Ad.smac腺病毒的构建及其体外抗肿瘤效应的初步研究

目的 通过细菌内同源重组，制备表达全长smac基因的腺病毒，初步观察其体外对肿瘤细胞的杀伤作用。方法 构建含smac基因的腺病毒穿梭载体pAdTrack—smac，与骨架载体pAdEasyl在细菌内重组为pAd．smac，经293细胞包装为增殖缺陷性腺病毒。体外感染各种肿瘤细胞，用苔盼蓝拒染法观察其对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 利用AdEasy^TM系统成功构建了Ad．smac及对照腺病毒Ad．GFP，多种肿瘤细胞感染Ad．smac后均出现细胞凋亡现象，对肿瘤细胞的杀伤率达30％以上。结论 利用细菌内质粒同源重组法可快速简捷地制备表达外源基因的腺病毒，Ad．smac在体外通过诱导细胞凋亡而有效地杀伤肿瘤细胞，为Smac在肿瘤治疗的应用提供了一定的试验参考依据。     

性连锁凋亡抑制蛋白及其拮抗蛋白在急性白血病中的表达及意义

为了研究急性白血病(AL)性连锁凋亡抑制蛋白(X-linkedinhibitorofapoptosisproteins,XIAP)和XIAP相关因子1(XIAP-associatedfactor1,XAF1)的表达及其临床意义,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测116例AL患者和17名正常人骨髓单个核细胞中XIAP、XAF1、Smac和HtrA2mRNA的表达,并分析其与临床治疗效果的关系。结果表明初治AL患者XIAPmRNA表达水平(0.990±0.337)明显高于正常对照(0.395±0.148)(P<0·01);初治AL患者XAF1mRNA阳性率及表达水平(56.3%,0.246±0.267)明显低于正常对照(100%,0.964±0.387)(P<0.01);69例初治AL患者中高表达XIAP患者完全缓解率明显低于低表达患者(P<0.01);XAF1阳性表达患者完全缓解率明显高于阴性表达患者(P<0.01)。结论XIAP在AL中异常高表达,XAF1在AL中异常低表达,XIAP高表达及XAF1低表达或阴性可能是AL患者不良预后的指标。     

c-IAP2与Smac基因在白血病中的表达及其临床意义

为了研究c-IAP2及其拮抗素Smac基因在白血病中的表达及对成人急性白血病（AL）患者的预后意义，采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测103例白血病患者c-IAP2、Smac的mRNA表达水平，20名健康人为正常对照，K562、Kg-1a细胞株为阳性对照。结果表明：c-IAP2、Smac在初治AL中的表达较正常对照组明显升高，两者的表达为高度正相关，治疗缓解后c-IAP2、Smac的表达明显下降，与初治AL组有明显差异（P〈0．05），复发后c-IAP2、Smac基因的表达又复升高。c-IAP2 mRNA和Smac mRNA在慢性粒细胞性白血病慢性期（CML-CP）组的表达率和表达水平均高于正常对照组，但无统计学意义（P〉0．05）。在初治AL患者中，c-IAP2、Smac表达阳性的患者缓解率均低于表达阴性的患者。结论：c-IAP2 mRNA、Smac mRNA过度表达和急性白血病的发病呈正相关；c-IAP2、Smac高表达的患者完全缓解率低，预后不良；c-IAP2、Smac可作为急性白血病的发病、复发及预后判断的指标之一。     

促凋亡因子Smac/DIABLO的研究进展

促凋亡因子Smac/DIABLO,由于其独特的分子特征及其野生型蛋白独有的双重生物学功能,决定了它在肿瘤细胞的凋亡诱导中具有十分重要的作用;而且,Smac/DIABLO在体外实验中已成功应用于肿瘤的治疗。运用由它衍生的含AVPI的小分子肽为原型的药物,必将成为肿瘤治疗的一个新举措。     

Smac/DIABLO对胰腺癌SW1990细胞凋亡及化疗敏感性的影响

目的研究Smac/DIABLO与胰腺癌对TRAIL和吉西他滨化疗敏感性的关系。方法构建Flagpc3.1-Smac外源表达质粒,在SW1990细胞中过表达SMAC,采用实时定量荧光PCR方法检测Smac mRNA水平;应用Western免疫印迹法检测caspase-3、caspase-9和Bcl-2蛋白水平;利用MTT法检测转染Flag-pc3.1-Smac和TRAIL、吉西他滨处理后SW1990细胞增殖能力的改变;利用流式细胞术检测转染Flag-pc3.1-Smac后SW1990细胞的凋亡情况。结果转染Flag-pc3.1-Smac后,SW1990细胞中Smac mRNA和蛋白质表达水平显著高于对照组;MTT试验显示,过表达Flag-pc3.1-Smac的SW1990细胞在1~5 d的培养期中490 nm处吸光值均低于对照组。结论 Smac/DIABLO促进胰腺癌SW1990细胞凋亡,并增加对TRAIL和吉西他滨的化疗敏感性。     

