柠檬提取物对新城疫及柯萨奇病毒作用的实验研究

目的:测试并比较柠檬提取物0#及3#在不同的实验方法下对新城疫病毒和柯萨奇病毒B3的杀灭作用。方法:直接杀灭作用:将新城疫病毒和柯萨奇病毒B3分别与柠檬提取物0#和3#体外作用1h,然后加入到培养好的Vero细胞中,培养72h。预防作用:将不同浓度的柠檬提取物0#和3#分别加入培养好的Vero细胞中作用24h,然后分别加入新城疫病毒和柯萨奇病毒B3与柠檬提取物0#和3#的混合液,培养72h。治疗作用:将新城疫病毒和柯萨奇病毒B3分别加入培养好的Vero中,作用1h,然后分别加入0#及3#药品,培养72h。3种方法与未加柠檬提取物的病毒液对细胞的作用相比较,通过CPE法观察药品对病毒的作用。结果:在柠檬提取物0#对新城疫病毒的直接杀灭作用中,实验组较对照组有显著性差异(P<0.05);在柠檬提取物3#对柯萨奇病毒B3的预防作用中,实验组较对照组有显著性差异(P<0.05);在柠檬提取物0#及3#对新城疫病毒和柯萨奇病毒B3的治疗作用中,实验组较对照组无显著性差异(P>0.05)。结论:柠檬提取物0#对新城疫病毒具有杀灭作用;柠檬提取物3#对柯萨奇病毒具有预防作用;0#及3#对新城疫病毒和柯萨奇病毒B3均无治疗作用。     

川崎病患儿血清中多种病毒抗体IgM的检测

目的 :了解川崎病与病毒感染的关系。方法 :采用ELISA法检测川崎病患儿急性期血清多种病毒抗体IgM。结果 :96例川崎病患儿血清抗CVB病毒抗体阳性率为 4 2 86 % ,关联强度OR =6 .75 ,95 %可信区间 (CI)为 3.14～ 14 5 2 ,明显高于抗其他病毒IgM抗体阳性率 ;川崎病患儿抗CVBIgM抗体阳性率也明显高于同期住院的非感染组抗CVBIgM抗体阳性率 10 % (X2=7.0 6 ,P <0 0 0 0 1)。结论 :川崎病与CVB病毒感染有明显的关联性     

不同免疫途径对chitosan-DNA疫苗诱导CVB3特异性免疫应答的影响及其意义

目的：确定新型chitosan-DNA疫苗的有效免疫途径。方法：将chitosan-pcDN3-VPI疫分别苗以肌注、口服、滴鼻3种免疫方式免疫Balb/c小鼠；以ELISA检测免疫小鼠血清中IgG、IgM、、IgA，评估其特异性体液免疫应答；以特异性淋巴细胞增殖反应和CTL活性反映其诱导细胞免疫；以5LD50致死剂量CVB3攻击免疫小鼠，评价不同免疫途径的免疫保护效果。结果：①在诱导CVB3特异性体液免疫方面：chitosan-pcDNA3-VPI疫苗肌注组诱生了高水平IgM和IgG，但未能诱生黏膜IgA；口服免疫组仅诱生低水平的黏膜IgA，未能诱生特异性IgM和IgG；滴鼻组可诱生低水平的I埘及高水平的IgG和黏膜IgA。②在诱导CVB3特异性细胞免疫方面：仅滴鼻组诱导了较高水平的淋巴细胞特异性增殖反应和CTL活性；口服组的淋巴细胞增殖活性和CTL活性稍弱；肌注组几乎不能诱导特异性细胞免疫应答。③免疫保护作用：滴鼻组可保护33．3％小鼠长期存活；口服组仅达到16．7％的保护率；肌注组无保护作用。结论：滴鼻免疫途径可能是chitosan-pcDNA3-VPI基因疫苗最合适的诱导全面免疫应答的免疫途径。     

A shine-dalgarno-like sequence mediates in vitro ribosomal internal entry and subsequent scanning for translation initiation of coxsackievirus B3 RNA

Translation initiation of coxsackievirus B3 (CVB3) RNA is directed by an internal ribosome entry site (IRES) within the 5' untranslated region. However, the details of ribosome-template recognition and subsequent translation initiation are still poorly understood. In this study, we have provided evidence to support the hypothesis that 40S ribosomal subunits bind to CVB3 RNA via basepairing with 18S rRNA in a manner analogous to that of the Shine-Dalgarno (S-D) sequence in prokaryotic systems. We also identified a new site within both the 18S rRNA and the polpyrimidine-tract sequence of the IRES that allows them to form stronger sequence complementation. All these data were obtained from in vitro translation experiments using mutant RNAs containing either an antisense IRES core sequence at the original position or site-directed mutations or deletions in the polypyrimidine tract of the IRES. The mutations significantly reduced translation efficiency but did not abolish protein synthesis, suggesting that the S-D-like sequence is essential, but not sufficient for ribosome binding. To determine how ribosomes reach the initiation codon after internal entry, we created additional mutants: when the authentic initiation codon at nucleotide (nt) 742 was mutated, a 180-nt downstream in-frame AUG codon at nt 922 is able to produce a truncated smaller protein. When this mutation was introduced into the full-length cDNA of CVB3, the derived viruses were still infectious. However, their infectivity was much weaker than that of the wild-type CVB3. In addition, when a stable stem-loop was inserted upstream of the initiation codon in the bicistronic RNA, translation was strongly inhibited. These data suggest that ribosomes reach the initiation codon from the IRES likely by scanning along the viral RNA.     

