青蒿不同部位薄层鉴别比较研究

目的:通过收集青蒿植株不同部位的药材,对其主要化学成分进行定性研究,为黄花蒿药材资源的开发与利用奠定基础。方法:采用薄层鉴别法。结果:所建立的方法适用于青蒿不同部位的化学成分鉴别。结论:青蒿子、青蒿地上部分以及青蒿叶成分最为相似;花所含的挥发油种类最多,茎最少;茎可能不含或是含有极微量的青蒿素。其中,青蒿子、花、茎的薄层鉴别属首次报道。     

UV法与HPLC法测定青蒿中青蒿素含量的比较

目的:分别以高效液相色谱(HPLC)法与紫外分光光度(UV)法测定青蒿中青蒿素的含量,比较2种方法分析结果的差异。方法:HPLC法中色谱柱为Kromasil ODS C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(75:25),流速为1.0mL·min-1,检测波长为203nm,柱温为30℃。UV法中样品溶液用0.2%NaOH衍生后,在292nm波长处测定。结果:HPLC法标准曲线的线性范围为0.025～0.400mg·mL-1(r=0.9999),平均加样回收率为97.18%(RSD=3.58%,n=9);UV法标准曲线的线性范围为4～20μg·mL-1(r=0.9998)。UV法含量测定结果比HPLC法平均高出2.05倍。结论:HPLC法的精密度、稳定性、加样回收率都较好,对青蒿中青蒿素含量的分析较为准确。UV法不宜单独用于青蒿中青蒿素的含量分析。     

猴头菌-青蒿生物转化物的化学成分研究

目的:研究猴头菌-青蒿生物转化物的化学成分。方法:采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及重结晶等方法分离纯化,根据化合物的理化性质、波谱数据鉴定化学结构。结果:从猴头菌-青蒿生物转化物中分离得到10个化合物,分别鉴定为:麦角甾-7,22-二烯-3-酮(1)、豆甾-4-烯-6α-醇-3-酮(2)、(24R)-5α-豆甾-3,6-二酮(3)、fortisterol(4)、β-谷甾醇(5)、莨菪亭(6)、异茴芹内酯(7)、比克白芷素(8)、旱前胡乙素(9)、白花前胡丁素(10)。结论:其中,化合物2、4、8～10为在猴头菌丝体和青蒿的化学成分报道中首次发现,为生物转化后产物,此研究为进一步探讨猴头菌-青蒿经生物转化后成分组成的变化提供依据。     

Combination of artemisinin‐based natural compounds from Artemisia annua L. for the treatment of malaria: Pharmacodynamic and pharmacokinetic studies

Currently, the most effective antimalarial is artemisinin, which is extracted from the leaves of medicinal herb Artemisia annua L. (A. annua). Previous studies showed that the complex chemical matrix of A. annua could enhance both the bioavailability and efficacy of artemisinin. The present study aims to evaluate the efficacy and pharmacokinetic properties of a combination therapy based on artemisinin and 3 components from A. annua with high content (arteannuin B, arteannuic acid, and scopoletin). In vivo antimalarial activity was assessed following a 4‐day treatment in murine malaria models (Plasmodium yoelii and Plasmodium berghei). Results showed that a much sharper reduction in parasitemia (~93%) was found in combination therapy compared with pure artemisinin (~31%), indicating pharmacodynamic synergism occurring between artemisinin and arteannuin B, arteannuic acid, and scopoletin. Multiple‐dose pharmacokinetics further demonstrated that combination therapy results in increased area under the curve (AUC_0→∞), C_max, and t_1/2 by 3.78‐, 3.47‐, and 1.13‐fold in healthy mice, respectively, and by 2.62‐, 1.82‐, and 1.22‐fold in P. yoelii‐infected mice, respectively. The calculated oral clearance of combination therapy in healthy and P. yoelii‐infected mice was also reduced. These findings imply that specific components in A. annua might offer a possibility to develop new artemisinin‐based natural combination therapy for malaria treatment.     

栽培青蒿精油质量标准初步研究

 目的 研究制定栽培青蒿精油的质量标准。方法 水蒸气蒸馏法提取精油,GC-MS法分析精油的化学组成。结果 21批精油样品中共鉴定出72个相对百分含量大于1.00%化合物,其中樟脑（2.58%~37.50%）、龙脑（2.40%~40.58%）、β-石竹烯（2.02%~13.10%）、大根香叶烯-D（0.00%~10.85%）,β-石竹烯氧化物（0.00%~10.33%）、匙叶桉油烯醇（0.00%~7.55%）、2-(4a,8-二甲基-1,2,3,4,4a,5,6,7-八氢-2-萘基)-2-丙烯-1-醇（0.00%~5.62%）、杜松醇（0.00%~4.83%）和β-芹子烯（0.00~3.25%）在精油样品中普遍存在;且在16个精油样品中总量均在50.00%以上,最高达85.21%。结论 据文献报道的上述化合物的药理活性并结合本实验的研究结果综合分析,初步制定青蒿精油的质量标准如下：9个化合物在精油中的总含量应该不低于50.00%。     

