高效液相色谱法测定清热丸中黄芩苷的含量

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定清热丸中黄芩苷的含量。方法：采用反相高效液相色谱法,C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液（51∶49）,检测波长为277 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为40℃。结果：黄芩苷在0.086 5~0.770 4μg与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9）,该制剂中黄芩苷平均回收率为99.47%,RSD为1.08%（n=6）。结论：所建立的方法简便易行、结果可靠、重复性好,可用于清热丸中黄芩苷的含量测定。     

补肾健脾活血方对去卵巢大鼠骨转换主要生化指标的影响

目的：观察补肾健脾活血方对绝经后骨质疏松症患骨转换主要生化标志物的影响。方法：选用6月龄SD雌性大鼠84只，随机分成正常组，假手术组，模型组，中药对照组，西药对照组，补肾健脾活血方大，小剂量组共7组，用卵巢切除的方法进行物造模，给药90天后检测血清E2、BGP和尿DPD等指标进行观察，结果：补肾健脾活血方能明显增加血清E2，BGP的含量，降低尿DPD含量（P＜0．01），其作用优越于西药雌激素治疗，且与剂量呈正相关。结论：补肾健脾活血方能促进骨形成，降低骨吸收。     

经方调治老年寒热错杂疾病举隅

[目的]总结运用经方调治老年寒热错杂的慢性疾病的经验体会.[方法]例举笔者临床验案数则,从病因病机、治则治法、辨证用药等方面,分析经方调治老年病的经验.[结果]老年慢性病由于自身体质、长期失治误治,造成临床症状繁多、病机复杂甚至矛盾,治疗选方需要格外谨慎推敲.[结论]经方从方证辨证论治老年寒热错杂的慢性疾病,有令人满意的疗效.     

补肾通络防衰方对大鼠脑线粒体自由基水平的影响

目的：探讨衰老的机理和补肾通路防衰方延缓衰老的作用机制，观察补肾通路防衰方对大鼠脑线检体自由基的影响。方法：将84只SD大鼠分成青年组、老年空白组、补肾对照组、通路对照组、维生素E对照组、补肾通路防衰方大剂量组和小剂量组共7组，予以相应治疗60天后，提取脑线检体，检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD）活性和还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果：补肾通路防衰方能明显提高脑线检体SOD活性和GHS含量，降低线检体MDA含量，其作用优于单纯补肾治疗、单纯通路治疗以及维生素E治疗，且与剂量呈正相关。结论：肾虚夹瘀血痰浊阻络是衰老的基本病理。补肾通路防衰方能通过影响线粒体自由基水平来阻止线粒体老化，从而起到延缓衰老的作用。     

自拟宝肾方对糖尿病大鼠肾组织VEGF表达的影响及其疗效

目的：探讨自拟宝肾方对糖尿病大鼠肾组织血管内皮生长因子VEGF表达的影响及其疗效．方法：采用腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型．随机分为正常对照组（C组）、糖尿病模型组（D组）和宝肾方治疗组（DB组）．给药8wk后,观察各组大鼠血糖（BG）、体质量（BW）、肾质量／体质量（KW／BW）、血尿素氮（BUN）、胆固醇（CHO）、内生肌酐清除率（Ccr）、尿白蛋白排泄率（UAER）,行肾组织HE染色,观察肾组织病理形态学改变,采用免疫组化方法分析肾组织VEGF蛋白的表达情况．结果：D组各生化指标与C组存在明显差异（P〈0．01）;DB组较D组KW／BW降低（P〈0．05）,Ccr明显升高（P〈0．01）,BUN,CHO,UAER明显降低（P〈0．01）．D组较C组肾组织VEGF蛋白表达明显升高（P〈0．01）;DB组较D组肾组织VEGF蛋白表达降低（P〈0．05）．结论：宝肾方对糖尿病大鼠肾功能具有保护作用,其机制可能是调节肾组织VEGF的表达,从而减轻肾脏病理损害,发挥其保护作用．     

益气化瘀补肾方对大鼠气虚型颈椎病的作用机制研究

目的：探讨益气化瘀补肾方对气虚型颈椎病大鼠的作用机制。方法：选择3月龄雌性SPF级SD大鼠30只,随机分为正常组、气虚型颈椎病模型组（模型组）和益气化瘀补肾方组（治疗组）,每组10只。正常组不施加任何手术,气虚型颈椎病模型采用动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型复合疲劳加饥饱失常法气虚模型建立,手术3个月后治疗组大鼠予益气化瘀补肾方灌胃治疗1个月。通过放射免疫学、颈椎间盘组织病理学、免疫组织化学、分子生物学等技术研究益气化瘀补肾方作用机制。结果：模型组动物出现精神委靡、少动、体质量下降等气虚表现,cGMP降低,cAMP／cGMP增高,三酰甘油和CD62p增高,E2降低,颈椎间盘退变,Ⅱ型胶原减少,Agc1、Col2a1表达减少,MMP-13表达增高;治疗组与模型组相比,动物精神状态恢复稍快,cAMP／cGMP增高,三酰甘油和CD62p降低,颈椎间盘退变有所改善,Ⅱ型胶原增加,C012a1和TIMP-1表达增高。结论：益气化瘀补肾方通过免疫、代谢、凝血等系统改善证候指标并延缓椎间盘退变。     

