慢性乙肝患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的检测及临床意义

目的 探讨自身抗体阳性慢性乙肝（CHB）患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（Treg）的特点.方法 自身抗体阳性的CHB患者20例、自身抗体阴性的CHB 20例、自身免疫性肝炎15例.用斑点免疫层析法检测其抗单链DNA抗体（ss-DNA）、抗双链DNA抗体（ds-DNA）、抗核抗体（ANA）、可提取核抗原抗体谱（ENA）、抗线粒体IgM抗体（AMA）.流式细胞术检测外周血中的CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例,并与20例正常人对照组的上述指标进行比较.结果 自身抗体阳性CHB组CD4＋CD25＋T细胞较正常人无减低（P＞0.05）,但CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞显著降低（P＜0.05）;与自身抗体阳性CHB比较,自身抗体阴性CHB组CD4＋CD25＋T细胞和CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞均显著升高（P＜0.05）,而自身免疫性肝炎情况则相反.结论 自身抗体阳性CHB患者Treg细胞功能较正常人显著降低,而且比自身抗体阴性CHB患者的Treg细胞数量及功能均偏低.这可能是自身抗体阳性CHB病情较重、反复发作的原因之一.     

FUT4和LeY在子宫内膜异位症中的表达及临床意义

目的 探讨FUT4和LeY在子宫内膜异位症患者中的表达情况及其临床价值。方法 选择2010年3月～2012年6月辽宁省大连市妇幼保健院（以下简称“我院”）妇产科经腹腔镜手术证实为子宫内膜异位症的70例患者,将患者分为在位内膜组和异位内膜组,每组各35例。同时选择同期我院行手术治疗的单纯子宫肌瘤患者35例为对照组。采用免疫组化、RT-PCR检测三组患者子宫内膜组织中FUT4和LeY的表达情况,并对其变化的意义进行评价和分析。结果 1与对照组比较,在位内膜组和异位内膜组患者的FUT4阳性表达率均明显提高,差异有统计学意义（P〈0.05）,异位内膜组FUT4的阳性表达率高于在位内膜组（P〈0.05）;2与对照组比较,在位内膜组和异位内膜组患者的LeY的阳性表达率均明显提高,差异有统计学意义（P〈0.05）,异位内膜组LeY的阳性表达率高于在位内膜组,差异有统计学意义（P〈0.05）;3与对照组比较,FUT4在异位内膜组和在位内膜组中的阳性表达率明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,异位内膜组FUT4的阳性表达率高于在位内膜组（P〈0.05）。结论 FUT4和LeY不仅在子宫内膜异位症的形成和发展过程中发挥着重要作用,其在胚胎黏附、植入过程中也起着重要作用,而FUT4是LeY合成的关键酶,当其表达量高于某一临界值时,会诱发子宫内膜异位症,影响胚胎的正常着床,从而进一步导致不孕。     

删除C末端结构域的基质细胞衍生因子-1重组内质网定位片段的真核表达载体构建及其活性作用

目的：构建人基质细胞衍生因子（SDF—1）C末端a螺旋结构域缺失及嵌合内质网定位片段的SDF-1α／54／KDEL重组真核表达载体,并考察其对Molt-4细胞的影响。方法：用PCR法扩增SDF-1α／54并将其亚克隆至真核表达质粒pcDNA3．1构建成真核重组表达载体pcDNA3．1／SDF1a／54／KDEI。。脂质体法转染Cos-7细胞后用Western blot检测SDF-1α／54／KDEL的表达。电穿孔法瞬时转染Molt-4细胞,并用流式细胞仪检测CXCR4含量以及其对细胞趋化性的影响。结果：经DNA测序验证目的片段插入方向和碱基组成顺序均准确无误,Western blot证实融合蛋白能在Cos-7细胞表达。SDF-1α／54／KDEL可以显著降低胞膜表面CXCR4表达量并抑制细胞的趋化作用。结论：SDF-1α／54／KDEI,可从胞内抑制Molt-4细胞CXCR4的表达,C末端α螺旋结构域的缺失并不影响其抑制作用,推测其是决定细胞趋化作用的主要结构域。     