黄花蒿内生菌IFB-E012发酵液的化学成分

目的：对黄花蒿内生菌Myrothecium roridum IFB—E012发酵液乙酸乙酯萃取物进行分离纯化,寻找具有新和／或强生物活性的化合物。方法：采用硅胶柱层析、SephadexLH-20凝胶柱层析等色谱方法进行成分的分离纯化,并利用波谱学技术对化合物进行结构鉴定。采用MTT法和尿酸形成量测定法分别评价化合物的细胞毒活性和黄嘌呤氧化酶抑制活性。结果：从IFB—E012发酵液中分离获得5个化合物,分别鉴定为7,8-二甲基异咯嗪（lumichrome,1）、胡萝卜苷（daucosterol,2）、对羟基苯甲酸（p-hydroxybenzoicacid,3）、尿嘧啶（uracil,4）和烟酸（nicotinic acid,5）。lumichrome对人鼻咽癌KB细胞和黄嘌呤氧化酶有抑制活性,其IC50分别为（14．46±0．13）μmol．L^-1和（60．32±0．48）μmol．L^-1。结论：Lumichrome具有较强的细胞毒活性和黄嘌呤氧化酶抑制活性,有待进一步深入研究。     

青蒿素对脑缺血/再灌注损伤大鼠白细胞介素-8表达的影响

目的探讨青蒿素对脑缺血/再灌注损伤大鼠白细胞介素-8(IL-8)表达的影响。方法将50只Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、青蒿素低、中、高浓度组,每组10只。采用大脑中动脉闭塞法复制局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠模型。假手术组和模型组均用30 mL生理盐水灌胃,青蒿素低、中、高浓度组分别溶于生理盐水中共计30 mL,剂量为400、300、200 mg.kg-1,灌胃,每日1次,连续60 d。采用放射免疫法检测血清IL-8水平,反转录-聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法检测组织IL-8 mRNA和蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组及青蒿素各浓度组血清IL-8水平和组织IL-8 mRNA、蛋白表达均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,青蒿素各浓度组血清IL-8水平和组织IL-8 mRNA及蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),且以青蒿素高浓度组下降更为明显(P<0.05)。结论青蒿素可降低脑缺血/再灌注损伤大鼠IL-8的表达,可有效控制炎症反应进程。     

Tissue cultures of Artemisia annua: Organogenesis and artemisinin production

Seeds of Artemisia annua obtained from different locations Europe(P1), Michigan USA (P2), Washington USA (P3), Hoechst India (P4) and Lucknow (P5) were germinated and grown in an experimental field station. The plants were harvested during the early flowering stage and analysed for artemisinin and arteannuin-B. Plants from Europe produced the highest level of artemisinin (6.50 mg% fresh weight (F.-W.)) and those from Lucknow produced the highest level of arteannuin-B (21.42 mg% F.W.). Callus initiation and growth was achieved on Murashige and Skoog's medium supplemented with BA (1 ppm) + NAA (1 ppm) from the five plant types. The European variety gave multiple shoots in BA (0.1 ppm) + IAA (1 ppm) medium and root formation in NAA (1 ppm) + Kn (0.1 ppm) medium. Artemisinin and atreannuin-B were detected in cultures of the European variety with complete differentiation (0.95 mg% F.W. and 6.57 mg% F.W. respectively).     

大肠杆菌CodA基因表达赋予转基因青蒿负选择表型

目的为了验证CodA基因是否适宜作为有效的青蒿基因打靶负选择标记。方法用PCR法扩增大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因CodA,经克隆和测序后插入植物基因表达载体pROK,并导入根癌农杆菌LBA4404(pAL4404)中。以共培养法转化青蒿叶盘,在添加25μg/mL卡那霉素(Kan)的N6培养基上选择青蒿转化愈伤组织并再生绿芽。将Kan抗性转基因青蒿芽转植到含有500μg/mL5-氟胞嘧啶(5-FC)和25μg/mLKan的MS培养基上继续培养2周。结果转基因青蒿芽全部死亡,而未转化青蒿芽仍正常生长,表明导入CodA基因的青蒿细胞已赋予其预期的负选择表型。经RT-PCR检测,转基因青蒿芽显示CodA阳性扩增带,而未转化青蒿芽无此特异扩增带。这一结果显示,CodA基因已在青蒿细胞中转录生成相应的mRNA,从而进一步印证了表型检测结果。结论CodA基因可作为有效的青蒿基因打靶负选择标记。     

黄花蒿ISSR-PCR反应体系的优化

目的:建立黄花蒿(Artemisia annuaL.)的ISSR最佳反应体系及PCR扩增参数,为今后利用ISSR标记技术开展黄花蒿种间遗传多样性分析提供一个标准化程序。方法:以黄花蒿DNA为材料,分析了ISSR反应体系中的DNA、Mg2 、dNTPs浓度,TaqDNA聚合酶用量以及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响。结果:建立了重复性好,分辨率高的ISSR反应体系,即在25μL反应体系中,模板DNA浓度为15~45 ng,2.5μL的10倍Buffer(Mg2 free)缓冲液,MgCl22.0 mmol/L,dNTPs为0.15 mmol/L,Taq酶1.0 U,引物1.0μmol/L;扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,引物在筛选后的最佳退火温度退火45 s,72℃延伸2 min,共计40个循环,循环结束后在72℃延伸5 min。结论:建立了适用于黄花蒿的ISSR反应体系,为今后利用ISSR标记技术开展黄花蒿种间遗传变异分析和构建遗传图谱奠定了基础。