Livin和Smac蛋白在胰腺癌中的表达及其意义

目的 探讨凋亡抑制蛋白Livin和促凋亡蛋白Smac在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法 利用免疫组化SP法检测46例胰腺癌、15例胰岛素瘤和14例正常胰腺组织中Livin和Smac的表达,分析其与胰腺癌临床病理特征的关系。结果 胰腺癌、胰岛素瘤和正常胰腺组织Livin蛋白表达率分别为73.9％ (34/46)、73.3％ (11/15)和14.3％ (2/14)。胰腺癌、胰岛素瘤均高表达,两者间差异无统计学意义,但均显著高于正常胰腺组织(P值均＜0.05)。Livin蛋白的表达与胰腺癌淋巴结转移、组织病理分级及临床分期有关(P＜0.05或＜0.01)。胰腺癌、胰岛素瘤和正常胰腺组织Smac蛋白表达率分别为39.1％ (18/46)、100％( 15/15)和92.9％ (13/14)。正常胰腺和胰岛素瘤组织均高表达,两者间差异无统计学意义,但均显著高于胰腺癌组织(P值均＜0.05)。Smac蛋白的表达与胰腺癌淋巴结转移、组织病理分级、临床分期及患者年龄有关(P ＜0.05或＜0.01)。结论 Livin可能在胰腺癌的发生、发展中起重要促进作用,而Smac在防止胰腺癌的发生、发展中起一定的作用。     

人工合成Smac拟肽促进前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨人工合成的小分子Smac拟肽对前列腺癌细胞增殖的抑制作用和诱导细胞调亡作用。方法应用固相多肽合成技术人工合成Smac融合多肽,以激光共聚焦显微镜观察肽段的细胞定位;以不同浓度处理前列腺癌细胞,应用MTT比色法、Hoechst染色、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况。结果激光共聚焦检测显示小分子肽段能进入细胞内,没有表现出某一特定细胞器的聚集性;MTT结果显示Smac拟肽对前列腺癌LNCap和PC-3细胞的增殖抑制具有浓度依赖性和时间依赖性（高浓度Smac拟肽）;Hoechst染色发现LNCap和PC-3细胞经高浓度（200μg/mL）作用48 h时细胞凋亡明显;同样浓度Smac拟肽作用LNCap和PC-3细胞48 h后用流式细胞仪分析,结果同样显示细胞明显凋亡。结论小分子Smac拟肽能有效地诱导前列腺癌细胞的凋亡,为前列腺癌的生物治疗提供了新的思路。     

Therapeutic peptides for cancer therapy. Part II – cell cycle inhibitory peptides and apoptosis-inducing peptides

Background: Therapeutic peptides have great potential as anticancer agents owing to their ease of rational design and target specificity. However, their utility in vivo is limited by low stability and poor tumor penetration. Objective: The authors review the development of peptide inhibitors with potential for cancer therapy. Peptides that arrest the cell cycle by mimicking CDK inhibitors or induce apoptosis directly are discussed. Methods: The authors searched Medline for articles concerning the development of therapeutic peptides and their delivery. Results/conclusion: Inhibition of cancer cell proliferation directly using peptides that arrest the cell cycle or induce apoptosis is a promising strategy. Peptides can be designed that interact very specifically with cyclins and/or cyclin-dependent kinases and with members of apoptotic cascades. Use of these peptides is not limited by their design, as a rational approach to peptide design is much less challenging than the design of small molecule inhibitors of specific protein–protein interactions. However, the limitations of peptide therapy lie in the poor pharmacokinetic properties of these large, often charged molecules. Therefore, overcoming the drug delivery hurdles could open the door for effective peptide therapy, thus making an entirely new class of molecules useful as anticancer drugs.     

Targeting apoptosis pathways in childhood malignancies

Evasion of apoptosis (programmed cell death) is a characteristic feature of human cancers including childhood malignancies. Since cytotoxic therapies such as chemotherapy or radiotherapy trigger apoptosis as a primary mechanism of action, resistance to apoptosis can also lead to treatment resistance. Studies on apoptosis pathways in childhood malignancies yielded a series of key molecules that can now be exploited as molecular targets for the development of targeted therapies. This strategy is anticipated to open novel perspectives for more effective treatment options for children with cancer.