柯萨奇B3病毒川金丝猴分离毒株实验性感染BALB/c小鼠的病理形态学

目的：研究来源于川金丝猴的柯萨奇B3病毒株CVB/SGM-05对BALB/c小鼠的致病变特点。方法：4~6周龄健康雄性BALB/c小鼠30只,通过腹腔注射途径将滴度为10⁵个TCID₅₀/0.1 mL的CVB/SGM-05接种小鼠（0.2 mL/只）,观察感染小鼠的临床症状及大体病变特点;分别摘取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺、胃、肠、脑和脂肪组织,经10%的中性甲醛溶液固定后制作常规的病理石蜡切片,光镜下观察其病理变化特点。结果：小鼠于接毒后60 h开始死亡,死亡率达80%;发病小鼠均出现典型的结膜炎。对死亡小鼠剖检可见,肝脏明显肿大,呈淡黄色样改变,表面可见针尖大灰白小点;部分小鼠的脾脏肿大、边缘与坏死的脂肪发生粘连;最明显的病变为腹腔内脂肪的大量坏死。病理切片观察可见心、肝、肾组织均有不同程度的细胞变性,心肌纤维间有炎性细胞浸润,肝细胞坏死严重;胃、肠黏膜上皮坏死、脱落;脑组织可见轻度淤血;脂肪坏死尤其明显。结论：与人源的标准毒株Nancy比较,猴源的CVB/SGM-05感染BALB/c小鼠可引起多脏器损伤,提示不同来源的CVB3毒株可能对感染动物的致病性有一定差异。     

苦瓜蛋白对柯萨奇3型病毒感染大鼠心肌细胞的保护作用

目的 在病毒性心肌炎心肌细胞模型上观察苦瓜蛋白对柯萨奇3型病毒(CVB3)感染SD大鼠心肌细胞的保护作用及其机制. 方法 体外原代培养SD大鼠心肌细胞,以CVB3感染培养大鼠心肌细胞,复制病毒性心肌炎心肌细胞模型,分别测定心肌细胞搏动百分比(PBC)、半数有效率(ED)、细胞病变(CPE)、心肌酶谱、半感染致死量(TCID50),分析其对心肌细胞的保护作用. 结果 苦瓜蛋白的ED值为0.045 mg/mL,80、40、20、10 μg/mL苦瓜蛋白可显著提高心肌细胞PBC、降低病毒的复制,80、40 μg/mL苦瓜蛋白可减少CPE,降低心肌酶水平. 结论 苦瓜蛋白对感染CVB3的心肌细胞有较强的保护作用.     

感染柯萨奇病毒B3诱导人心肌纤维细胞因子的产生

目的：CVB3感染可导致严重的心脏病，其机制尚不清楚，细胞因子可能有重要作用，但确切来源细胞尚不清楚，心肌纤维细胞是主要间质分子，感染CVB3后检测其细胞因子的产生。方法：采用ELISA方法检测了感染CVB3心肌纤维细胞培养上清液IL－6、IL－8、IL－1α、IL－1β和TNF－α的产生，结果：发现感染CVB3 24小时后IL－6和IL－8即明显升高（P＜0．01），96小时后IL－1α有所升高（P＜0．05），IL－1β和TNF－α无明显变化，结论：IL－6、IL－8、IL－1α在CVB3心肌炎中可能有一定作用。     

原位杂交法检测柯萨奇B3病毒感染鼠各脏器内病毒核酸的动态分布

用柯萨奇Ｂ３病毒（ＣｏｘｓａｃｋｉｅｖｖｉｒｕｓＢ３，ＣＶＢ３）ｃＤＮＡ探针原位杂交法检测感染后１２ｄ内小鼠各脏器内病毒核酸的分布。于不同时期分别在心肌细胞、骨骼肌细胞、胰腺细胞、胸腺细胞、脾脏红髓细胞、直肠上皮细胞和肾小管上皮细胞中检测到病毒核酸。为ＣＶＢ３对多脏器的侵犯提供了直接的依据。     

