Development of a rat model of D-galactosamine/lipopolysaccharide induced hepatorenal syndrome

AIM:To develop a practical and reproducible rat model of hepatorenal syndrome for further study of the pathophysiology of human hepatorenal syndrome. METHODS:Sprague-Dawley rats were intravenously injected with D-galactosamine and lipopolysaccharide(LPS) via the tail vein to induce fulminant hepatic failure to develop a model of hepatorenal syndrome. Liver and kidney function tests and plasma cytokine levels were measured after D-galactosamine/LPS administration,and hepatic and renal pathology was studied. Glomerular filtration rate was detected in conscious rats using micro-osmotic pump technology with fluorescein isothiocyanate-labelled inulin as a surrogate marker.RESULTS:Serum levels of biochemical indicators including liver and kidney function indexes and cytokines all significantly changed,especially at 12 h after D-galactosamine/LPS administration [alanine aminotransferase,3389.5 ± 499.5 IU/L; blood urea nitrogen,13.9 ± 1.3 mmol/L; Cr,78.1 ± 2.9 μmol/L; K+,6.1 ± 0.5 mmol/L; Na+,130.9 ± 1.9 mmol/L; Cl-,90.2 ± 1.9 mmol/L; tumor necrosis factor-α,1699.6 ± 599.1 pg/m L; endothelin-1,95.9 ± 25.9 pg/m L; P 0.05 compared with normal saline control group]. Hepatocyte necrosis was aggravated gradually,which was most significant at 12 h after treatment with D-galactosamine/LPS,and was characterized by massive hepatocyte necrosis,while the structures of glomeruli,proximal and distal tubules were normal. Glomerular filtration rate was significantly decreased to 30%-35% of the control group at 12 h after D-galactosamine/LPS administration [Glomerular filtration rate(GFR)1,0.79 ± 0.11 m L/min; GFR2,3.58 ± 0.49 m L/min·kg BW-1; GFR3,0.39 ± 0.99 m L/min·g KW-1]. The decreasing timing of GFR was consistent with that of the presence of hepatocyte necrosis and liver and kidney dysfunction.CONCLUSION:The joint use of D-galactosamine and LPS can induce liver and kidney dysfunction and decline of glomerular filtration rate in rats which is a successful rat model of hepatorenal syndrome.     

急性肝功能衰竭大鼠肝组织iNOS的表达及其意义

目的检测急性肝功能衰竭（ALF）大鼠肝组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达,探讨其在ALF中的意义。方法 SD大鼠随机分为3组：对照组给予生理盐水（NS）1ml腹腔注射;实验组予D-氨基半乳糖联合内毒素腹腔注射,复制ALF大鼠模型,分别在6、12h处死大鼠即为ALF6h组（D-6组）和ALF12h组（D-12组）,门静脉采血检测肝功能;留取肝组织标本,免疫组织化学方法检测iNOS,阳性产物灰度值应用图像分析软件半定量分析。结果对照组肝组织iNOS无表达;实验组6、12h肝脏病理呈进展性,肝组织iNOS沿中央静脉及残存小血管高表达,其平均灰度值在D-6组为81.02±5.86,D-12组为130.71±7.16,两组差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 ALF大鼠肝组织iNOS高表达;缺氧、微循环障碍可能是诱导iNOS表达的重要因素。     

Oridonin对急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡的影响及其机制研究*

目的 探讨冬凌草甲素（oridonin）对脂多糖/D-氨基半乳糖氨（LPS/D-Gal）联合诱导的急性肝衰竭（ALF） 小鼠肝细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 取25只小鼠,随机分成5组,每组5只。采用LPS/D-Gal腹腔注射建立小鼠ALF模型,设生理盐水对照组、LPS/D-Gal诱导模型组、LPS/D-Gal诱导和不同剂量oridonin干预组及oridonin处理组。采用末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测肝细胞凋亡,采用real-time PCR法检测肝组织TNF-α mRNA水平,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白的变化。结果 模型组小鼠肝细胞凋亡率为（36.4±1.8） %,显著高于两个oridonin干预组的[（19.4±3.3）%和（11.4±0.3）%,P<0.01];模型组小鼠肝组织TNF-α mRNA水平显著高于正常对照组（P<0.01）,而两个oridonin干预组肝组织TNF-α mRNA水平显著低于模型组（P<0.01）;模型组小鼠线粒体凋亡通路相关的促凋亡蛋白c-Jun氨基末端激酶（JNK）、bax、细胞色素C、cleaved caspase9/3活化水平显著高于两个oridonin干预组（P<0.01）,模型组小鼠抗凋亡蛋白bcl-xl水平显著低于两个oridonin干预组（P<0.01）,模型组小鼠死亡受体凋亡通路相关的促凋亡蛋白caspase8活化水平与两个oridonin干预组并无明显差异（P>0.01）。结论 Oridonin可抑制LPS/D-Gal诱导的ALF小鼠肝细胞凋亡,其机制可能与下调促凋亡细胞因子TNF-α水平和抑制JNK介导的线粒体凋亡信号通路有关。     

