奥沙利铂和人参皂苷Rg3不同联合方式对人肝癌细胞株SMMC-7721作用的影响

目的 通过体外实验观察奥沙利铂和人参皂苷Rg3不同联合方式对人肝癌细胞株SMMC-7721作用的影响,并初步探讨其机制。方法 采用MTT法观察奥沙利铂、人参皂苷Rg3单药以及两药同时和序贯应用对SMMC-7721细胞增殖的作用;应用流式细胞术分析单药和两药不同序贯方式对细胞周期分布及凋亡的影响;Western blotting检测单药和两药不同序贯方式作用后SMMC-7721细胞cyclin D1蛋白的表达情况。结果 奥沙利铂、人参皂苷Rg3单药、两药同时及序贯给药对SMMC-7721细胞增殖均有明显的抑制作用。同时用药组的增殖抑制作用优于人参皂苷Rg3先用组（P＜0.05）,但与奥沙利铂先用组比较未见明显差异（P＞0.05）;奥沙利铂先用组的效果优于人参皂苷Rg3先用组（P＜0.05）。流式细胞术分析显示,奥沙利铂主要将细胞阻滞在S期、G₂／M期,人参皂苷Rg3主要将细胞阻滞在G₀／G₁期,同时用药组和奥沙利铂先用组的凋亡率相似（P＞0.05）,阻滞细胞于G₂／M期,且凋亡率均较先用人参皂苷Rg3组高（P＜0.05）。Western blotting显示,两药序贯及同时应用组cyclin D1蛋白表达明显低于单药组,奥沙利铂先用组与同时用药组相似,均低于人参皂苷Rg3先用组。结论 奥沙利铂、人参皂苷Rg3序贯及同时应用较单药更能抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,先用奥沙利铂后序贯人参皂苷Rg3与两药同时应用的协同增效作用相似,均优于先用人参皂苷Rg3后序贯奥沙利铂,其机制可能与奥沙利铂先用组和同时用药组将细胞阻滞在S期、G₂／M期,增加促凋亡作用,同时下调cyclin D1蛋白的表达水平有关。     

辣椒碱对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及机制

目的:观察辣椒碱(capsaicin)对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及可能的分子机制。方法:设立不同浓度辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法(CCK-8)检测辣椒碱(0,25,50,75,100,150,200,250μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后的细胞活性;穿透小室(transwell)检测辣椒碱(0,50,75,100μmol·L-1)的肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测辣椒碱(0,50,75,100μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后,对细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达水平的影响。结果:与空白组比较,辣椒碱(25,50,75,100μmol·L-1)作用24 h后均对细胞存活率未产生明显影响,从150μmol·L-1开始,随着辣椒碱浓度逐渐升高,细胞存活率逐渐下降(P0.01),且呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱(50,75,100μmol·L-1)干预能显著抑制肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭,且呈浓度依赖效应(P0.01);与空白组比较,辣椒碱(50,75,100μmol·L-1)干预能明显上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白表达水平(P0.01),下调Vimentin,MMP-2,MMP-9蛋白的表达水平(P0.01)。结论:辣椒碱干预对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭具有抑制作用,可能与其上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白的表达,下调肝癌SMMC-7721细胞中Vimentin,MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关。     

消癌解毒方诱导人肝癌SMMC-7721细胞miRNA表达变化

目的:探讨消癌解毒方对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及微小核糖核酸(microRNA,miR)-25-3p,miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p,miR-182-5p表达谱的影响。方法:将12只雄性大耳白兔随机分为4组,分别为消癌解毒方高、中、低剂量(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)组和空白组,各组分别给予消癌解毒方及生理盐水灌胃4 d。4 d后于颈动脉中取血清并配制培养基。用消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清及空白血清的培养基处理人肝癌细胞株SMMC-7721,噻唑蓝(MTT)比色法检测肿瘤细胞增殖活性、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)法验证人肝癌细胞SMMC-7721中miR-25-3p,miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p和miR-182-5p的表达水平。结果:经过12,24,48 h后,消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖均存在抑制作用。随着消癌解毒方含药血清浓度的增加,其对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制率也相应增加。其中高剂量组含药血清的抑制效果最好,其干预12,48 h的吸光度A较同期空白组明显降低(P0.05)。高剂量组干预24 h A比同期空白组显著降低(P0.01),该组抑制率为42.86%。Real-time PCR证实消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清的培养基能诱导miR-25-3p,miR-182-5p表达下调,诱导miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p表达上调。且高剂量组的调控作用较空白组更显著(P0.01)。结论:消癌解毒方可能通过诱导miRNA表达谱的改变而参与抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖作用,但其具体机制仍有待进一步研究。     

辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL对肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用

目的：研究携带可溶性人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(shTRAIL)基因的辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL在人肝癌细胞株中的表达及其促凋亡作用。方法：体外通过脂质体转染SMMC7721细胞。转染细胞分别接受0(假照组)、2、5和10 Gy X线照射,ELISA法检测sTRAIL的表达;细胞分为正常SMMC7721组,分别接受0(假照组)、2和5 Gy X线照射的转染空质粒pshuttle-Egr1组及转染重组质粒pshutlle-Eyr1-shTRAIL组,采用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率;分别取SMMC772细胞、转染STRAIL细胞、转染空载体及照射组细胞,采用克隆形成实验检测细胞存活率。结果：不同剂量X射线照射SMMC7721-shTRAIL细胞上清中可溶性TRAIL表达量明显高于假照组（P< 0.001）;与假照组比较,照射转染后SMMC7721细胞的凋亡细胞百分数明显增加（P<0.05或P<0.001）,细胞存活率明显下降（P<0.05
或P<0.001）。结论：pshuttle-Egr1-shTRAIL     

