基于iTRAQ技术结合2D-LC-MS/MS研究黄连对CYP450同工酶表达的影响

黄连是临床常用药材,在中医药中被广泛应用,具有清热燥湿、泻火解毒之功,中药成分比较复杂,细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)同工酶是药物的主要代谢酶,研究黄连对CYP450酶的影响具有很重要的临床意义。实验选用大鼠肝脏组织,差速离心法分离肝微粒体,BCA(bicinchoninic acid)蛋白定量,应用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)技术结合2D-LC-MS/MS筛选差异蛋白。黄连一共鉴定出30个CYP450同工酶,7个表达上调,8个表达下调,15个没有发生变化。iTRAQ技术结合2D-LC-MS/MS可以全面研究CYP450酶,但黄连有必要进一步在体外水平对其进行评价,预防潜在的临床药物相互作用。     

含附子方剂在慢性肝炎治疗中的应用

慢性肝炎多由于正气不足,邪毒内侵所致。由于本病多使用清热解毒,清热泻火的苦寒之剂,加之本病病程较长,病势缠绵,宜导致人体脾肾阳气受到损伤。附子能回阳救逆,祛寒燥湿,温补肾火。笔者运用以附子为主药的方剂治疗慢性肝炎疗效显著,如茵陈术附汤、四逆汤、实脾散、真武汤,能使病邪得以清除,病情得以缓解。附子为有毒之品,在临床运用过程中,应炮制先煎等减轻毒性,严格掌握用药剂量,避免出现毒付反应。     

天麻素注射液治疗眩晕临床疗效评价

目的:观察静脉滴注天麻素注射液治疗眩晕症的临床疗效及安全性。方法:选择诊断明确的眩晕患者100例随机分两组,治疗组50例,对照组50例。治疗组用天麻素注射液600mg溶入5%葡萄糖注射液500ml中静脉点滴,1次/d,7d为1个疗程,连用2个疗程。对照组用山莨菪碱注射液20mg溶入5%葡萄糖注射液500ml中静脉点滴,疗程相同。结果:治疗组有效率达96%,对照组有效率为76%(P<0.01)。结论:天麻素注射液治疗眩晕症安全可靠,疗效明显,是较理想的药物。     

葛花人参配伍的解酒护肝机制

目的:初步阐释中药葛花和人参在化学和药效学层面的配伍机制,为临床应用提供理论参考依据。方法:利用高分离度快速液相色谱与四极杆-飞行时间质谱联用(RRLC-Q-TOF-MS)分析葛花人参配伍前后的化学成分,流动相0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~12 min,15%B;12~20 min,15%~50%B),流速0.4 m L·min~(- 1),样品进样量5μL。主成分分析法(principal component analysis,PCA)统计配伍前后化学成分的差异,并对2味中药配伍进行药效学实验。结果:鉴定了葛花和人参配伍前后的化学成分,质谱负离子模式时,配伍合煎液中尼泊尔鸢尾素,6″-O-木糖黄豆黄苷,人参皂苷Rg1,人参皂苷Rf等含量明显增高。通过PCA分析,可以明显区分配伍前后的2个组分。酶活性实验葛花对酶反应有促进作用,体内实验中3个考察指标有显著变化。结论:葛花和人参配伍在体内外实验中的解酒护肝作用明显,并且检测出了化学成分的含量及变化,为临床应用和产品开发提供了理论参考。     

知母黄柏药对治疗糖尿病骨质疏松症的药效物质和作用机制研究进展

糖尿病骨质疏松症是由长期高血糖造成的全身代谢性骨病,已成为糖尿病的主要并发症之一,具有骨量减少、骨微结构破坏、骨脆性增加等特点。知母黄柏药对是一个经典中药配伍组合,在多数抗糖尿病骨质疏松症方剂中都有体现。现代药理研究表明,药对促进骨形成和抑制骨吸收的药效作用与Nrf2、MAPK、Wnt、RANK/RANKL信号通路及细胞自噬等密切相关。药对配伍能改变药效物质的溶出度和药动学,且药效物质有协同增效的作用。本文总结了知母黄柏药对的药效物质和抗糖尿病骨质疏松症作用机制,为该药对的进一步研究和开发提供参考。     

