房颤大鼠心肌细胞缝隙连接蛋白Cx43磷酸化水平改变及青蒿提取物的干预作用

目的：通过建立房颤大鼠模型,研究房颤状态下Cx43磷酸化水平对房颤发生的影响以及中药青蒿提取物对Total-Cx43、NP-Cx43表达与分布的影响。方法：建立房颤大鼠模型,使用青蒿提取物进行干预,以卡托普利作为对照组。实验当日处死动物后Western-blot法检测Cx43表达及磷酸化水平。激光共聚焦显微镜检测Total-Cx43、NP-Cx43分布情况。结果：Total-Cx43的表达中对照组的表达量最高,模型组表达量最低,较对照组下降了（57.2±12.5）%（P〈0.05）,青蒿组与卡托普利组相比,表达量没有统计学差异（P〉0.05）。NP-Cx43的表达中对照组的表达量最高,模型组表达量最低,模型组、青蒿组、卡托普利组之间没有统计学差异（P〉0.05）。结论：房颤的发生与Total-Cx43表达减少以及重新分布有密切关系。青蒿提取物以及卡托普利对房颤的改善作用机制之一是通过改变Total-Cx43的表达与分布实现的。在房颤的发生过程中,Total-Cx43的表达与分布发生改变,NP-Cx43的表达与分布无异常,说明P-Cx43是诱发房颤的重要因素。     

青蒿琥酯对大鼠原代肝星状细胞产生与分泌转化生长因子β1的影响

目的 探讨青蒿琥酯对大鼠原代肝星状细胞(HSC)增殖的影响,从抑制HSC表达、生成和分泌转化生长因子β1 (TGF β1)这一环节探讨其抗肝纤维化的机制. 方法 分离大鼠HSC于培养瓶中原代培养10d,已处于培养活化状态,将HSC分为实验组和对照组,实验组以青蒿琥酯(终浓度分别为125、150、175、200、225μmol/L)作用24、48、72 h.以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖率,RT-PCR法检测HSC中TGFβ1 mRNA的表达水平,Western blot法分析TGFβ1蛋白水平的变化,酶联免疫吸附法测定培养上清液中TGFβ1含量.样本均数比较采用单因素方差分析,两样本均数比较采用独立样本t检验. 结果 不同浓度青蒿琥酯对培养活化的HSC均有明显抑制作用,且呈剂量-效应关系和时间-效应关系,作用24h时,125、150、175、200、225μmol/L青蒿琥酯对HSC的抑制率分别为6.06％±1.44％、21.47％±5.57％、42.00％±7.36％、67.12％±4.55％、79.83％±3.67％(P值均＜0.01).青蒿琥酯作用HSC 24h能明显抑制、下调HSC表达TGFβ1mRNA,呈剂量-效应关系(P＜0.01);并且明显降低细胞内TGFβ1蛋白及细胞上清液中TGFβ1水平,0、150、175、200μmol/L青蒿琥酯处理组TGFβ 1分别为(164.24±6.88) pg/ml、(102.68±4.45)pg/ml、(86.54±5.56)pg/ml、(56.55±5.66) pg/ml(P值均＜0.01).结论 青蒿琥酯呈剂量和时间依赖性地抑制原代分离培养活化的HSC,青蒿琥酯在体外具有抗肝纤维化的作用,与其下调TGFβ1基因及蛋白的表达、翻译与TGFβ1分泌至细胞外等环节有关.     

低温诱导青蒿素生物合成

目的:研究低温处理对青蒿素及其他萜类合成通路的影响。方法:以4℃为胁迫条件,利用高效液相色谱法测定青蒿素含量;硫酸钛沉淀法和N,N-二甲基-对-亚硝基苯胺漂白测定法分别检测黄花蒿叶片过氧化氢(H2O2)和单线态氧(1O2)含量;紫外分光光度法检测过氧化氢酶(CAT)活性;实时荧光定量PCR技术定量分析青蒿素合成途径及竞争途径关键酶基因的表达。结果:4℃处理4h后黄花蒿叶片中1O2和H2O2含量升高,并伴随青蒿素含量和CAT活性逐步提高,4、24和48h后青蒿素含量分别提高20%、65%和80%;4℃处理24h后,青蒿素合成相关基因[3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因(HMGR)、法呢基焦磷酸合酶基因(FPS)、紫穗槐二烯合酶基因(ADS)、细胞色素P450单加氧酶基因(CYP71AV1)、细胞色素P450氧化还原酶基因(CPR)、青蒿醛Δ11(13)双键还原酶基因(DBR2)]的表达普遍上调,其中ADS的表达提高16倍;而青蒿素合成竞争途径的β-石竹烯合酶基因(CS)表达则下调近20倍。结论:低温刺激可能通过产生高浓度活性氧(ROS)促进青蒿素合成前体转化、上调青蒿素合成相关基因表达并抑制竞争途径基因表达等途径促进青蒿素合成。     

荧光探针法研究青蒿多糖及黄酮对DNA的保护作用

 目的 对比研究湖南、北京、重庆等不同产地14种青蒿中多糖和黄酮类化合物对DNA的保护作用。方法 利用溴化乙锭（EB）作为荧光探针,检测14种青蒿中多糖和黄酮类化合物存在下DNA与EB混合液的荧光积分强度。药物分子与DNA相互作用程度可用作用常数D来表示,根据D的大小研究多糖和黄酮含量对DNA保护作用的影响。结果 经测定,水提液中多糖对DNA的作用强弱顺序为：湖南怀化>北京>山西榆社>湖南种子（忻州种植）>山西忻州室内培育蒿>重庆（忻州种植）>河北阜平>山西定襄南庄>重庆>山西忻州卢野>山西盂县>山西阳曲灰蒿;醇提液中黄酮对DNA的作用强弱顺序为：山西忻州卢野>湖南（忻州种植）>山西忻州室内培育蒿>重庆(忻州种植)>山西忻州野生>山西阳曲灰蒿>山西定襄南庄>重庆>河北阜平>北京>山西榆社>山西忻州铁杆蒿>山西盂县>湖南怀化。青蒿多糖、黄酮与DNA的相互作用呈现一定的量效关系。结论 研究表明：14种青蒿提取液均能与探针DNA/EB作用,但作用程度不同;D值越大,药物与DNA作用越强,反之越弱。
     

用超临界CO2萃取技术提取青蒿素的研究

用超临界CO     

黄花蒿干物质的积累及青蒿素与N、P、K量的动态变化研究

目的 通过对黄花蒿干物质的积累及青蒿素与N、P、K量的动态变化研究，了解黄花蒿植株N、P、K的需求比例以及干物质的积累及N、P、K量和青蒿素量之间的关系，为肥料的合理配施提供参考。方法 以桂93001号黄花蒿为观测对象，定期采集植株样品，测定其生物量和根、茎、叶、花中的N、P、K以及叶片和花的青蒿素量。结果 黄花蒿7月中旬前干物质积累量最少，青蒿素的积累量最大，8月中旬到9月底干物质积累量较大，9月底叶片的青蒿素量达到最低；黄花蒿植株N、P、K积累量较多的时期主要在其生长前期，其中N、K是黄花蒿需要较多的营养元素，N、P、K在植株体内分配的比例为1∶0.12∶0.76，每生产100 kg黄花蒿需要N 19.6～28.2、P 2.0～3.4、K 13.6～17.3 kg。结论 施肥的重要时期主要放在生长前期，而肥料应以N、K肥为主，配施适量的P肥，根据目标产量和土壤N、P、K量确定其施肥量。