类化合物。结论：该方法可以快速、准确地对苍术药材中的化学成分进行定性表征,可为苍术的物质基础研究和质量控制提供实验依据。     

基于超高效液相-四级杆-飞行时间串联质谱的白花蛇舌草注射液主成分分析

目的 探讨全国范围内白花蛇舌草注射液物质基础的差异性。方法 采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱（UPLC-QTOF-MS）对16批样品进行测定，对采集的数据以保留时间和质荷比作为变量，进行主成分分析（PCA）。结果 通过PCA发现不同企业生产的样品自身差异较小，相互之间差异较大；通过载荷图分析筛选出对分组影响比较大的7种标记物。结论 全国范围内不同厂家生产的白花蛇舌草注射液不仅颜色差异较大，其内在的物质基础也存在明显的差异，这种差异主要体现在黄酮类和有机酸类成分的量上。     

基于模拟炮制技术的高乌头炮制过程中主要生物碱含量动态变化研究

目的 探讨甘草汁蒸制高乌头过程中主要生物碱含量动态变化规律。方法 将高乌头加甘草汁和不加甘草汁分别蒸制0,0.5,1,2,3,4,5 h,干燥处理,采用HPLC测定高乌头不同炮制品中高乌甲素、冉乌头碱以及新增成分的含量;采用高乌甲素和冉乌头碱对照品进行模拟炮制;采用制备液相分离新增成分并结合NMR及UPLC-QTOF-MS进行鉴定。结果 高乌头加或不加甘草汁蒸制过程中,随蒸制时间的延长,高乌甲素和冉乌头碱含量明显降低,同时产生2个新峰(峰1,峰2),其含量明显增加,说明新增成分和甘草汁无关,而与蒸制处理有关,对比不加甘草汁蒸制,加甘草汁蒸制后毒-效成分高乌甲素和冉乌头碱含量降低幅度适中,说明加甘草汁比不加甘草汁蒸制合理;模拟炮制结果显示,炮制过程中高乌甲素和冉乌头碱含量逐渐降低;经鉴定新增成分(峰2)为5-羟基甲糖醛。结论 高乌头炮制后主要生物碱成分发生了较大变化,可能与加甘草汁蒸制“减毒存效”密切相关。