茱萸颗粒体外抗CVB3病毒的实验研究

茱萸颗粒是我院心内科李七一教授经临床多年摸索,拟定治疗病毒性心肌炎的有效良方.目的:观察茱萸颗粒对CVB3病毒的作用.方法:采用体外抗CVB3病毒和大鼠心肌细胞感染CVB3实验.结果:茱萸颗粒20mg/ml对CVB3感染Vero细胞具有明显保护作用,同时可抑制CVB3毒力.茱萸颗粒0.5mg/ml至4mg/ml可减轻CVB3感染心肌细胞CPE,心肌酶谱显示:茱萸颗粒可明显降低感染CVB3心肌细胞中LDH,LDH1,AST和HBDH释放,减少心肌细胞损坏.结论:茱萸颗粒具有抗CVB3感染和保护心肌细胞的作用.     

孔石莼抗病毒蛋白多糖的提取分离及抗柯萨奇病毒B3活性

目的 从绿藻孔石莼中分离具有抗病毒活性蛋白多糖提取物. 方法 新鲜孔石莼经pH 7.0的磷酸盐缓冲液提取和硫酸铵沉淀得到粗提取物,大孔树脂层析分离得到蛋白多糖.经紫外扫描、高温高压处理(121℃,15min)和糖苷酶水解测定提取物的性质.MTT法检测蛋白多糖对Hela细胞的毒性,细胞病变法(CPE)检测蛋白对柯萨奇病毒B3(CVB3)引起的细胞病变抑制作用.通过样品对细胞的保护作用、对CVB3增殖的影响、对CVB3感染细胞的综合作用,初步研究了样品抗病毒作用的机理.结果 从孔石莼中提取了蛋白多糖,得率为0.5%.毒性试验结果表明,孔石莼蛋白多糖对HeLa细胞的半数中毒浓度TC50大于8mg·ml-1.孔石莼蛋白多糖具有显著的抗CVB3活性,通过试验测得孔石莼蛋白多糖对CVB3主要是预防作用和直接杀灭作用,其IC50为3.7μg·ml-1.结论 从孔石莼中分离到具有抗病毒活性的蛋白多糖,具有很好的抗CVB3活性.     

卷柏属药用植物提取物体外抗柯萨奇病毒作用研究

目的:比较研究卷柏属7种药用植物的13种提取物在体外抗柯萨奇病毒CVB3的作用。方法:采用13种提取物培养CVB3感染的Hep-2细胞,观察比较细胞病变效应(CPE),72h后MTT法测定细胞活性。结果:在Hep-2细胞体系中,卷柏属7种药用植物的乙酸乙酯和95%乙醇提取物部位具有一定的抑制CVB3对细胞的致病变作用,使细胞存活率提高。结论:卷柏属药用植物可以作为新的抗CVB3的资源植物。     

Internalization and trafficking mechanisms of coxsackievirus B3 in HeLa cells

Coxsackievirus B3 (CVB3) is nonenveloped and has a single-stranded positive-sense RNA genome. CVB3 induces myocarditis and ultimately dilated cardiomyopathy. Although there are mounting evidences of an interaction between CVB3 particles and the cellular receptors, coxsackievirus and adenovirus receptor (CAR) and decay-accelerating factor (DAF), very little is known about the mechanisms of internalization and trafficking. In the present study, we used the CVB3 H3 strain, which is CAR-dependent but DAF-independent Woodruff variant and found that during entry, CVB3 particles were colocalized in clathrin, after interacting primarily with CAR, which was not recycled to the plasma membrane. We also found that CVB3 internalization was dependent on the function of dynamin, a large GTPase that has an essential role in endocytosis. Heat-shock cognate protein, Hsc70, which acts as a chaperone in the release of coat proteins from clathrin-coated vesicles (CCV), played a role in CVB3 trafficking processes. Moreover, endosomal acidification was crucial for CVB3 endocytosis. Finally, CVB3 was colocalized in early endosome autoantigen 1 (EEA1) molecules, which are involved in endosome-endosome tethering and fusion. In conclusion, these data together indicate that CVB3 uses clathrin-mediated endocytosis and is transcytosed to early endosomes.     