移植肝细胞治疗大鼠急性肝衰竭的研究

本文报道,用D-氨基半乳糖(D-GAIN)诱发大鼠急性肝衰竭。于大鼠D-GaIN中毒后24h,腹腔移植同种完整肝细胞,提高活存率为48％。移植破碎肝细胞无效,而且出现凝血系统紊乱现象。本实验通过肝脏病理现察及~3H-胸隙嘧啶核苷(~3H-TdR)肝内掺入量测定结果表明,早期移植完整肝细胞,能阻止肝损害发展,并能刺激和促进病肝细胞再生、复原等作用。     

前列地尔对D-氨基半乳糖致急性肝损伤大鼠肝匀浆IL-18水平升高的抑制作用

目的:观察前列地尔对D-氨基半乳糖致急性肝损伤大鼠肝匀浆IL-18水平升高的抑制作用。方法:32只SD大鼠一次性腹腔注射D-氨基半乳糖(D-Gal)1.4 g.kg-1,建立急性肝损伤模型。造模后大鼠随机分为前列地尔注射液治疗组(L ipo PGE130μg.kg-1)和阴性对照组(灭菌生理氯化钠溶液),均为一次性腹腔注射。检测两组造模前和造模后6,12,24 h血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和肝匀浆IL-18的水平。结果:D-氨基半乳糖造模后,两组大鼠血清ALT,AST和肝匀浆IL-18值呈动态升高(P<0.05)。在造模后6,12和24 h,前列地尔30μg.kg-1治疗组的血清ALT,AST和肝匀浆IL-18值均明显低于阴性对照组。结论:前列地尔对D-氨基半乳糖致急性肝损伤大鼠有肝脏保护作用,其机制可能与降低肝脏IL-18水平有关。     

解毒化瘀汤对D-氨基半乳糖胺所致小鼠肝损伤的保护作用

目的探讨解毒化瘀汤对D-氨基半乳糖胺(D-GalN)所致小鼠肝损伤的保护作用。方法NIH小鼠60只,随机分5组,分别为正常对照组,模型组,解毒化瘀汤高剂量组、低剂量组和齐墩果酸片治疗组;解毒化瘀汤高、低剂量组和齐墩果酸片组小鼠分别灌胃给药,1次/d,连续4 d,末次给药1 h后,除正常对照组外,其余各组小鼠均腹腔注射D-GalN 800 mg/Kg,24 h后采血,检测血清ALT活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,并观察肝组织病理学变化。结果解毒化瘀汤高剂量组血清ALT活性和MDA含量均明显低于模型组(P<0.01)、小鼠血清SOD的活性明显高于模型组(P<0.01);与齐墩果酸片组比较,解毒化瘀汤高剂量组ALT,SOD活性和MDA含量差异均无显著性意义(P>0.05);解毒化瘀汤高剂量组肝组织病理改变明显减轻,与模型组比较差异均有显著性意义(P<0.05)。结论解毒化瘀汤对D-GalN所致小鼠肝损伤具有较好的保护作用,其保肝机制与抗脂质过氧化损伤密切相关。     

益肝康冲剂抗大鼠D-半乳糖胺急性肝损伤的实验研究

实验设益肝康冲剂大、中、小剂量组、正常组、病理组、齐墩果酸（阳性对照）组。结果表明，益肝康冲剂。3个剂量组均能显著降低卜半乳糖胺急性肝损伤大鼠的丙氨酸转氨酶、天门冬氨酸转氨酶活性，疗效与齐墩果酸片无差异（P＞0．05）；肝组织病检表明中、小剂量组几乎与阳性组一致，说明益肝康冲剂具有良好地保护D-半乳糖胺致大鼠急性肝损伤的作用。     

Hepatoprotective Effects of Traditional Medicines. Isolation of the Active Constituent from Seeds of Celosia argentea

The hepatoprotective effects of water extracts from twelve crude drugs were investigated. Among them, the water extracts of Cassia obtusifolia, Celosia argentea, Cucurbita moschata and Curcuma aeruginosa showed a significant protective effect on carbon tetrachloride induced liver injury in rats and D -galactosamine (D -GalN)/lipopolysaccharide (LPS) induced liver injury in mice. The water extract of C. argentea was found to be the most effective. The hepatoprotective activity guided fractionation of this extract led to the isolation of an active constituent. This component was named as celosian, and was found to be an acidic heteroglycan (molecular weight: 1.9×10⁵) containing 4% of proteins.     