补肾安胎方及其拆方对控制性超排卵小鼠胚胎着床干预的比较

目的观察补肾安胎方及其补肾、活血组分对控制性超排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)小鼠胚泡围着床期类肝素结合表皮生长因子(heparin-binding epidermal growth factorlike growthfactor,HB-EGF)及其受体的影响,探讨补肾安胎方及其拆方对着床环节的作用机制。方法将雌性小鼠随机分为正常组(N)、模型组(M)、补肾安胎组(BH)、补肾组(BS)和活血组(HX)。观察妊娠第1天阴栓率、妊娠第6天妊娠率和孕鼠着床位点数;采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定妊娠第5天、第6天子宫内膜HB-EGF mRNA的表达,采用免疫组织化学法测定同期子宫内膜表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)蛋白的表达。结果模型组阴栓率、妊娠率较正常组显著降低(P0.01),着床位点数显著升高(P0.01);中药各组治疗后,阴栓率、妊娠率均较模型组显著升高(P0.05,P0.01),但着床位点数均显著降低(P0.05,P0.01),以补肾安胎组作用最为明显;活血组阴栓率高于补肾组(P0.05),着床位点数较补肾组降低(P0.01),妊娠率两组比较,差异无统计学意义。正常组HB-EGF mRNA表达最高,模型组显著低于正常组(P0.01),各中药组均显著高于模型组(P0.01);各中药组HB-EGF mRNA表达比较,补肾安胎组明显高于活血组和补肾组(P0.05),活血组高于补肾组(P0.05);妊娠第6天,HB-EGF mRNA表达量较妊娠第5天降低。EGFR蛋白在围着床期子宫内膜腺体和基质细胞胞质中表达,各组小鼠EGFR蛋白表达空间分布差异无统计学意义。正常组EGFR蛋白表达丰富;模型组表达较正常组显著减少(P0.01),部分缺失;中药各组EGFR表达量均高于模型组(P0.01);其中补肾活血组高于活血组和补肾组(P0.05,P0.01),活血组高于补肾组(P0.05,P0.01)。结论补肾安胎方及补肾、活血组分均能够改善控制性超排卵小鼠的着床率和妊娠率,促进胚泡生长和HB-EGF及其受体的表达,其中以补肾安胎全方作用最佳,补肾、活血组分在改善胚泡着床过程中具有协同作用。     

HPLC法测定清热暗疮丸中栀子苷的含量

目的寻找测定清热暗疮丸中栀子苷含量的可靠方法,以控制产品的质量。方法高效液相色谱法,乙腈-水(11∶89)为流动相;色谱柱为Diamonsil(钻石)C18柱(250mm×4.6mm×5μm),体积流量为1.0mL/min,检测波长为238nm,采用外标法。结果栀子苷在9.08～105.8μg范围里呈较好的线性关系;栀子苷的回收率为100.19%。结论高效液相色谱法操作简单,结果可靠,重复性好,为清热暗疮丸质量控制提供科学依据。     

清热败毒合剂微生物限度检查方法的验证

目的:建立清热败毒合剂微生物限度检查方法.方法:用常规法对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、大肠埃希菌进行细菌、霉菌计数方法的验证,用常规法对大肠埃希菌进行验证.结果:常规法除金黄色葡萄球菌外,试验组及稀释剂对照组的回收率均大于70%,采用薄膜过滤法后金黄色葡萄球菌的试验组及稀释剂对照组的回收率也可达到70%以上;采用常规法即可检出大肠埃希菌和大肠菌群.结论:本品的微生物限度检查方法为:用常规法测定其霉菌酵母菌数;用薄膜过滤法(每膜每次冲洗 50 mL pH 7.0氯化钠蛋白胨缓冲液,共3次 150 mL)测定其细菌数;采用常规法检查其控制菌.     

补肾固本方对大鼠骨质疏松模型中PI3K/AKT/mTOR信号通路表达的调控研究

目的观察补肾固本方对去卵巢骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠骨组织中PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响,探讨补肾固本方干预OP的作用机制。方法将100只SD大鼠随机分为5组:正常组(C组)、模型组(M组)、补肾固本方组(B组)、补肾固本方+PI3k受体特异性阻断剂LY294002组(B+L组)、PI3k受体特异性阻断剂LY294002组(L组),除正常组外,其余4组建立去卵巢大鼠OP模型。药物连续干预12周后,采用ELISA方法检测血清中E2、BGP、ALP水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组股骨组织中LC3、Beclin1、caspase-9 mRNA的表达情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测各组股骨组织中PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达。结果补肾固本方可显著增高OP大鼠血清E2水平,降低BGP、ALP水平,显著上调LC3、Beclin1表达水平,降低caspase-9、PI3K、p-AKT、mTOR的表达;而上述变化能够被PI3k受体特异性阻断剂LY294002所阻断,且其差异具有统计学意义(P0.05)。结论补肾固本方减少去卵巢后大鼠OP的发生,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路及其下游基因蛋白表达有关。