体外皮肤移植和TUNEL实验评价猕猴间充质干细胞输注对细胞免疫的影响

目的:通过给猕猴单次无预处理输注猕猴白细胞抗原(RhLA)不相合供者的骨髓来源的间充质干细胞(MSCs),观察能否抑制供受者之间的免疫反应.方法:无菌抽取MSCs供者猕猴骨髓,分离单个核细胞,用2?S的DMEM/F12培养液培养骨髓MSCs,用流式细胞术检测其表型,不同培养条件诱导MSCs多向分化以鉴定;单次无预处理输注MSCs给RhLA不相合受者,分别于MSCs输注前及输注后20、40、60 d取受者外周血淋巴细胞分别与供者及非供者皮肤体外共培养72 h,观察培养皮肤病理损伤情况,同时TUNEL法检测培养皮肤石蜡切片中凋亡细胞的比率.结果:输注MSCs后20 d,受者淋巴细胞与供者皮肤呈现减低的免疫反应,皮肤病理损伤程度较输注前减轻,凋亡细胞比例由(23.0±4.9)%下降到(12.2±1.9)%;MSCs受者与非供者之间体外皮肤病理片中凋亡细胞比例也由输注前的(22.0±2.0)%下降至(11.8±1.4)%,具有显著差异(P<0.05);输注后40 d和60 d,受者淋巴细胞无论对供者还是非供者的皮肤均产生较强的免疫反应,凋亡细胞比例增至(22.0±3.2)%、(22.0±2.5)%(供者)及(23.2±2.4)%、(24.0±2.6)%(非供者).结论:猕猴输注同种异基因MSCs后,通过体外实验可以检测到供受者之间降低的免疫反应,但是这种免疫抑制作用是短期的、可逆的.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎中枢神经系统浸润细胞凋亡的研究

目的　探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( EAE)中枢神经系统 ( CNS)中浸润细胞的凋亡情况。方法　用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记 ( TUNEL)技术动态检测 EAE病程不同阶段大鼠 CNS中浸润细胞的凋亡变化。结果　TUNEL阳性细胞的数量随病情进展呈单峰曲线 ,形态学观察支持 TUNEL阳性细胞主要为淋巴细胞、巨噬细胞和小胶质细胞。结论　细胞凋亡是 EAE动物 CNS中浸润细胞的重要清除方式。     

病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的检测及意义

目的 研究病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌细胞凋亡及其意义。方法 实验用TUNEL法结合电镜观察小鼠接种VMC病毒后3、5、7、9、15、35天心肌细胞凋亡情况。结果 发现小鼠在接种VMC病毒后的3、5、7、9、15、35天各时点凋亡心肌细胞数目较正常对照组明显增加(P<0.01)。小鼠在接种病毒后7～9天,电镜下心肌细胞可见凋亡。结论VMC中存在异常的心肌细胞凋亡现象,心肌细胞凋亡可能参与了VMC的发病。     

NiTi放射性支架置入兔腹主动脉后对平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的　观察NiTi放射性支架对平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法　在 76只家兔腹主动脉中分别置入放射与非放射性支架。用免疫组化法和TUNEL法观察放射性支架对平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。结果　 (1) 2周时放射与非放射性组新生内膜面积无显著差异 (P >0 0 5 ) ,1个月和 3个月时放射支架组新生内膜面积小于非放射性组 (P <0 0 1) ;(2 )PCNA法测定平滑肌细胞增殖显示放射性组在各时间点PCNA表达低于非放射性组 (P <0 0 5 ) ;(3)TUNEL法测定放射性组平滑肌细胞凋亡与对照组相比在 2周和 1个月时有显著差异 (P<0 0 5 ) ,在 3个月时两组平滑肌细胞凋亡无显著差异 (P >0 0 5 )。结论　 (1)放射性支架可减少支架置入术后支架内新生内膜面积。 (2 )放射性支架可抑制血管平滑肌细胞增殖。 (3)放射性支架促进血管平滑肌细胞凋亡     

Ammonium accumulation and chemokine decrease in culture media of Gcdh−/− 3D reaggregated brain cell cultures

