番荔枝内酯类化合物基于耐阿霉素肝癌细胞SMMC-7721/ADR的构效关系研究

研究12种番荔枝内酯类化合物对耐阿霉素肝癌细胞SMMC-7721/ADR的作用,并初步探究其构效关系。实验利用实时荧光定量PCR法检测12种番荔枝内酯类化合物:annosquamin A(1),annosquamin B(2),annotemoyin~(-1)(3),uvariamicinⅡ(4),annosquacin D(5),annosquacin B(6),isodesacetyluvaricin(7),uvarigrandin A(8),squamostatin D(9),squamostatin E(10),squamostatin A(11),12,15-cis-squamostatin A(12)对SMMC-7721/ADR细胞中相关基因NDUFV2的表达量。该研究发现所有受试化合物均使SMMC-7721/ADR中NDUFV2表达量有所下调,邻双四氢呋喃环型番荔枝内酯活性最强,而间双四氢呋喃环型番荔枝内酯活性最弱。内酯环与邻近的四氢呋喃环间碳数越少,作用越强;对于邻双四氢呋喃型番荔枝内酯化合物,链上含有的羟基个数越多,化合物作用可能越强;对于间双四氢呋喃型番荔枝内酯化合物,链上含有的羟基个数越少,化合物作用可能越强;且受试化合物中均是含有3个羟基取代的化合物作用较强;相对构型为苏式的番荔枝内酯的作用比赤式的强,四氢呋喃环为顺式构型的番荔枝内酯的作用比反式的强;在其他基团完全相同的情况下,长链烷基端部与邻近的四氢呋喃环之间的碳数越少,作用越强。     

透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞p53和PUMA蛋白表达的影响

目的观察透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞形态和p53和p53上调凋亡调控因子(PUMA)蛋白表达的影响,探讨透骨草提取物诱导SMMC-7721细胞凋亡的分子机制。方法用倒置显微镜观察透骨草提取物对SMMC-7721细胞形态的影响;采用免疫组化方法检测透骨草提取物对SMMC-7721细胞p53和PUMA蛋白表达的影响。结果倒置显微镜观察可见,40.91μg/mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞体积减小,形态轮廓不清晰,细胞皱缩变形,细胞脱壁增加。免疫组化检测结果显示,40.91μg/mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞p53蛋白和PUMA蛋白表达均明显高于与对照组(P<0.01)。结论透骨草提取物可能通过上调p53和PUMA蛋白表达,诱导SMMC-7721细胞凋亡。     

MTT法研究酸枣仁皂苷A对肝细胞、肝星状细胞和肝癌细胞增殖的影响

目的观察不同质量浓度酸枣仁皂苷A(jujuboside A,JuA)对体外培养人肝LO2细胞、肝星状细胞HSC-T6和人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用。方法 3种细胞分别设有对照组和实验组(终质量浓度80,40,20,10和5μg.mL-1),MTT法检测各组细胞活性,根据抑制率确定JuA对不同细胞的有效质量浓度范围和最优加药时间。结果 JuA对LO2细胞和HSC-T6的增殖抑制作用差异无统计学意义(P>0.05),但对SMMC-7721的增殖抑制作用差异具有统计学意义(P<0.05),且优化出JuA的有效质量浓度范围为5～80μg.mL-1,最优加药时间为48h,此时IC50值为1.996μg.mL-1。结论 JuA具有潜在的抗肝脏肿瘤细胞作用,而对LO2细胞和HSC-T6不具有毒性作用,值得进一步深入研究。     

瑞戈非尼通过miR-122调控人肝癌SMMC-7721细胞的增殖和凋亡

目的:探究瑞戈非尼(regorafenib,Rego)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响及其可能的机制.方法:将SMMC-7721细胞分为对照组及Rego组,分别用0、10 μmol/L Rego处理48 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,qPCR检测细胞中miR-122的表达.采用脂质体转染的方法将合成...     

