Effects of Smac gene over-expression on the radiotherapeutic sensitivities of cervical cancer cell line HeLa

Background　Thesecondmitochondria derivedactivatorofcaspases(Smac) isanovelproapoptoticgene,whichplaysanimportantroleintheapoptosis inducingeffectsofirradiationontumorcells ThepurposeofthisstudywastoinvestigatetheeffectsofextrinsicSmacgenetransferanditsover expressioninradiotherapeuticsensitivitiesofcervicalcancercells Methods　AftertheSmacgenewastransferredintothecervicalcancercelllineHeLa, subclonedcellswereobtainedbypersistentG418selection CellularSmacgeneexpressionwasdetectedbyRT PCR…     

携Smac基因人尿路斑块蛋白Ib启动子调控的真核表达载体的构建

目的 构建携带Smac基因、人尿路斑块蛋白Ib（Uroplakin Ib，UpIb）启动子（promoter）调控的膀胱移行上皮特异性真核表达载体。方法 切除含Smac基因的真核表达载体pcDNA3．1-Smac内部的人巨细胞病毒和T7启动子序列，替换为在膀胱移行上皮特异表达的UpIb的启动子。构建的质粒经双酶切凝胶电泳及测序鉴定。结果 成功构建携带Smac基因人UpUIb启动子凋控的膀胱移行上皮特异性真核表达载体pcDNA3-UpIb promoter-Smac质粒。结论 新构建的载体为膀胱癌的靶向基因治疗奠定了基础。     

Smac和LIVIN在胃癌组织中的表达及其临床意义探讨

目的研究Smac和LIVIN在人体胃癌组织中的表达,初步探讨其与胃癌的发生、癌细胞增殖和侵袭转移的关系及其临床意义。方法采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接(SP)免疫组织化学方法检测75例胃癌标本粘膜组织中Smac和LIVIN蛋白的表达,胃溃疡或十二指肠溃疡患者胃粘膜组织作为正常对照组。结果胃癌组织中LIVIN的表达率显著高于对照胃粘膜组织,Smac的表达率则低于对照胃粘膜组织,差异均有统计学意义(P<0.01);LIVIN与Smac的表达呈负相关(P<0.001,r=-0.720、P<0.001,r=-0.336),二者的阳性表达率与肿瘤淋巴转移、临床分期、肿瘤病理分化程度及浸润深度密切相关,与性别、年龄及肿瘤大小无关(P>0.05)。结论LIVIN与Smac在胃癌的发生发展及浸润转移中存在着相互制约的关系。检测两者在胃癌中的表达,有助于从不同角度判断胃癌的恶性生物学行为;LIVIN和Smac有可能成为胃癌临床诊断、判断疗效及监测预后的可靠指标。     

姜黄素对人食管癌Ec-9706细胞凋亡的影响机制

目的:观察姜黄素(euwumin)对人食管癌Ee-9706细胞凋亡作用及凋亡抑制蛋白livin,促凋亡蛋白Smae和caspase-3蛋白表达的影响,探索其分子机制.方法:应用40～160 pmol/L姜黄素处理Ec-9706细胞12～48 h后,采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测Ec-9706细胞凋亡率:免疫蛋白印迹技术(WesternBlot)检测livin,Srnac及caspase-3蛋白的表达.结果:姜黄素作用后Ec-9706细胞生长明显减慢,抑制率9.3%～73.2%(P＜0.01),凋亡率为6.0%～45.2%(P＜0.01),并呈良好的时间-剂量效应关系.药物作用后,Smac,caspase-3蛋白表达升高,livin蛋白表达下调(P＜0.01).结论:姜黄素能明显抑制Ec-9706细胞的增殖,诱导其凋亡.其机制可能与抑制livin蛋白表达,同时促进Smac,easpase-3表达有关.     

FGF-2对小细胞肺癌细胞株NCI-H446 survivin表达及Smac亚细胞定位的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,FGF-2)对小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)细胞株NCI-H446中survivin的表达及Smac亚细胞定位的影响.方法:Western 印迹分析FGF-2对NCI-H446中凋亡抑制蛋白survivin表达的影响.Western印迹和免疫荧光分析FGF-2对线粒体释放的促凋亡蛋白Smac的亚细胞定位的影响.流式细胞术检测NCI-H446的细胞凋亡百分率.Hoechst 33258染色观察FGF-2对NCI-H446细胞凋亡的影响.结果:FGF-2能明显诱导NCI-H446细胞中survivin蛋白的表达,survivin的表达水平与FGF-2作用的浓度和时间明显相关.血清饥饿诱导的Smac蛋白从线粒体的释放可被FGF-2所抑制.FGF-2能明显抑制血清饥饿诱导的凋亡.结论:FGF-2可显著提高SCLC细胞株NCI-H446中凋亡抑制蛋白survivin的表达水平,并显著抑制血清饥饿诱导的促凋亡蛋白Smac释放入胞浆.这可能与其抑制肿瘤细胞凋亡有关.     

铅对发育期大鼠海马细胞凋亡的诱导和XIAP、Smac基因表达的影响

背景与目的:观察醋酸铅对发育期大鼠海马区细胞凋亡及其相关基因XIAP和Smac mRNA表达的影响,以揭示铅的神经毒作用机制.材料与方法:48只健康雄性1月龄SD大鼠,被随机分为:对照组(给予双蒸水灌胃6周),实验组分别按低、中、高剂量,依次给予2、20、200 rag/ks醋酸铅溶液灌胃6周.以石墨炉原子吸收法测血铅浓度;用TUNEL法检测大鼠脑组织细胞凋亡的发生情况;用RT-PCR检测海马细胞XIAP和Smac mRNA的表达.结果:大鼠血液中的铅浓度随染铅浓度的增加而升高(P＜0.01).各醋酸铅剂量组大鼠海马组织凋亡细胞数量明显增加,其凋亡指数显著高于对照组(P＜0.01),并且随染铅浓度的上升而增加;大鼠海马组织的XIAP基因表达有下降趋势,高铅剂量组显著低于对照组(P＜O.01).相关分析显示XIAP基因表达水平与血铅浓度呈负相关.各组大鼠海马组织的Smac基因表达水平无明显差别,和血铅浓度也无相关性(P均＜0.05).结论:铅可诱导发育期大鼠的海马细胞凋亡率上升,该现象可能是通过抑制细胞X/AP基因的表达来发挥作用的.     