Vγ1+γδT,early cardiac infiltrated innate population dominantly producing IL-4, protect mice against CVB3 myocarditis by modulating IFNγ+ T response

Viral myocarditis (VMC) is an inflammation of the myocardium closely associated with Coxsackievirus B3 (CVB3) infection. Vγ1⁺γδT cells, one of early cardiac infiltrated innate population, were reported to protect CVB3 myocarditis while the precise mechanism not fully addressed. To explore cytokine profiles and kinetics of Vγ1⁺γδT and mechanism of protection against VMC, flow cytometry was conducted on cardiac Vγ1 cells in C57BL/6 mice following CVB3 infection. The level of cardiac inflammation, transthoracic echocardiography and viral replication were evaluated after monoclonal antibody depletion of Vγ1γδT. We found that Vγ1⁺γδT cells infiltration peaked in the heart at day3 post CVB3 infection and constituted a minor source of IFN-γ but major producers for early IL-4. Vγ1γδT cells were activated earlier holding a higher IL-4-producing efficiency than CD4⁺Th cells in the heart. Depletion of Vγ1⁺γδT resulted in a significantly exacerbated cardiac infiltration, increased T, macrophage and neutrophil population in heart homogenates and worse cardiomyopathy; which was accompanied by a significant expansion of peripheral IFNγ⁺CD4+ and CD8 + T cells. Neutralization of IL-4 in mice resulted in an exacerbated acute myocarditis confirming the IL-4-mediated protective mechanism of Vγ1. Our findings identify a unique property of Vγ1⁺γδT cells as one dominant early producers of IL-4 upon CVB3 acute infection which is a key mediator to protect mice against acute myocarditis by modulating IFNγ-secreting T response.     

黄芪甲甙对小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎的抗氧化作用

目的观察黄芪甲甙对小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎的抗氧化作用。方法Balb/c小鼠50只随机分5组(每组10只),空白对照组腹腔无菌注射不含病毒的Eagle’s培养基0.1 mL,在腹腔注射病毒培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7d;病毒性心肌炎对照组小鼠每只腹腔注射0.1 mL内含1×102TCID50柯萨奇B3病毒的Eagle’s培养基,在腹腔注射含病毒的Eagle’s培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7 d;黄芪甲甙低、中、高剂量干预组在腹腔注射病毒30 min后,用黄芪甲甙剂量分别为0.07、0.2、0.6 g/(kg.d)0.1 mL灌胃,共7 d。观察小鼠生存数;心肌病变积分;心肌谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活力及逆转录聚合酶链反应检测铜锌超氧化物歧化酶-mRNA水平表达。结果(1)与空白对照组比较,病毒性心肌炎对照组小鼠的生存数明显下降,心肌病变积分明显升高(3.23±0.83,P<0.01);与病毒性心肌炎对照组比较,黄芪甲甙高剂量干预组可明显提高小鼠的生存数(P<0.01),心肌病变积分明显下降(1.86±0.59比3.23±0.83,P<0.01);(2)与病毒性心肌炎对照组比较,黄芪甲甙高剂量干预组心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活力呈增高趋势,心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶(39.73±8.02比9.99±2.71,P<0.05)、过氧化氢酶(6.35±2.33比1.36±0.87,P<0.05)、超氧化物歧化酶(65.71±4.93比40.15±6.03,P<0.01)活力明显增强,铜—锌超氧化物歧化酶-mRNA水平表达明显增高(0.43±0.11比0.32±0.01,P<0.01)。但黄芪甲甙低、中剂量干预组,虽然也在一定程度使心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活力及逆转录聚合酶链反应检测铜—锌超氧化物歧化酶-mRNA表达水平增加,有一定的量效关系,但与病毒性心肌炎对照组比较无统计学意义(P>0.05)。结论黄芪甲甙通过增加心肌抗氧化酶活力,对小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎具有明显的保护作用。