不同LET12C6+照射人肝癌细胞SMMC-7721的存活曲线

目的 研究不同传能线密度(LET)的重离子^12C^6 对体外培养的人肝癌细胞SMMC7721存活的影响，以研究人肝癌细胞对不同LET重离子的辐射敏感性。方法 用克隆形成法研究细胞的存活情况。结果 70keV／μm的细胞存活率为10％(Ds=0.1)和1％(Ds=0.01)时的吸收剂量分别为2．94Gy和5．88Gy；30keV／μm的Ds=0.1和Ds=0.01分别为4．00Gy和8．00Gy。结论 70keV／μm比30keV／μm对人肝癌细胞SMMC—7721有更大的细胞杀死效应。     

姜黄素对荷瘤裸鼠皮下移植瘤的影响

目的观察姜黄素在体内对人肝癌细胞株SMMC-7721的抗肿瘤作用。方法用姜黄素在SMMC-7721肝癌细胞荷瘤裸鼠的瘤体内进行注射治疗,12 d后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重,观察肿瘤生长变化,并通过免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3等与细胞凋亡相关因子的表达。结果姜黄素可抑制SMMC-7721细胞对裸鼠的致瘤能力,肿瘤体积较对照组显著减小（P〈0.01）,质量也明显小于对照组（P〈0.01）,肿瘤生长抑制率达47.7%,免疫组化结果显示阿的平能明显上调与细胞凋亡相关因子Bax和Caspase-3的表达和下调Bcl-2和Survivin的表达。结论姜黄素能抑制SMMC-7721细胞的体内致瘤能力。     

过表达整合蛋白α5β1的SMMC7721细胞株的建立和鉴定

构建过表达整合蛋白α５β１的ＳＭＭＣ７７２１细胞株。方法应用分子克隆技术和基因转染建立过表达整合蛋白α５β１的ＳＭＭＣ７７２１细胞株,应用ＲＴ－ＰＣＲ及流式细胞术鉴定ＳＭＭＣ７７２１细胞表面整合蛋白α５β１的表达。结果获得过表达整合蛋白α５／β１的ＳＭＭＣ７７２１细胞株α５．３－７７２１,β１．６－７７２１,α５β１．６－７７２１细胞。结论整合蛋白α５β１基因转染后,ＳＭＭＣ７７２１细胞整合蛋白α５β１的ＲＮＡ及蛋白质表达明显提高。过表达整合蛋白α５β１的ＳＭＭＣ７７２１细胞株的建立有助于研究整合蛋白α５β１在肝癌中的作用     

三氧化二砷对人肝癌细胞株SMMC-7721中p27~(kip1)及其相关分子Skp2表达的影响

目的 通过检测三氧化二砷(As2O3)对肝癌SMMC-7721细胞周期素依赖性激酶抑制剂(CDKI)p27kip1及S期激酶相关蛋白2(Skp2)的影响,探讨其抗癌作用机制.方法 体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,用2μmol/L As2O3处理72h,流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率,应用Western blot方法检测p27kip1、Skp2及CDK2基因编码蛋白的表达.结果 与对照组比较,As2O3使SMMC-7721细胞周期阻滞在G2/M期.经As2O3作用的人肝癌细胞p27kip1基因编码蛋白表达增加,而p27kip1相关分子Skp2及CDK2的表达减少.结论 As2O3可干扰细胞周期的进程,抑制SMMC-7721细胞的增殖.其作用机制与上调p27kip1蛋白及下调Skp2、CDK2有关.     

葡萄球菌肠毒素B对人肝癌和肺癌传代细胞株细胞增殖的影响

目的探讨葡萄球菌肠毒素B(SEB)对人肝癌传代细胞株SMMC7721和人肺癌传代细胞株D6细胞增殖的抑制作用.方法采用MTT比色法,检测不同浓度和作用时间的SEB对人肝癌传代细胞株SMMC7721和人肺癌传代细胞株D6增殖的抑制作用.结果应用不同浓度的SEB3d后,对SMMC7721细胞和D6细胞的增殖均产生抑制作用;5、10、20ng/ml的SEB均能抑制SMMC7721细胞和D6细胞的体外增殖,抑制的程度与SEB的浓度、作用时间有关.结论葡萄球菌肠毒素B对人肝癌传代细胞株SMMC7721和人肺癌传代细胞株D6能产生一定的增殖抑制作用.     

油茶籽提取物的体外抗癌活性

目的 探讨油茶籽的95%乙醇提取物和水提取物对两种癌细胞增殖的抑制作用.方法 常规传代培养人乳腺痛细胞(MCF-7)和人肝癌细胞(SMMC-7721),采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞的活性.结果 油茶籽乙醇提取物和水提取物对体外培养的MCF-7和SMMC-7721细胞在7.82～500.00 μg·ml-1剂量内均具有剂量依赖性的抑制作用,与空白对照组比较,差异显著(P<0.05);阳性对照药10 μg·ml-1甲氨喋呤和硫酸长春新碱亦可显著地抑制两种细胞的增殖.体外增殖抑制作用的强弱为油茶籽乙醇提取物>水提取物.结论 两种提取物对MCF-7和SMMC-7721细胞具有明显的抑制作用.