LCL161联合Z-VAD-FMK对人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响

目的:探讨第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激动剂小分子(Smac)类似物LCL161联合天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)抑制剂Z-VAD-FMK诱导细胞发生坏死性凋亡对人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响。方法:体外培养MCF-7、MDA-MB-231细胞株。噻唑蓝(MTT)法检测2种细胞株空白对...     

新型Smac模拟物Tat-Smac N7的肿瘤细胞辐射增敏作用

目的 观察Tat-Smac N7融合肽对人肺癌细胞系H460和人食管癌细胞系EC109的辐射增敏作用,探讨其辐射增敏机制.方法 取对数生长期H460和EC109细胞,分为DAPI对照组、FITC-Smac N7和FITC-Tat-Smac N7组,荧光显微镜观察两种细胞不同时间药物入核情况.取对数生长期H460和EC109细胞,分为单纯照射组、照射联合Tat-Smac N7组,单纯照射组给予0、2、4、6 Gy照射,照射联合Tat-Smac N7组中Tat-Smac N7的浓度为20 μmol/L,WST-1测定Tat-Smac N7的辐射增敏作用.取对数生长期H460和EC109细胞,分为对照组、Tat-Smac N7组、单纯照射组和照射联合Tat-Smac N7组,吸收剂量为4 Gy,Tat-Smac N7浓度为20 μmol/L,细胞流式分析仪测定细胞不同时间的细胞凋亡率.结果 Tat-Smac N7融合蛋白进入2种细胞系后2h可以有蓄积,且这种蓄积可延续到24 h,而Smac N7则不能进入细胞.Tat-Smac N7能够增强H460和EC109细胞的辐射敏感性(F=22.2、13.2,P＜0.05),照射联合Tat-Smac N7可明显增加辐射诱导的细胞凋亡率(24 h:F=9.32、5.86,P＜0.05;48 h:F =7.09、8.25,P＜0.05).Tat-Smac N7联合照射后凋亡诱导效应具有时间依赖性.结论 Tat-Smac N7融合肽可促进肿瘤细胞的辐射敏感性,作为一种新的Smac蛋白类似物,有望用于肿瘤的辐射增敏治疗.     

ANTP-SmacN7融合肽对H460细胞的辐射增敏作用

背景与目的肿瘤的辐射耐受制约了放疗疗效,第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂（Second mitochondria-derived activator of caspase, Smac）蛋白类似物可明显提高辐射诱导的肿瘤细胞凋亡,有望成为新型肿瘤辐射增敏药物。本研究旨在探讨新型Smac蛋白类似物ANTP-SmacN7融合肽对肺癌细胞系H460的辐射增敏作用。方法合成ANTP-SmacN7融合肽,连接荧光素FITC以观察融合肽能否进入细胞。对数生长期H460细胞分为空白对照组、单纯照射组、ANTP-SmacN7组和照射联合ANTP-SmacN7组,单纯照射组给予0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy照射,照射联合ANTP-SmacN7组中ANTP-SmacN7的浓度为20μmol/L,WST-1测定H460细胞的增殖。流式细胞仪测定细胞处理后24 h和48 h的细胞凋亡率。Western blot实验检测caspase3和cleaved caspase3的表达水平。结果 ANTP-SmacN7融合能够顺利进入细胞,且能够增强H460细胞的辐射敏感性（F=25.1,P<0.01,增敏比为1.86）,照射联合ANTP-SmacN7可明显降低H460细胞的克隆形成率（χ2=45.2,P<0.01;χ2=40.3,P<0.01）,提高cleaved caspase3的表达量,促进caspase3的活化,增加辐射诱导的细胞凋亡率。结论 ANTP-SmacN7融合肽可明显提高H460细胞的辐射敏感性,作为一种新的Smac蛋白类似物有望用于肿瘤的辐射增敏治疗。     

Smac对子宫内膜癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 研究Smac高表达对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法 选择Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-A细胞(低分化腺癌细胞、雌激素受体阴性),应用脂质体法将Smac的过表达质粒pcDNA3.1-Smac转染HEC-1-A细胞,实验分为Smac过表达组、空载体组和空白对照组。应用qRT-PCR和Western blot法检测转染后Smac mRNA及蛋白表达情况。CCK-8法检测过表达Smac对细胞增殖能力的影响。Transwell小室侵袭及迁移实验观察细胞侵袭及迁移能力的变化。结果 Smac过表达组Smac mRNA及蛋白表达比空载体组和空白对照组明显增加(F=172.065,P=0.001;F=697.953,P=0.001)。过表达Smac后,HEC-1-A细胞增殖能力明显减弱(P<0.05)。侵袭及迁移实验结果显示,与空载体组比较,Smac过表达组穿膜细胞数均明显减少(t=9.082,P=0.016;t=6.241,P=0.013)。结论 过表达Smac可明显抑制HEC-1-A细胞的增殖,并显著减弱细胞的侵袭及迁移能力,Smac可为Ⅱ型子宫内膜癌的靶向治疗提供新的研究方向。