冬虫夏草口服液微生物限度检查方法学验证

目的：建立冬虫夏草口服液微生物限度检查方法,并对方法进行验证。方法采用常规法,通过大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念球菌、黑曲霉5种阳性菌回收率试验进行细菌、霉菌和酵母菌计数方法的验证,同时对控制菌检查方法进行验证。结果采用常规法计数细菌、霉菌及酵母菌时,各试验菌回收率在70％以上;控制菌检查中,各阳性试验菌均检出,阴性对照无菌生长。结论可以采用常规法进行冬虫夏草口服液的微生物限度检查。     

当归苗根直径大小对提前抽薹率及产量的影响

目的研究根直径与提前抽薹的关系,减少当归提前抽薹率。方法采用不同根直径当归苗移栽,对提前抽薹率和产量进行研究。结果6月份当归提前抽薹株就可以从田间直接观察到,6～7月是抽薹高发期,到10月2日,根直径≥0.86cm的处理抽薹率最高,达到94.65%,≤0.35cm的处理则只有1.63%;在≤0.35cm处理中,出苗率为33.62%,≥0.86cm处理的出苗率最高,达到了95.75%,收获株数只有6395株/hm2,根直径0.46～0.55cm的处理达到68398株/hm2,显著高于其他处理;最高产量出现在0.46～0.55cm移栽苗根直径范围内,其鲜、干当归产量分别为5717.58kg/hm2和1554.98kg/hm2。结论生产上应选择根直径在0.46～0.65cm的苗进行移栽。     

深圳市淡水鱼华支睾吸虫感染调查及实验研究

目的了解深圳市淡水鱼华支睾吸虫(肝吸虫)囊蚴感染情况,阻断和控制肝吸虫病在深圳市的传播和流行。方法用鱼体消化法筛查肝吸虫囊蚴;以肝吸虫过氧化物酶(SOD)基因保守序列作为摸板,RT- PCR鉴别肝吸虫囊蚴。结果对深圳市淡水鱼肝吸虫感染情况进行调查,共抽检16种鱼257份样品,其中检出肝吸虫囊蚴45份,检出率为17．50％。检出率最高的鱼种依次为鲩鱼40．74％、鲮鱼26％、鲤鱼22．5％、大头鱼 22．85％、生鱼16．6％、非洲鲫鱼14．5％;RT-PCR检测结果与镜检结果完全一致。结论检测结果显示深圳市淡水鱼中肝吸虫的感染情况严重,尤其是鲩鱼的感染率较高,为了控制和阻断肝吸虫的传播必须改变吃淡水鱼生的生活习惯。     

湖北省部分县市媒介按蚊对杀虫剂抗药性监测与分析

目的了解媒介按蚊对杀虫剂抗性程度,为合理使用杀虫剂提供科学依据。方法 2007年和2012年对湖北省江陵等部分县市媒介按蚊的抗药性进行了监测,采用WHO成蚊滤纸接触法,以区分剂量死亡率判定抗性级别,以开始击倒时间和击倒率评估Kdr抗性,以半数致死量确定抗性水平。结果 9个监测点媒介按蚊首只蚊虫被击倒的时间为5~30 min,击倒率为1.00%~48.94%,表明其抗击倒力较强。区分剂量校正死亡率均小于80%,为抗性群体。京山县、安陆市、孝昌县和仙桃市媒介按蚊对溴氰菊酯KT50分别为227.78、138.41、263.41和6 234.72 min,比1996年提高了20~631倍。京山县媒介按蚊对0.05%溴氰菊酯LT50为684.12 min,比1998年提高了306倍。结论媒介按蚊对溴氰菊酯均已产生抗性,且抗击倒力较强,抗性程度较高,应加强监测。     

西藏冬虫夏草水提液HPLC指纹图谱研究及核苷类成分测定

目的建立西藏不同产区27批冬虫夏草水提液的高效液相色谱指纹图谱,并定量测定其6种主要核苷类成分（尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷、2＇-脱氧腺苷）的质量分数。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent Eclipse XDB—C18柱（250mm×4．6mm,5μm）,检测波长260nm,以甲醇．水为流动相进行梯度洗脱,柱温25℃,流速O．8mL·min^-1。结果建立了冬虫夏草水提液的HPLC指纹图谱,包含11个共有峰,各峰分离良好,指认出尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷、2’-脱氧腺苷6个特征成分．同时测定了其质量分数;6种特征成分质量浓度分别在10．71-96．4（r=0．9999）,8．50～76．41（r：0．9999）。7．838-70．54（r=0．9999）,1．120-10．08（r=0．9998）,5．715-51．44（1-=0．9999）,0．2625～2．363μg·mL^-1（r=0．9997）范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率依次为96．5％、97．7％、97．5％、95．2％、96．8％、101．5％,RSD分别为2．3％、2．7％、2．0％、2．6％、3．0％、2．7％（n=6）。结论本试验建立的指纹图谱可同时对冬虫夏草的6种主要核苷类成分进行分析,对评价藏产冬虫夏草的质量具有重要意义。     

