基于网络药理学和分子对接探讨补肾活血方治疗尿酸性肾病的作用机制＊

目的 基于网络药理学和分子对接技术探讨补肾活血方治疗尿酸性肾病（uric acid nephropathy， UAN）的分子作用机制。方法 采用中药系统药理学数据库TCMSP筛选出补肾活血方的有效活性成分。通过PubChem、DrugBank、SymMap和SwissTargetPrediction数据库筛选出中药各成分作用靶点。借助GeneCards、DisGenet、malaCards和OMIN数据库获取尿酸性肾病的靶点基因。David绘图工具筛选出中药与疾病的交集靶点，利用Cytoscape3.9.0软件构建“中药-活性成分-疾病-靶点”网络关系图，并通过CytoNCA插件构建蛋白质相互作用网络（PPI），筛选得到核心靶点蛋白。采用AutoDock Vina 1.1.2软件将补肾活血方关键有效成分和核心靶点进行分子对接。最后运用乙胺丁醇和腺嘌呤诱导的尿酸性肾病模型对网络药理学预测的结果进行基础实验验证。结果 本研究共筛选得到补肾活血方治疗UAN的作用靶点234个，其中核心靶点19个，对应5种中药的113种有效成分。GO富集分析共得到925条基因功能信息，KEGG富集分析发现112条信号通路，涉及Toll样受体、NF-κB、PI3K-Akt、p53、TNF等信号通路治疗尿酸性肾病。分子对接结果显示，双脱甲氧基姜黄素、异黄酮等关键活性成分与ALB、MMP9、TLR4等关键核心靶点有较好的结合活性。动物实验结果显示，与模型组相比，补肾活血方组、非布司他组大鼠肾组织TLR4和NF-κB蛋白表达量和血清MMP-9水平明显降低（P<0.05）；血清ALB水平明升高（P<0.05）。结论 本研究提示，补肾活血方中关键活性成分可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路降低TLR4、NF-κB和MMP-9水平，减轻炎症反应，进而减少ALB漏出，发挥保护肾脏治疗尿酸性肾病的作用。     

温阳散瘀方联合贝前列素钠片治疗下肢动脉粥样硬化性闭塞症的临床研究

目的观察温阳散瘀方辅助贝前列素钠片治疗下肢动脉粥样硬化性闭塞症的效果。方法采用简单随机抽样方法从2016年3月至2018年4月于该院接受诊治的下肢动脉粥样硬化性闭塞症患者中选取86例纳入研究,依据随机数字表法进行分组,对照组43例患者接受贝前列素钠片治疗,研究组43例患者接受温阳散瘀方联合贝前列素钠片治疗,治疗6周后评价两组临床疗效,测定两组患者血脂水平、踝肱指数(ABI)、6min步行试验(6-MWT)、无痛行走距离、超敏C反应蛋白(hs-CRP)以及血液流变学相关指标。结果研究组临床总有效率(88.37%)明显高于对照组(69.77%),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后两组患者总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均明显下降(P<0.05),且组间比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗后研究组ABI、6-MWT、无痛行走距离和hs-CRP水平均明显优于对照组(P<0.05);治疗后两组血液流变学相关指标均明显下降(P<0.05),且组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论温阳散瘀方辅助贝前列素钠片应用于下肢动脉粥样硬化性闭塞症的临床治疗,在平衡血脂水平、改善血液流变学相关指标方面效果明显,可有效改善ABI、6-MWT、无痛行走距离和hs-CRP等指标,增进疗效。     

补肾活血法在治疗月经不调中临床应用

目的：观察补肾活血法在治疗月经不调中的疗效作用。方法：按随机原则将90名月经不调患者平均分为两组，中医组采用补肾活血法治疗，西医组采用口服乙烯雌酚方法治疗。结果：与西医组相比，中医组的整体治疗效果明显提高，其治愈率高于西医组，治疗后典型性双相率也明显增高，且两组的差异具有统计学意义，P〈0.05。结论：补肾活血法治疗女性月经不调疗效显著。     

胆闭通络方对幼鼠阻塞性黄疸FPA及D-二聚体的影响

目的探讨胆闭通络方对幼鼠阻塞性黄疸FPA及D-二聚体(D-D)影响。方法将SD大鼠幼鼠分为3组,第1组为正常对照组,予生理盐水灌胃,第2组为模型组,采用2%α-萘异硫氰酸酯(ANIT)及生理盐水灌胃,第3组为治疗组,在造模同时予胆闭通络方灌胃,每日1次,连续7d。以分光光度仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酶氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、血清总胆红素(TB)含量;双抗体夹心法测定大鼠血清血纤肽/纤维蛋白肽A(FPA)及D-D水平。结果与模型组比较,治疗组血清TB、ALT、AST、AKP、r-GT降低(P0.05);与对照组比较,模型组及治疗组血清FPA及D-D显著增高(P0.05);与模型组比较,治疗组血清FPA及D-D降低(P0.05)。结论胆闭通络方能抑制FPA及D-D产生,减少肝内微血栓的形成,缓解肝脏瘀血。     

益智膏治疗小儿智力低下34例临床观察

[目的]观察应用益智膏配合针刺改善肾精不足型智力低下患儿智能水平的临床疗效。[方法]将68例入组患儿按照随机数字表法分成治疗组和对照组,治疗组34例给予服用益智膏、针刺、康复训练,对照组34例给予针刺、康复训练;采用中国韦氏幼儿、儿童智力量表进行评分,应用尼莫地平法计算智商(IQ)分值提高率。[结果]益智膏配合针刺治疗肾精不足型智力低下有效,临床总体疗效优于对照组,两组比较具有统计学意义(P0.05)。[结论]益智膏配合针刺治疗肾精不足型智力低下临床疗效确切。     