S100A4上调表达对HBL-100和MCF-7细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨S100A4对人乳腺上皮细胞HBL-100和人乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移、侵袭和凋亡以及对这两种细胞中的Wnt/β-catenin及Wnt/JNK信号途径的影响.方法 用表达S100A4的重组腺病毒(AdS100A4)感染细胞,采用MTT、划痕愈合实验、Transwell侵袭实验和Hoechst染色分别检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡活性的变化;同时通过PCR和Western blot检测S100A4对两种细胞中Wnt/β-catenin及Wnt/JNK信号途径的影响.结果 (1)HBL-100和MCF-7细胞在第4天的增殖分别增加53.3％和59.1％ (P ＜0.05);24 h的划痕愈合率分别增加73.6％和64.8％(P＜0.05);S100A4对HBL-100的穿膜细胞数无明显影响(P＞0.05),但使MCF-7的穿膜细胞数增加1倍(P＜0.05);HBL-100和MCF-7细胞在48 h的凋亡率分别减少约30％和36％(P＜0.05);(2)感染AdS100A4后的HBL-100和MCF-7细胞中β-catenin较GFP组分别增加49％和55％(P＜0.05);尽管两种细胞中t-GSK3β无显著改变,但是其p-GSK3β却较GFP组分别增加73％和55％(P＜0.05),c-Myc的表达量分别增加38％和30％ (P ＜0.05);(3) S100A4对HBL-100中的t-JNK、p-JNK和c-Fos的mRNA以及MCF-7细胞的t-JNK的水平均无影响,但是,却致MCF-7中的p-JNK增加39％(P＜0.05),c-Fos的mRNA增加32.3％ (P ＜0.05).结论 S100A4可促进HBL-100和MCF-7细胞的增殖、迁移,并抑制这两种细胞的凋亡;增强MCF-7细胞的侵袭能力.S100A4可增强HBL-100和MCF-7细胞中的Wnt/β-catenin信号途径活性以及MCF-7细胞中的Wnt/JNK信号途径活性.     

TLR4和DcR3在肝细胞癌中的表达及其意义

目的 研究肝细胞癌(HCC)中Toll样受体4(TLR4)、诱骗受体3(DcR3)的表达及其意义.方法 应用免疫组化方法检测60例HCC组织中及对应癌旁组织中的TLR4和DcR3蛋白表达.结果 60例HCC肿瘤组织中7例TLR4表达阳性(11.7%),对应癌旁组织中43例TLR4表达阳性(71.7%),两者比较P＜0.01.60例肿瘤组织中46例DcR3表达阳性(76.7%),对应癌旁组织中11例DcR3表达阳性(18.3%),两者比较P＜0.01.TLR4与DcR3在HCC中的表达具有负相关性.结论 TLR4与DcR3在HCC发生发展过程中起重要作用.     

小檗碱通过Notch途径抑制人T淋巴细胞性白血病Molt-4细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨小檗碱对人T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4细胞体外增殖抑制、凋亡诱导及相关机制。方法 CCK-8法检测不同浓度的小檗碱对Molt-4细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测Molt-4细胞Notch1、Bcl-xl、Deltex1基因表达情况。结果 小檗碱诱导Molt-4细胞毒性及凋亡作用,呈剂量依赖性（P<0.05）;RT-PCR显示Molt-4细胞株有Notch1 mRNA的表达,且随着小檗碱剂量的增加,Notch1、Bcl-xl、Deltex1 mRNA的表达逐渐下降。结论 小檗碱可能通过Notch信号途径抑制Molt-4细胞增殖并诱导凋亡。     