基于熵权法结合灰色关联法和TOPSIS法的不同产地知母及盐知母质量评价研究

目的 利用熵权法结合灰色关联法和TOPSIS法建立知母质量评价模型,评价不同产地知母及其炮制品盐知母的质量。方法 以水分、芒果苷、知母皂苷BⅡ、多糖总糖、糖蛋白及糖醛酸的含量和多糖得率作为检测指标,以熵权法计算权重,结合灰色关联法与TOPSIS法对各项指标进行统计分析,建立知母质量评价模型,综合考察忻州、安国和汉中3个产地共15个批次的知母及其炮制品盐知母的质量。结果 不同产地不同批次的知母各指标水平大不相同;将知母炮制前后各项指标进行对比,发现盐炙后水分降低,皂苷减少,多糖含量增加;15批知母及炮制品盐知母质量排序结果TOPSIS与灰色关联分析基本一致。结论 基于熵权法的灰色关联法-TOPSIS法建立的质量评价模型方便有效,可用于知母质量评价。     

一种具有胰蛋白酶抑制活性的半夏蛋白的纯化与N端氨基酸序列分析

目的分离纯化具有胰蛋白酶抑制活性的半夏蛋白,分析其对胰蛋白酶的抑制活性、抑制机制与N端氨基酸序列。方法采用以胰蛋白酶为配体的亲和色谱和Sephadex G-50凝胶过滤法,从半夏蛋白粗提液的40%(NH_4)_2SO_4沉淀中分离纯化活性半夏蛋白;采用12%SDS-PAGE鉴定其纯度,并估算其相对分子质量;采用Ed-man降解法分析其N-端氨基酸序列。结果纯化的活性半夏蛋白经SDS-PAGE检测呈现单一条带,相对分子质量为1.4×10～4;比活力为1059.012U/mg,活力回收率为24.40%;对胰蛋白酶的质量抑制比为1:4.72,抑制常数(Ki)为7.17×10～(-6)mol/L;其N端前6个氨基酸残基顺序为DPVVDG。结论该活性半夏蛋白是一种丝氨酸蛋白酶抑制刺,为胰蛋白酶的竞争性抑制剂。     

《浙江省中药炮制规范》2015年版温山药等品种起草修订情况

目的 对《浙江省中药炮制规范》2015年版中部分饮片标准的起草修订情况进行介绍。方法 对中药饮片质量标准进行起草和复核。结果 新版炮制规范检验项目更科学、合理。结论 《浙江省中药炮制规范》2015年版更好地控制了中药饮片的质量,保障用药安全有效。     

产地及生长年限对土茯苓中落新妇苷含量的影响

目的 考察产地和生长年限对土茯苓中落新妇苷含量的影响,了解近年来土茯苓商品的来源和各地产土茯苓落新妇苷含量的分布情况。方法 实地调查、采集并采用HPLC测定落新妇苷的含量。结果 目前市场上土茯苓商品主要来自国内南方各省,此外还有部分来自越南。国产土茯苓有约70%的样品落新妇苷含量不符合中国药典2015版规定,而越南产土茯苓含量全部符合规定,且远高于限度要求。结论 不同产地土茯苓落新妇苷含量差别较大,生长年限对土茯苓中落新妇苷含量影响较小,越南产土茯苓能否供药用尚需做进一步研究。     

菝葜抗炎有效部位群在大鼠肠外翻试验中的吸收特性考察

目的:考察菝葜抗炎有效部位群中6种成分的体外肠吸收特征,为该部位的制剂开发及药代动力学研究提供参考。方法:采用大鼠肠外翻模型,通过HPLC测定不同取样时间肠内液中白藜芦醇苷、落新妇苷、氧化白藜芦醇、槲皮苷、黄杞苷、白藜芦醇的含量,流动相乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0~18 min,12%~18%A;18~33 min,18%A;33~45 min,18%~21%A;45~50 min,21%A),流速1 m L·min-1,检测波长290 nm,计算吸收动力学参数,考察6个成分在不同肠段(十二指肠、空肠和回肠)的吸收情况。结果:白藜芦醇苷在各肠段吸收无明显差异,而其他5种成分在各肠段的吸收差异较大;6种成分在同一肠段的吸收有较大差异,在十二指肠、空肠和回肠中的吸收率分别为0.85%~2.79%,0.70%~2.73%和0.90%~1.77%。槲皮苷在十二指肠和空肠的吸收率最高,白藜芦醇苷在回肠的吸收率最高;氧化白藜芦醇吸收速度明显比其他5种成分慢,在十二指肠中于90 min后才表现出较明显的吸收。结论:白藜芦醇苷、落新妇苷、槲皮苷、黄杞苷、白藜芦醇在大鼠离体小肠的吸收为一级动力学过程,选择外翻肠囊法可评价菝葜提取物中多成分的肠吸收特性。