肝星状细胞SCAP特异性敲除对小鼠肝纤维化的影响

目的:探讨固醇调节元件结合蛋白裂解活化蛋白(SCAP)在肝星状细胞中缺失能否延缓小鼠肝纤维化进程.方法:将SCAPloxP/loxP小鼠与Lrat-Cre工具鼠繁殖得到Lrat-Cre+/+SCAPfl/fl、Lrat-Cre+/?SCAPfl/fl和Lrat-Cre?/?SCAPfl/fl小鼠,并用PCR法对小鼠基因...     

Prohibitin启动子中胆固醇活性作用位点研究

 目的：验证抑制素（prohibitin,PHB）基因启动子胆固醇敏感活性作用位点,为PHB在前列腺癌靶向基因治疗中的应用提供实验依据。方法：采用PCR分段扩增PHB启动子,克隆入pGL3-Basic萤光素酶报告基因载体。将构建的重组质粒用脂质体转染至人前列腺癌PC-3细胞,再分别培养于低胆固醇培养基和普通胆固醇培养基中,检测PHB启动子各分段重组质粒萤光素酶活性的变化。限定PHB启动子约200 bp的胆固醇敏感启动区域,找出其中的固醇调节元件（sterol regulatory element,SRE）同源位点并进行点突变,证实PHB基因的胆固醇敏感调控位点。结果：PHB启动子和各分段产物构建质粒完整。与转染完整PHB启动子（pPHB-1192）的PC-3细胞比较,转染pPHB-179 (-35/+138)的PC-3细胞萤光素酶活性显著降低（P<0.05）。点突变位于PHB启动子上的-117到-108 bp的SRE可能位点后,与转染pPHB-1192的PC-3细胞比较,转染SRE点突变的PC-3细胞萤光素酶活性显著降低（P<0.05）。结论：PHB启动子在人前列腺癌PC-3细胞中的活性受胆固醇调节。PHB启动子中对胆固醇敏感的作用位点位于-117到-108 bp的SRE同源位点。PHB可能成为前列腺癌靶向基因治疗的有效工具。     

文冠果种皮的化学成分研究

目的研究文冠果Xanthoceras sorbifolia Bunge种皮的化学成分,为文冠果综合开发利用打下科学基础。方法采用多种分离技术对文冠果种皮甲醇提取物的醋酸乙酯部位分离纯化,根据其理化性质和光谱数据进行结构鉴定。结果从文冠果种皮中分离鉴定了7个化合物:(1)十九烷酸、(2)二十一烷酸、(3)豆甾醇、(4)豆甾醇乙酸酯、(5)豆甾-7-烯-3β-醇、(6)二十四烷酸、(7)胡萝卜苷。结论化合物1~4为首次从本属植物中分得,5~7为首次从文冠果种皮中得到。     

胰岛素对骨骼肌细胞固醇调节原件结合蛋白1c的调节作用

目的：研究胰岛素对骨骼肌细胞固醇调节原件结合蛋白1c（SREBP‐1c）的调节作用。方法将诱导分化完成的大鼠骨骼肌L6肌管细胞分为对照组、胰岛素组、磷酸酰基醇3激酶抑制剂wortmannin＋胰岛素组、单磷酸腺苷依赖的蛋白激酶（AM PK ）抑制剂compound C＋胰岛素组、高脂对照组、高脂＋胰岛素组、高脂＋wortmannin＋胰岛素组和高脂＋compound C＋胰岛素组。Western blot检测SREBP‐1c、苏氨酸蛋白激酶（Akt）‐哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、AMPK‐mTOR通路相关蛋白的表达。结果与对照组相比,胰岛素组SREBP‐1c、p‐Akt、p‐AMPK、p‐mTOR蛋白表达升高（P＜0．05）;与胰岛素组相比,wortmannin＋胰岛素组SREBP‐1c表达降低（P＜0．05）;与高脂对照组相比,高脂＋胰岛素组 SREBP‐1c、p‐mTOR 蛋白表达降低,p‐Akt、p‐AMPK 蛋白表达升高（P＜0．05）;与高脂＋胰岛素组相比,高脂＋compound C＋胰岛素组SREBP‐1c表达升高（P＜0．05）。结论骨骼肌细胞生理状态下,胰岛素对SREBP‐1c的上调作用可能主要通过Akt‐mTOR通路;胰岛素抵抗状态下,胰岛素治疗对SREBP‐1c的下调作用可能主要通过AMPK‐mTOR通路。     

冷水七的化学成分

目的：研究凤仙花属植物冷水七Impatiens pritzellii Hook．f．var．hupehensis Hook．f．的化学成分。方法：用柱色谱分离得到化学成分，用光谱法测定其结构。结果：分离鉴定了5个化合物，分别为：2’-乙酰胺基-3’-苯基苯丙醇基2-苯酰胺基-3-苯基苯丙酯（1），豆甾- Δ7，22-双烯-3β-棕榈酸酯（2），豆甾-△7，22-双烯-3-O-β-D-葡萄糖苷-6＇-O-榈酸酯（3），邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（4）和二十二烷酸甲酯（5）。结论：这5个成分均为首次从该属植物中分得。     