茵虎清肝方对D-氨基半乳糖脂多糖诱导的急性肝衰竭模型大鼠肝损伤的影响

目的观察茵虎清肝方对D-氨基半乳糖脂多糖诱导的急性肝衰竭模型大鼠肝损伤的影响并探讨其作用机制。方法 60只大鼠随机分为空白组、模型组、阳性组、实验组。采用腹腔注射D-氨基半乳糖脂多糖建立急性肝衰竭大鼠模型。阳性对照组给予安宫牛黄丸灌胃、实验组给予茵虎清肝方药液灌胃。检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(GOT)以及总胆红素(TBIL)水平,观察肝脏组织病理学变化,采用ELISA检测检测肝脏组织中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、I白细胞介素-6(L-6)表达以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平的变化,检测肝脏纤维化指标透明质酸酶(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(Ⅲ-PC)和Ⅳ型胶原及肝细胞凋亡情况。结果模型组肝细胞排列紊乱、细胞水肿变性坏死,肝索紊乱,炎性细胞浸润,纤维组织增生,肝窦区扩张并充血。给予药物干预后,阳性组和实验组大鼠的肝细胞形态结构稍紊乱,肝细胞肿胀减轻,坏死肝细胞减少,结节状也少,纤维组织减少。模型组大鼠的ALT、GOT、TBIL、肝脏指数以及肝纤维化指标明显升高(P <0.05)。给予药物干预后,阳性组和实验组的ALT、GOT、TBIL、肝脏指数、HA、LN、Ⅲ-PC以及Ⅳ-C水平明显低于模型组,两组间差异有统计学意义(P <0.05)。模型组大鼠的SOD和GSH含量明显降低,TNF-α、IL-1β、IL-6水平和MDA含量明显升高;药物干预后,阳性组和实验组大鼠SOD和GSH含量明显升高(P <0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6水平和MDA含量明显降低(P <0.05)。阳性组和实验组大鼠的SOD、GSH和MDA含量、TNF-α、IL-1β以及IL-6水平差异有统计学意义(P <0.05)。结论茵虎清肝方通过抑制炎症反应、减少氧化应激,阻断肝脏纤维化对D-氨基半乳糖脂多糖诱导的大鼠急性肝衰竭发挥保护作用。     

急性肝损伤大鼠肝脏血红素加氧酶-1/一氧化碳系统的变化及意义

目的:研究急性肝损伤时大鼠肝脏HO-1/CO系统的变化规律,探讨HO-1和内源性CO的作用机制及其病理生理意义.方法:采用D-氨基半乳糖(GalN)和脂多糖(LPS)联合腹腔注射制备大鼠急性肝损伤模型,动态测定各时间点(3,6,12,24,36 h)大鼠肝脏HO-1活性和蛋白表达情况,测定肝脏CO浓度以及血清ALT,AST水平和肝组织SOD活性、MDA含量变化.结果:Ga1N和LPS联合注射成功诱导了大鼠急性肝损伤,表现为染毒24 h时大鼠血清ALT,AST水平以及肝组织MDA浓度显著升高(10872.5±708.5 nkat/L,9246.8±814.7 nkat/L,5.06±1.21 μmol/g vs 1043.5±247.4 nkat/L,1278.6±273.8 nkat/L,2.03±0.59 μmol/g,均P＜0.01),SOD活性明显下降(813.7±168.3nkat/mg vs 1248.2±84.9 nkat/mg,P＜0.01),HE染色显示肝细胞出现严重损伤.染毒3-24 h大鼠肝脏HO-1活性明显增强,6-24 h呈现一定的时间依赖方式(4.02±0.74,5.97±1.51,6.13±1.18 μmol/g vs 2.86±0.41 μmol/g);Westernblot测定结果亦显示,HO-1蛋白表达显著增强,24 h时明显高于正常对照组(1.87±0.39 vs0.37±0.09,P＜0.01).正常大鼠肝脏的CO浓度极低,染毒后以时间依赖方式开始升高,并显著高于正常对照组(0.373±0.112,0.474±0.152,0.513±0.193 μmol/g vs 0.172±0.041 μmol/g,P＜0.01),这与HO-1表达情况相一致.结论:大鼠急性肝损伤时出现HO-1活性增加和蛋白表达持续上调以及CO浓度迅速增高,提示HO-1/CO系统参与急性肝损伤的病理生理过程,其表达增加可能对机体有重要调节作用.