中华分枝睾吸虫性胆道感染与胆道结石的外科治疗——28年总结

本文报告28年间73例华枝睾吸虫胆道感染与结石的手术治疗经验.其中,非结石性胆管、胆囊炎占46.6%,结石性胆管、胆囊炎占53.4%.合并肝、胆、胰癌7例,占9.6%(随机对照组为0).手术治疗方式8种.住院病死率8.2%.手术并发症率47.9%.残留结石率48.7%.本文就华枝睾吸虫感染对肝胆系统的严重危害、与胆道蛔虫临床的比较、发病机理、外科疗效及改进进行了讨论.     

华支睾吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶的表达定位及其酶活性的研究

目的克隆和表达有酶活性的华支睾吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(CsTPx),并进行组织定位研究,为进一步研究其功能奠定基础。方法利用生物信息学方法从华支睾吸虫基因组文库中识别硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)基因,并对蛋白的结构特征和相关生物学和免疫学功能进行预测。从华支睾吸虫成虫cDNA中扩增目的基因,克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,进行蛋白纯化,免疫印迹鉴定、组织定位及其酶活性的检测。结果华支睾吸虫TPx基因全长2 175 bp,有一大一小的两个内含子,其编码区序列长度为636 bp,编码212个氨基酸;该蛋白第1~17位氨基酸为其信号肽序列,第51~74位氨基酸为跨膜区,属于经典的2-Cys过氧化物还原酶。重组蛋白可被感染了华支睾吸虫的大鼠血清识别,免疫组化结果表明该蛋白定位于成虫的皮层、肠支、卵黄腺、虫卵和囊蚴的体壁中。酶活性检测结果表明,在一定范围内,CsTPx还原H2O2呈剂量和时间依赖性。抗体对酶活性有影响,在合适的抗体水平可以促进酶活性。结论 CsTPx可在大肠杆菌中进行功能性表达,其产物具有良好的免疫学和生物学活性。     

郑州中华按蚊实验种群的建立

目的：建立郑州中华按蚊实验种群,以便对其进行广泛、深入的实验研究。方法：在特定条件的实验 室内,采用驯化和科学养殖的方法。结果：郑州野外的中华按蚊在实验室内交配、受精、吸血、产卵、各期发育、存活 均已顺利进行,累代养殖获得成功。结论：创建了郑州中华按蚊实验种群,为科研工作奠定了基础。     

NRK-52E缺血再灌注损伤时Kim-1、NO变化及虫草对其的干预作用

目的通过抗霉素A(Antimycin A,AA)刺激大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)模拟体外缺血再灌注损伤过程,观察缺血再灌注损伤时NRK-52E中肾损伤分子-1(kidney injury molecule-1,Kim-1)及NO表达的变化及冬虫夏草对其的干预作用。方法将体外培养的NRK-52E分为对照组、模型组和虫草组。虫草组予含40 mg/L虫草原液的培基预处理。培养72 h后NRK-52E去除培基,予10-10 mol/L抗霉素A(AA)刺激1 h,模拟体外缺血过程,1 h后再加入培基,模拟体外再灌注损伤过程。分别在AA刺激前,AA刺激后1 h,加入培基再灌注10 min,30 min,60 min,120 min共6个时间点终止实验。用流式细胞仪以Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;分别用硝酸还原酶法和ELISA检测细胞上清液Kim-1与NO浓度;用RT-PCR法观察Kim-1 mRNA表达。结果 NRK-52E细胞经AA刺激后,细胞凋亡率显著增高,同时Kim-1表达上调;缺血60 min较缺血前Kim-1蛋白水平增加了3.1倍,再灌注10 min增加了3.6倍(P<0.05)。Kim-...     

当归水溶性多糖的分离、纯化及结构初步分析

采用80℃热水提取，得到当归水溶性多糖W-ASP。经阴离子交换柱层析、凝胶过滤柱层析对其进行纯化分级。实验结果表明：W-ASP11主要由葡萄糖组成，相对分子质量约为380000；W-ASP12主要由半乳糖和阿拉伯糖组成，相对分子质量约为19000；W-ASP2和W-ASP3主要舍半乳糖、阿拉伯糖和鼠李糖以及少量葡萄糖和甘露糖，并含有较高的糖醛酸，由单糖组成及红外图谱初步分析，可判断是一种果胶类多糖。当归多糖主要组分W-ASP3经凝胶色谱（GPC）鉴定为均一组分，其相对分子质量约为62000。