高脂饮食非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏成脂相关基因表达增强

目的探讨非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肝脏成脂相关基因mRNA表达的动态变化.方法模型组SD大鼠给予高脂饮食饲养,分批于实验第4、8、12、16、24周处死,同期设普通饮食饲养大鼠作对照.RT-PCR分别检测肝脏固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）及其靶基因脂肪酸合成酶（FAS）、脂联素、抵抗素mRNA表达.结果模型组大鼠4周肝脏可见散在性肝细胞脂肪变性,8周为单纯性脂肪性肝炎,12～24周从脂肪性肝炎进展为脂肪性肝炎伴肝纤维化.从实验第4周起,模型组大鼠肝脏SREBP-1c和FAS mRNA表达逐渐增强,至24周时分别较对照组升高5～6倍和2～2.5倍;模型组大鼠肝脏从第12周起出现脂联素和抵抗素mRNA表达,两者表达量均随造模时间延长而增强.相关分析显示,SREBP-1c、FAS、脂联素、抵抗素mRNA表达量均与肝脂肪变程度呈正相关（r值分别为0.808、0.834、0.592、0.577,P值均＜0.01）.结论高脂饮食NAFLD大鼠肝脏SREBP-1c、FAS、脂联素、抵抗素等成脂基因表达增强,提示脂肪变性的肝细胞可能部分具有脂肪细胞的特征,即发生了成脂性改变.     

葡萄糖对THP-1源性巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达的影响

研究葡萄糖对人THP-1单核分化巨噬细胞酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1（ACAT-1）表达的影响。发现高糖作用下，巨噬细胞ACAT-1的mRNA及蛋白表达增加，这可能是糖尿病血管病变机制之一。     

Effect of Daxx on cholesterol accumulation in hepatic cells

AIM： To study the effect of Daxx on cholesterol accumulation in hepatic cells. METHODS： Sprague Dawley （SD） rats were fed a normal or high fat diet for 6 wk, and serum lipids and Daxx expression of hepatic tissues were measured by immunoblot assays. HepG2 cells were transfected with the pEGFP-C1/Daxx or pEGFP-C1 plasmid. Cells stably transfected with Daxx were identified by RTPCR analysis. Total cholesterol levels were determined by high performance liquid chromatography. Activated- SREBP and caveolin-1 were assayed by western blotting. RESULTS： Hepatic Daxx protein was higher in normal rats than in high fat diet-fed rats. Noticeable negative correlations were seen between Daxx and LDL-C （γ=-7.56, ρ=0.018）, and between Daxx and TC （γ=-9.07, ρ= 0.01）, respectively. The total cholesterol of HepG2/GFP-Daxx cells was lower than that of control cells or HepG2/GFP cells （9.28±0.19 vs 14.36± 4.45 or 13.94±2.62, both P 〈 0.05）. Furthermore, in HepG2/GFP cells, the expression of activated SREBP was lower than that of control cells, whereas caveolin-1 expression was higher. CONCLUSION： Overexpression of Daxx in HepG2 cells decreased intracellular cholesterol accumulation, which might be associated with inhibition of SREBP activity and an increase in caveolin-1 expression.     

肺炎衣原体通过上调酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1诱导人单核细胞株THP-1源性泡沫细胞形成的实验研究

目的 观察酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)在肺炎衣原体(C.pn)诱导泡沫细胞形成中的作用,初步探讨C.pn诱导泡沫细胞形成的机制.方法 人单核细胞株(THP-1)给予160 mmol/L佛波酯(PMA)孵育48 h,诱导分化为巨噬细胞后随机分为4组:阴性对照组、阳性对照组、C.pn感染组和ACAT抑制剂58-035+C.pn感染组.分别运用RT-PCR和Western blot检测各组ACAT1 mRNA和蛋白表达.运用油红O染色观察细胞浆内脂滴的变化,用酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化.结果 C.pn感染呈浓度和时间依赖性地上调ACAT1 mRNA和蛋白表达.高浓度的C.pn(5×105和1×106IFU)感染THP-1源性巨噬细胞48 h后,细胞浆内脂滴明显增多,胆固醇酯与总胆固醇的比值明显增加(＞50%).ACAT抑制剂58-035可以抑制C.pn诱导的细胞浆内脂滴的增多.随着58-035浓度的增加,逐渐抑制C.pn诱导的细胞内胆固醇酯含量的增加.结论 ACAT1表达上调是C.pn诱导泡沫细胞形成的机制之一,这可能为进一步阐明C.pn感染促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据.     

疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织SREBP-1c mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织SREBP-1c mRNA及蛋白表达的影响,并探讨其机制。方法:选雄性SPF级SD大鼠55只,随机分为模型组、正常对照组和3个中药干预组,分别为疏肝组、健脾组及合方组。除正常对照组外,各组采用脂肪乳剂灌胃8 w复制大鼠NAFLD模型,同时各药物干预组给予不同药物干预(10 mL/kg),正常对照组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃。8 w后处死动物取肝组织,HE染色观察肝脏病理变化;RT-PCR方法检测肝组织SREBP-1c mRNA的表达;免疫组织化学方法检测肝组织SREBP-1c的蛋白表达水平和分布。结果:模型组大鼠肝组织SREBP-1c mRNA表达水平及SREBP-1c蛋白阳性表达率较正常对照组显著升高(P<0.01);各中药干预组大鼠肝组织SREBP-1c mRNA表达水平及SREBP-1c蛋白阳性表达率较模型组显著降低(P<0.05或P<0.01);疏肝组、健脾组大鼠肝组织SREBP-1c mRNA表达率较合方组显著降低(P<0.01)。病理观察显示疏肝、健脾组大鼠肝组织脂肪变最轻。结论:疏肝健脾方药可能是通过下调SREBP-1c mRN...