Glutaric Aciduria type I (GA-I) is caused by mutations in the GCDH gene. Its deficiency results in accumulation of the key metabolites glutaric acid (GA) and 3-hydroxyglutaric acid (3-OHGA) in body tissues and fluids. Present knowledge on the neuropathogenesis of GA-I suggests that GA and 3-OHGA have toxic properties on the developing brain.We analyzed morphological and biochemical features of 3D brain cell aggregates issued from Gcdh^?/? mice at two different developmental stages, day-in-vitro (DIV) 8 and 14, corresponding to the neonatal period and early childhood. We also induced a metabolic stress by exposing the aggregates to 10 mM l-lysine (Lys).Significant amounts of GA and 3-OHGA were detected in Gcdh^?/? aggregates and their culture media. Ammonium was significantly increased in culture media of Gcdh^?/? aggregates at the early developmental stage. Concentrations of GA, 3-OHGA and ammonium increased significantly after exposure to Lys. Gcdh^?/? aggregates manifested morphological alterations of all brain cell types at DIV 8 while at DIV 14 they were only visible after exposure to Lys. Several chemokine levels were significantly decreased in culture media of Gcdh^?/? aggregates at DIV 14 and after exposure to Lys at DIV 8.This new in vitro model for brain damage in GA-I mimics well in vivo conditions. As seen previously in WT aggregates exposed to 3-OHGA, we confirmed a significant ammonium production by immature Gcdh^?/? brain cells. We described for the first time a decrease of chemokines in Gcdh^?/? culture media which might contribute to brain cell injury in GA-I.     

Potential function of TGF-β isoforms in maturation-stage ameloblasts

Objectives

To investigate potential functions of transforming growth factor-beta (TGF-β) isoforms in maturation-stage ameloblasts during amelogenesis.

电针对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡相关基因影响的研究

目的：观察电针对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡表达及变化规律。试图从线粒体启动凋亡途径相关主要因素的研究角度进一步揭示电针治疗脊髓损伤作用机制。方法：采用A1len’s法制备急性脊髓损伤模型。动物分为电针组、药物组（Caspase-3抑制剂组）、模型组、假手术组。用Tunel法对细胞凋亡进行标记。结果：脊髓损伤后1d即发现神经细胞凋亡,1d凋亡的细胞主要是神经元细胞。凋亡的细胞主要位于脊髓灰质前角。结论：大鼠急性脊髓损伤后存在细胞凋亡现象,是脊髓继发性损伤主要病理机制。     

Caspase-3、Bcl-2在甲状腺功能减退症大鼠心肌组织中的表达及与甲状腺功能关系的研究

目的观察甲状腺功能减退症大鼠心肌损伤时Caspase-3和Bcl-2在心肌细胞中的表达,探讨甲减心肌损伤的发生机制以及与甲状腺功能的关系。方法用丙基硫氧嘧啶(PTU)连续灌胃制作甲状腺功能减退症大鼠模型。分别动态观察对照组、甲减组和干预组(给予左甲状腺素钠和停止给予PTU进行干预治疗)大鼠的心肌病理改变及损伤情况,并同时应用免疫组化技术及末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法检测Caspase-3和Bcl-2在心肌细胞中的表达及心肌细胞凋亡情况。结果甲减大鼠出现心肌细胞凋亡,并且随着病程进展凋亡逐渐加重,并与甲状腺功能密切相关。干预组心肌细胞凋亡均较甲减组减轻。结论甲减时心肌损伤与心肌细胞凋亡密切相关,即心肌细胞凋亡可引起甲减心肌损伤,甲状腺激素参与调控细胞凋亡。     

慢性乙醇中毒所致大鼠肝损伤和肝细胞凋亡

目的:研究肝细胞凋亡在实验性大鼠乙醇性肝病(ALD) 发生、发展中的作用．方法:给大鼠饮用220 g／L的乙醇,并结合540 g／L乙醇分次、少量灌胃的方法建立大鼠肝损伤模型;常规HE 染色,光镜观察大鼠病理学形态改变,用TUNEL法检测肝细胞凋亡,速率法检测血清ALT,AST水平．结果:灌乙醇5 wk大鼠肝脏出现轻到中度脂肪变性,脂滴为以大泡型为主的混合脂滴,脂变率为40％(8／20); 10 wk,85％(17／20)大鼠发生肝脂肪变,45％(9／20)大鼠出现乙醇性肝炎的病理变化．5,10 wk大鼠血清 ALT,AST均较同期对照组有显著升高(5 wk:1017 ±267 VS 550±133,P<0．05;1350±333 vs 967±150, P<0．05;10 wk:1500±267 vs 767±250．P<0．05;2167 ±533 vs 850±183,P<0．05);灌乙醇10 wk血清ALT, AST较5 wk升高(P<0．05),有统计学意义．5,10 wk大鼠 TUNEL指数分别为0．33±0．49％、2．03±1．61％,与同期对照组相比,5 wk无显著差异,10 wk有显著性差异 (P<0．05);灌乙醇10 wk TUNEL指数较5 wk高,有显著性差异(P<0．05)．按病理损伤程度,将实验组分成乙醇性肝炎(AH)组和乙醇性脂肪肝(AFL)组,结果显示AH 组TUNEL指数也较AFL组高(3．24±1．50％ vs 1．12± 0．63％,P<0．05),差异显著．结论:过量饮用乙醇可以引起中毒性肝脏疾病,饮用乙醇及持续时间与肝损伤的发生有密切关系．细胞凋亡在乙醇诱发肝损伤时可能起着重要作用．