复合HA-2氨基多肽可增强chitosan-DNA疫苗的免疫保护效果

目的 :以具有促黏膜黏附吸收功能的脱乙酰多糖chitosan包裹质粒DNApcDNA3-VP1构建的新型chitosan-DNA疫苗 ,已证实可诱生CVB3特异性黏膜IgA和抗CVB3保护力 ,在此基础上 ,引入具有内体破坏功能的流感病毒HA 2氨基多肽(融内体多肽 ) ,构建chitosan-DNA HApLys16疫苗 ,以期增强chitosan-DNA疫苗的免疫保护效果。方法 :将融内体多肽与多聚赖氨酸顺序合成为“载体多肽”HA pLys16 ,将其与DNA、chitosan依次复合形成chitosan DNA HApLys16疫苗。以 5 0 μgDNA剂量的chitosan-DNA疫苗滴鼻免疫BALB c小鼠 4次 ,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答 ;隔 4周以致死性 5×LD50 CVB3攻击小鼠 ,观察攻击后存活情况。以免疫组化法检测了小鼠心肌内CVB3载量 ;并检测了黏膜IgA中和效价的改变。结果 :chitosan DNA-HApLys16疫苗滴鼻免疫不仅诱生了高水平的IgG ,而且诱生了高水平的黏膜IgA抗体。其诱生的IgG水平以及特异性CTL杀伤活性与chitosan DNA疫苗无统计差别 ,而其IgA水平显著高于chitosan DNA疫苗。CVB3攻击后 ,chitosan DNA HAp Lys16可保护 5 0 .0 %小鼠长期存活 ,高于chitosan DNA组 4 2. 9%的免疫保护率。病理学研究显示 :chitosan-DNA HApLys16免疫小鼠心肌炎症状况好于chitosan-DNA免疫小鼠。免疫组化结果显示     

Chitosan-DNA基因免疫诱导粘膜特异性免疫应答及其抗CVB3感染作用

目的：构建新型粘膜基因疫苗，诱生CVB3VP1特异性粘膜免疫应答，探讨粘膜免疫抗CVB3感染的作用，为病毒性心肌炎的特异性防治奠定基础。方法：抽提CVB3 RNA，以RT-PCR扩增得VP1基因，插入真核表达载体pcDNA3中，构建质粒pcDNA3-VP1，以Chitosan多糖包裹形成Chitosan-DNA基因疫苗。将该质粒转染Hela细胞，观察其体外表达情况。以50辉DNA剂量的Chitosan-DNA疫苗滴鼻免疫BALB／C小鼠3次，检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答；隔4周以5LD50活CVB3致死攻击小鼠，观察攻击后存活情况。结果：制备了直径为80-100nm的Chitosan-DNA复合物颗粒，体外转染证实Chitosan-DNA复合物中VPl的表达高于pcDNA3-VP1质粒-Lipofectamine的表达水平。该疫苗滴鼻3次免疫后，不仅诱生了高水平的IgG，而且诱生了高水平的粘膜IgA抗体，第6周抗体P/N值分别达3．5和3．2。特异性细胞免疫应答研究发现，该疫苗诱生了较强的VP1特异性CTL杀伤作用，并显著高于pcDNA3-VP1和pcDNA3组。CVB3攻击后，可保护33．3％小鼠长期存活，而pcDNA3和pcDNA3-VP1质粒滴鼻免疫对照组的平均存活天数分别为8．5和10．8天。病理学研究显示：Chitosan-DNA免疫小鼠心肌组织基本正常，而对照小鼠死亡前心肌显示大量的灶性坏死和炎性浸润。结论：Chitosan-DNA基因疫苗滴鼻免疫可诱生CVB3特异性粘膜IgA应答及CTL反应，具有一定的抗CVB感染的免疫保护力。     

清心抗炎饮治疗柯萨奇B病毒性心肌炎的疗效观察及护理

目的 观察清心抗炎饮治疗柯萨奇B病毒性心肌炎（简称CVB心肌炎）的效果及探讨相应的护理措施。方法 将111例患者随机分为治疗组和对照组,治疗组57例子清心抗炎饮口服并实施辨证护理,对照组54例予西药病毒唑口服及心血管病常规护理。观察1个疗程30d,比较分忻两组的疗效。结果 治疗组在临床症状及病毒学检查方面的改善明显优于对照组。结论 采用清心抗炎饮并实施辨证护理对CVB心肌炎具有良好的疗效。