脱落酸抑制人肝癌细胞增殖

目的探讨脱落酸抑制SMMC-7721人肝癌细胞增殖作用的机制。方法免疫细胞化学检测P53、Ki-67、Cyclin D1蛋白表达;RT-PCR检测P53和端粒酶mRNA表达。结果经脱落酸(ABA)、环六亚甲基二乙酰胺(HMBA)和ABA HMBA作用后细胞内mtP53、Cyclin D1、Ki-67及细胞内mt P53、hTERT mRNA表达水平均明显降低(P<0.05)。结论ABA抑制SMMC-7721人肝癌细胞增殖,其作用机制可能是调控细胞周期,降低mtP53、Ki-67、Cyclin D1蛋白及mtP53,hTERT mRNA表达。     

三氧化二砷对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）对人肝癌SMMC-7721细胞黏附、侵袭、转移能力的影响以及其机制。方法：采用MTT法观察人肝癌SMMC-7721细胞经As2O3作用前后对基底膜黏附能力的影响;Transwell膜侵袭系统观察SMMC-7721细胞经As2O3作用前后游走与穿透基底膜能力的改变。免疫细胞化学方法检测人肝癌细胞经As2O3作用前后CD44V6表达的改变。结果：As2O3能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞与m arigel的黏附、抑制细胞游走与穿透基底膜的作用（P〈0.05）,能抑制人肝癌细胞CD44v6的表达（P〈0.05）。结论：As2O3具有抑制人肝癌细胞的侵袭、转移能力,其抑制作用可能与CD44v6的表达下调有关。     

转录因子C/EBP对肝癌细胞SMMC-7721影响

目的 探讨靶向CCAAT/增强子结合蛋白-β(C/EBPβ)基因沉默对肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡、迁移的影响。方法 设计C/EBP-β及eGFP、shRNA序列,装入pLKO.1-TRC质粒,进行慢病毒包装,感染肝癌SMMC-7721细胞,嘌呤霉素筛选并培养稳定干扰细胞株,cell counting kit-8(CCK-8试剂盒)法、transwell细胞迁移实验分别检测沉默C/EBP-β基因对SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响,蛋白印迹(Western blot)检测干扰效率及沉默C/EBP-β基因对SMMC-7721细胞的凋亡相关蛋白影响。结果 沉默C/EBP-β基因的SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β肿瘤细胞的增殖速度明显提高(相对增值率136.8%,P<0.05),细胞迁移能力也明显增强(迁移抑制率为-292.3%,P<0.05),且细胞周期蛋白cyclin B1的表达增强(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达增强(P<0.05),凋亡相关蛋白Bax的表达下降(P<0.05)。结论 沉默C/EBP-β对肝癌细胞SMMC-7721的增殖、迁移有促进作用,对其凋亡有抑制作用。     

细胞因子与抗肿瘤药物体外协同抑制肝癌、宫颈癌细胞的敏感性实验

目的：探讨3种细胞因子单一、协同以及与化疗药物顺铂（DDP）的联合作用杀伤肝癌SMMC-7221细胞、宫颈癌Hela细胞株的影响。方法：应用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT比色法）、检测与化疗药物DDP单独或联合应用组及药物作用的12h与24h的光密度值（OD）,计算杀伤率,以台盼蓝拒染计算杀伤率对照。结果：单独应用3种细胞因子时,IFN—a、TNF—a对肝癌细胞、宫颈癌Hela细胞毒作用,IL-2对肝癌细胞、宫颈癌Hela细胞则细胞毒作用不明显。IFN—a、IL-2、TNF—a可以增强DDP的抑瘤作用,与DDP单独作用具有显著性差异（P〈0．01）。IFN-a、IL-2、TNF-a联合作用具有协同作用,均与单一应用具有显著性差异（P〈0．01）。细胞因子均可以增强顺铂（DDP）的抑瘤作用并与其作用的先后及时间具有依赖关系。结论：MTT比色法为临床肿瘤化疗的药物敏感性检测提供了简便、快速的方法。不同类型的肿瘤有着不同的药敏谱。干扰素-a（IFN—a）、肿瘤坏死因子（TNF—a）、白细胞介素-2（IL-2）与DDP联合具有协同作用,为肝癌、宫颈癌病人化疗提供了理想的参考方案。