P16INK4a蛋白在宫颈脱落细胞的表达及意义

目的探讨p16INK4A蛋白在宫颈脱落细胞即液基细胞学薄片(liquid-based cytology test,LCT)的表达及其用于宫颈鳞状细胞癌(squamous cell carcinomas,SCC)筛查的意义。方法225例宫颈病变患者,其中宫颈鳞状细胞癌(squamous cell carcinomas,SCC)56例,高度鳞状上皮内病变(high grade squamous intraepithelial lesions,HSIL)41例,低度鳞状上皮内病变(low grade squamous intraepithelial lesions,LSIL)76例,不典型鳞状细胞(atypical squa-mous cell lesions,ASC)32例,正常范围(within normal limits,WNL)20例。采用免疫组化方法,检测p16INK4A的表达。比较P16INK4a联合LCT及单纯LCT的病理诊断符和率。结果单纯LCT的病理诊断符合率为LSIL52.08%,HSIL77.14%,SCC 98.21%;P16INK4a联合LCT的病理诊断符合率为LSIL 68.75%(33/48),HSIL 91.43%(32/35),SCC100%(56/56);差异有显著性(P<0.05)。32例ASC的P16INK4a联合LCT阳性病理诊断符合率为71.43%,与单纯LCT相比,差异有显著性(P<0.05)。结论P16INK4a联合LCT可用于宫颈癌的筛查,尤其对于ASC的确诊,较单纯LCT有更高的病理诊断符合率,可以提高宫颈癌的诊断准确性。     

正交试验设计优选九节龙皂苷I聚乳酸微球的制备工艺

目的 筛选溶剂蒸发法制备九节龙皂苷I聚乳酸微球（ADS-I-PLA-MS）最佳工艺。方法 采用HPLC-ELSD测定方法,以包封率和载药量为评价指标,W/O/W溶剂蒸发法制备微球;通过单因素和正交试验设计,考察内水相九节龙皂苷I（ADS-I）甲醇溶液的质量浓度、ADS-I甲醇溶液与聚乳酸（PLA）二氯甲烷溶液体积比、PLA二氯甲烷溶液质量浓度和聚乙烯醇（PVA）体积等因素对ADS-I-PLA-MS包封率及载药量的影响。结果 溶剂蒸发法制备ADS-I-PLA-MS的最佳工艺条件为ADS-I甲醇溶液质量浓度为8 mg/mL、ADS-I甲醇溶液与PLA二氯甲烷溶液体积比为1∶13、PLA二氯甲烷溶液质量浓度为90 mg/mL、PVA体积为500 mL。结论 优选出的ADS-I-PLA-MS制备工艺合理可行。     

江苏两市MSM抗病毒治疗效果及其影响因素的研究

目的:分析江苏男男性行为(men who have sex with men,MSM)人群的艾滋病抗病毒治疗效果及其影响因素,首次建立江苏省MSM抗病毒治疗评价方法?方法:通过整群抽样的方式选取江苏两市接受免费高效抗逆转病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART)的MSM作为研究对象,进行生活史和用药情况的问卷调查;从江苏省艾滋病治疗信息库中获知其CD4值,采用Epidata 3.0和SAS 9.0分别进行资料录入与统计分析?结果:157例MSM总体CD4值提高,服药依从性低?经单因素及多因素分析,确诊后安全套使用水平低?吸烟量大?确诊至治疗时间间隔长是影响治疗效果的危险因素;首次CD4值较高及服药天数较长是保护因素?结论:江苏目前男男性行为人群抗病毒治疗效果显著,建议对符合治疗条件的MSM进行早期治疗,并提高患者服药依从性?     

吡格列酮对Ⅱ型糖尿病并发冠心病患者血清视黄醇结合蛋白4的影响

目的观察吡格列酮对Ⅱ型糖尿病并发冠心痛（T2DM）患者血清视黄醇结合蛋白4（RBP4）的影响,并探讨其可能机制。方法随机选取T2DM合并冠心病患者60例,正常对照组30例。分别检测血清RBP4、肿瘤坏死因子（TNF-α）、脂联素、空腹血糖（FPG）和胰岛素（Ins）、体重指数（BMI）、血压（BP）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）等指标,计算胰岛素敏感指数（ISI）和胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。再将60例T2DM并发冠心病患者分成吡格列酮治疗组28例和常规治疗组32例,吡格列酮治疗组用吡格列酮治疗8周,治疗前后均测定上述指标。结果①T2DM合并冠心病患者与对照组比较,血清RBP4水平增高（P〈0．01）;吡格列酮治疗组与常规治疗组比较,血清RBP4无差异（P〉0．05）。②应用吡格列酮治疗后,患者血清RBP4水平显著降低（P〈0．01）,TNpa、胰岛素水平下降（P〈0．05）,脂联素水平升高（P〈0．05）,IR明显改善。结论吡格列酮能降低T2DM并发心血管病患者血清RBP4水平,改善IR。