建立只标记加成碱基的^32P后标记法以用于检测致癌物—DNA加成物

本文报道建立~(32)P后标记方法(~(32)P-Postlabeling Method)以用于检测致癌物-DNA加成物。其基本原理:用核酸酶P1(Nu.P1)完全消化DNA,释出5′单磷酸脱氧核苷(pN),而加成的碱基(Xi),则释出5′磷酸二脱氧核苷(pXipN);经前列腺酸性磷酸酶(PAP)作用后,分别生成N和XipN,然后经T_4多聚核苷酸激酶(PNK)作用,将[γ-~(32)P]ATP的~(32)P转移XipN的5′末端上,生成标记*pXipN而N不被标记。经聚乙烯亚胺(PEI)纤维素薄层纯化、分离和放射自显影,则可确定已加成的碱基,若DNA量已知,则可进行定量分析。在人羊膜上皮细胞FL中,适量苯并(a)芘[B(a)P]处理24b后,可分离到4个加成物斑块,其总相对标记量(Relative Adduct Labeling,RAL)有剂量依赖性关系。     

特异性DNA倍增技术检测t-PA cDNA基因在表达细胞中的稳定性

利用特异性DNA倍增技术(polymerase chain Reaction,PCR)检测t-PA cDNA基因在表达细胞基因组中的稳定性,并对所得的PCR反应产物进行了限制性内切酶片段、分子杂交和核苷酸顺序分析等方面的研究,证实了t-PA cDNA基因已插入到表达细胞染色体中。这种方法快速、简便、灵敏度和特异性高,是检测基因工程表达细胞中cDNA基因稳定整合状况的好方法。     

碳酸锂抗诱变作用的研究

锂具有广泛的生物学作用，毒性低，现有资料认为无致突变性，临床上有效地用于精神病及血液病的治疗．本研究首次用人胚纤维母细胞(HEF)和活体小鼠，选择4种不同性质的诱变剂：短波紫外线（UV)，盐酸氮芥(NH2HCI)、亚砷酸钠(NaAsO2)、环磷酰胺(CP)建立诱变模型，诱导3种不同效应水平：非程序DNA合成(UDS)、染色体畸变(CA)、微核(MN)．     

肺癌患者胸腔积液标配p53基因测序

用聚合酶链式反应－测序方法对３７例非小细胞肺癌并胸腔积液患者胸水及外周血标本分别进行ｐ５３基因外显子七、八测序，并用２５例正常人外周血标本对照。结果表明：胸水     

合成间日疟DNA探针在疟疾监测中的应用研究

本文报道了应用合成间日疟ＤＮＡ片段经同位素末端标记作为探针，检测了２１份经镜检确诊的产是日疟病人血样，结果全产啊阳性，敏感性可测出０．００１３３％的原虫病血症，与培养的恶性疟及正常人血没有交叉反应，随后将该探针应用到疟疾监测中，在山东采集的３１０份四热病人血和２４５份流动人口血，应用于探针检测，未出现阳性结果，经镜检复核，结果相符，在安徽省滁州市采集３５２份病灶点人群血，有２８份出现了阳性，阳性率     

EBV－DNA酶全基因扩增克隆和鉴定

根据Ｂｅａｒ的ＥＢ病毒（ＥＢＶ）基因全序列，设计包括ＥＢＶ特异性ＤＮＡ酶全基因的一对引物，在引物上设计有一个ＳａｌⅠ切点，以便于克隆。选用蛋白酶Ｋ裂解的Ｒａｊｉ细胞ＤＮＡ为模板，扩增出一条１４６０ｂｐ的特异条带，纯比后经ＴａｑⅠ酶切形成１１９８ｂｐ和２６２ｂｐ的两个片段，证实该扩增片段即为ＥＢＶ特异性ＤＮＡ酶的全基因片段。以ＪＭ１０３为宿主菌，以高效表达质粒ＰＢＶ２２１为载体，按常规方法作酶切、连接、转化，最后在含氨中青霉素的培养基上挑取单菌落扩大培养，用快速法少量制备质粒ＤＮＡ。根据质粒电泳结果粗筛，再行ＢａｍＨⅠ酶切初步鉴定，确定质粒大小为５１１７（１４５１＋３６６６）ｂｐ的菌落为阳性克隆。先后用ＢａｍＨⅠ和ＴａｑⅠ消化阳性重组体，以形成１２００ｂｐ和３９１７ｂｐ两片段的确定为正向连接重组体。本实验首次将ＥＢＶ－ＤＮＡ酶全基因片段克隆到高效表达载体ｐＢＶ２２１上获得成功     

流式细胞术在临床血液病学中的应用

流式细胞术经过３０年的发展和不断完善，已由最初的研究应用技术逐渐进入临床应用范围，本文重点介绍ＦＣＭ在临床血液病学中的应用。     

Gestodene和ZK98734对小鼠子宫内膜上皮细胞DNA含量的影响

Ｇｅｓｔｏｄｅｎｅ和ＺＫ９８７３４对小鼠子宫内膜上皮细胞ＤＮＡ含量的影响刘玮漪，刘承权（上海市计划生育科学研究所，上海，２０００３２）Ｇｅｓｔｏｄｅｎｅ和ＺＫ９８７３４是两种很有希望的抗生育药物，即将进入临床试用，而它们的作用机理是很不相似的［１～３...     

地高辛标记人乳头状瘤病毒DNA探针的制备及其应用

本文将含ＨＰＶ重组质粒的大肠杆菌活化，扩增，提取，酶切回收，获得纯化的７．９ｋｂＨＰＶ ＤＮＡ片段，通过随机引物标记法制成Ｄｉｇ－ＨＰＶＤＮＡ探针。用此探针进行斑点杂交，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交检测女性生殖器活检组织标本中的ＨＰＶＤＮＡ，并检测其敏感生，特异性及重复性。１３３例活检组织标本中，经病理切诊断为尖锐湿疣的标本，其ＨＰＶ６ｂ和ＨＰＶ１１检出率为８０．６５％，非尖锐湿疣为６．９３％。试验证