滋阴补肾汤方在IVF-ET中对卵巢储备功能的干预

目的 通过滋阴补肾法观察滋阴补肾汤方对体外受精—胚胎移植(IVF-ET)过程中肾阴亏虚型卵巢储备功能下降的干预作用.方法 对肾阴亏虚型卵巢储备功能下降而暂缓体外受精—胚胎移植(IVF-ET)治疗的患者随机分为中药滋阴补肾汤方组(30例)和西药屈螺酮炔雌醇片组(30例),治疗3个月经周期,治疗前后月经周期第2～5天分别测量血清基础卵泡刺激素(FSH)、基础黄体生成素(LH)、基础雌二醇(E2)、苗勒管素(AMH),并于治疗前后月经第5天阴道B超监测卵巢窦卵泡(AFC)变化情况.结果 ①中药组治疗后血FSH水平及FSH/LH比值较治疗前降低(P＜0.01),AMH水平较治疗前升高,而且在降低FSH/LH水平及升高AMH方面优于西药组;②窦卵泡数的改善与年龄阶段有相关性,年龄越大,治疗效果越不显著,对于低、中年龄段,中药对窦卵泡数治疗效果显著.结论 滋阴补肾汤可以通过调节血清激素水平改善肾阴亏虚型卵巢储备功能下降患者卵巢储备功能,提高IVF-ET的成功率.     

补肾活血汤提取物促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖的研究

【目的】筛选出补肾活血汤促进骨髓间充质干细胞增殖的有效部位。【方法】补肾活血汤（全方组）及其拆方（补肾组、活血组）分别用溶剂极性递增法提取得石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇以及水4个部位。骨髓间充质干细胞采用全骨髓贴壁法培养,传至第3代采用表面抗原鉴定,成骨、成脂分化鉴定。将上述补肾活血汤提取物按浓度梯度处理细胞24 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,筛选出最有效部位及其最佳浓度。用补肾活血汤最有效部位处理细胞, MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期。【结果】与空白对照组比较,补肾活血汤及其拆方均具有不同程度维持细胞活性的作用。其中以补肾组乙酸乙酯部位、全方组乙酸乙酯部位及活血组乙酸乙酯部位最为有效,且呈一定的药物浓度依赖性,100μg/mL为最佳药物浓度,并未出现细胞毒性反应。细胞生长曲线显示：补肾活血汤有效部位处理细胞后,细胞增殖速度与数量较对照组更为明显,以补肾组最有效,全方组次之。流式细胞仪检测细胞周期结果显示：补肾活血汤有效部位处理细胞后,处于增殖期细胞数量明显多于空白对照组,以补肾组最有效,全方组次之。【结论】补肾活血汤促进骨髓间充质干细胞增殖的有效部位在补肾组乙酸乙酯部位,可使骨髓间充质干细胞处于增殖期细胞数目增多。     

原络配穴与补肾益寿胶囊对脑梗死患者血液流变学及超敏C反应蛋白的影响

目的：观察原络配穴与补肾益寿胶囊对脑梗死患者肢体功能、血液流变学及血超敏C反应蛋白（hs‐CRP）的影响。方法将脑梗死肢体活动障碍患者120例按随机数字表法分为3组,在控制原发病等常规治疗与护理基础上,针刺组以原络配穴为配穴原则,予针刺治疗;药物组予口服补肾益寿胶囊;联合组予原络配穴联合口服补肾益寿胶囊,观察3组美国国立卫生院神经功能缺损（NIHSS）评分、血液流变学改变及血hs‐CRP在治疗前、后的变化。结果3组治疗后NIHSS评分、血液流变学指标及血hs‐CRP水平均明显改善（P＜0．01）;联合组各项指标改善程度优于针刺组与药物组（P＜0．01）。结论原络配穴与补肾益寿胶囊联合用于脑梗死患者可明显改善患者肢体功能,其机制可能与通过改善血液流变性及降低血hs‐CRP水平有关。     

益心解毒方对Nox2和Nox4亚基过表达的心肌细胞NADPH氧化酶活性的影响

目的通过观察益心解毒方含药血清对Nox2、Nox4亚基过表达的H9c2心肌细胞NADPH氧化酶活性的影响,揭示其作用环节是否与干预相应亚型的NADPH氧化酶调控环节有关。方法采用PCR方法扩增Nox2、Nox4基因全长序列,经双酶切、连接载体和转化后提取重组质粒,经酶切鉴定的阳性质粒进行DNA测序,测序正确后按照lipofectamine 2000试剂的说明书瞬时转染H9c2细胞,转染后的心肌细胞分组给予不同的药物干预,24 h后检测NADPH氧化酶活性。结果 1含有Nox2/Nox4亚基的重组质粒载体通过测序鉴定,结果与Gen Bank报道的完全一致。2通过荧光显微镜下观察转染72 h后的H9c2细胞,可见大量发绿色荧光的细胞,流式细胞术计数结果显示转染率均在60%左右,符合实验要求。3空质粒载体组、模型组、益心解毒方组的NADPH氧化酶活性表达明显高于正常组(P<0.01,P<0.05);模型组和益心解毒方组的NADPH氧化酶活性表达高于空载体组(P<0.01);模型组NADPH氧化酶活性表达均明显高于其他各组,而益心解毒方各组的NADPH氧化酶活性表达均明显低于模型组(P<0.01,P<0.05)。结论成功构建大鼠心肌细胞Nox2、Nox4亚基的重组质粒载体,该重组质粒载体可以在心肌细胞中过表达,益心解毒方可以有效地降低NADPH氧化酶活性的表达。提示此复方治疗心衰的机制可能是抑制了Nox2和Nox4型NADPH氧化酶的表达。