砂仁盐炙前后“缩尿”作用比较研究

目的比较砂仁盐炙前后“缩尿”作用的差异。方法应用水负荷小鼠尿多模型,观察砂仁盐炙前后的“缩尿”作用。结果盐灸砂仁低剂量对缩尿有显著性作用,并且作用优于生砂仁及盐灸砂仁其他各剂量组。结论从药理实验初步证实了中药炮制理论“盐炙入肾”的正确性。     

基于非靶向代谢组学的草果不同部位间差异代谢物分析

目的 对草果不同部位间代谢物差异进行分析,为探究草果非药用部位的潜在应用价值提供参考。方法 利用非靶向代谢组学技术,对草果的茎、叶和果实3个部位的代谢物进行差异性比较分析。结果 基于非靶向代谢组学技术鉴定草果茎、叶和果实的代谢物,筛选出了373个代谢物,主要包括萜类、酚类、碳水化合物和碳水化合物结合物、氨基酸、肽和类似物、脂肪酸和共轭物、类固醇和类固醇衍生物、类花生酸、醇和多元醇类及黄酮类等,茎与叶、茎与果实、叶与果实之间的差异代谢物分别为45、72、85个;2,5-二羟基苯甲酸酯、十二烷酸、5-甲硫基腺苷、腺苷、丙酸睾丸酮、D-葡萄糖-1-磷酸、乳清酸核苷和栎精在茎中含量最高,在果实中含量最少;L-苹果酸和氧代戊二酸等代谢物在叶中含量最高,在果实中含量最少;亚油酸代谢和丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢是形成草果组织差异代谢物的重要代谢途径。结论 草果的茎、叶、果实同样富含许多相同的活性代谢物质,其非药用部位也具有重要的食品和药品等方面经济利用价值,为草果的开发和充分利用提供一定的科学依据。     

水杨酸及其信号转导基因表达在阳春砂果实发育过程中的变化

【目的】对阳春砂发育过程中内源水杨酸含量及转导途径中的关键基因的关系进行深入分析。【方法】以6月、8月采集的阳春砂新鲜果实为实验材料,采用液相质谱联用(LC-MS/MS)的方法测定阳春砂种子团及果皮中水杨酸的含量并结合幼果期、成熟中期、成熟末期的阳春砂果实的高通量测序表达谱数据,分析3个发育时期中水杨酸信号转导通道中相关基因的表达模式。【结果】阳春砂果实发育过程中,种子团及果皮内水杨酸的含量变化一致,且与水杨酸信号转导途径的关键基因的表达量变化基本一致,均呈上升趋势。【结论】内源水杨酸与其信号转导基因之间存在密切的关系。推测为种子团内合成水杨酸后运输至果皮。     

阳春砂基于转录组的萜类合酶基因挖掘及一个单萜合酶基因的克隆

【目的】深入挖掘阳春砂转录组中挥发性萜类合酶相关基因,为全面认识阳春砂挥发性萜类代谢途径和分子调控模式奠定基础。【方法】整理前期工作获得的阳春砂2个转录组的数据,筛选已注释的及利用本地blast方法再注释的萜类合成途径的unigene;并通过对部分候选unigene的表达量与挥发性萜类化合物含量的相关性分析及生物信息学分析,进一步筛选出相关基因;采用PCR及重组载体构建的方法克隆其中一个单萜合酶基因,并对其编码蛋白序列进行分析。【结果】筛选得到10个挥发性萜类合成上游途径相关unigene及11个下游萜类合酶基因;相关性分析证明候选基因与阳春砂主要挥发性萜类有较强相关性;并成功克隆得到Av TPS1基因,其序列包含1 803 bp的开放阅读框,编码600个氨基酸;其编码蛋白含有单萜合酶蛋白特有的DDXXD、RRX8W和NSE/DTE等保守基序,N端含有一段叶绿体转运肽;系统进化分析表明Av TPS1属于TPS-b亚家族。【结论】结合转录组、表达谱数据的深入挖掘和与挥发性萜类化合物数据的关联,有效筛选出了阳春砂多个值得后续研究的萜类合酶基因;其中对Av TPS1的克隆及生物信息学分析为后续功能鉴定提供了基础。     

香砂六君子颗粒防治肝癌肝动脉化疗栓塞介入后肝纤维化30例

目的:观察香砂六君子颗粒防治肝癌肝动脉化疗栓塞介入(Transcatheter arterial chemoembolization,TACE)治疗后所致肝纤维化的临床疗效。方法:将60例施行TACE术的肝癌患者随机分为治疗组和对照组,每组各30例,对照组给予常规保肝治疗,治疗组在对照组的基础上服用香砂六君子颗粒剂,两组分别于介入治疗前和第2次介入治疗后2周检测人外周血清透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层粘连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(colⅣ)水平变化。结果:两组患者治疗后HA、PC-Ⅲ显著低于治疗前,且治疗组低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:香砂六君子颗粒具有延缓肝癌介入治疗后肝纤维化发展的作用。     

阳春砂萜类合酶AvTPS1启动子的克隆及其活性分析

目的获得药用植物阳春砂Amomumvillousm的萜类合酶基因Av TPS1的启动子并进行活性分析。方法从阳春砂叶片基因组DNA(g DNA)中克隆获得Av TPS1基因,再通过FPNI-PCR的方法从阳春砂叶片g DNA中克隆Av TPS1的启动子并进行序列分析,构建由该启动子驱动β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)的重组表达载体p CAM-Av TPS1p,利用农杆菌介导法注射侵染烟草Nicotianabenthamiana叶片进行瞬时表达来验证Av TPS1启动子的活性。结果获得Av TPS1的g DNA序列长度为2444 bp,经过序列比对发现Av TPS1含有7个外显子和6个内含子;通过FPNI-PCR成功获得568bp的Av TPS1启动子序列,其含有10种顺式作用元件,包括保守元件TATA-box和CAAT-box,以及可被转录因子MYC结合的G-box等;通过GUS染色发现Av TPS1启动子启动了GUS基因的表达,使转基因烟草叶片呈现蓝色。结论 Av TPS1启动子被成功克隆,且通过实验验证其具有启动基因表达的功能,为进一步研究Av TPS1在萜类合成途径的功能及其受转录因子调节的机制奠定了基础。     

阳春砂二酮辅酶A合成酶的基因克隆及序列分析

目的 对阳春砂姜黄素生物合成途径的关键酶二酮辅酶A合成酶（diketide CoA synthase,DCS）基因的编码cDNA序列进行克隆,为研究阳春砂姜黄素生物合成与基因调控奠定基础。方法 结合阳春砂的转录组注释,根据编码区序列设计引物,通过PCR方法克隆阳春砂DCS基因的编码区cDNA。结果 PCR扩增了一个长1 170 bp的基因片段,该片段编码由389个氨基酸组成的DCS。同源性比对结果显示基因编码蛋白与姜黄的DCS具有氨基酸一致性达96%,与水仙等植物的查耳酮合酶（chalcone synthase,CHS）氨基酸一致性达66%～69%。进化树分析结果显示,与姜黄Curcumae Longae具有较近的亲缘关系。结论 首次从阳春砂中克隆DCS基因获得其编码区序列,为分析基因表达特性及其在姜黄素生物合成中的功能奠定基础。     

不同方法提取草果挥发油的化学成分

目的:研究用不同方法提取的草果挥发油的化学成分变化。方法:通过微波、超声辅助萃取和水蒸气蒸馏提取草果挥发油,用正交实验法研究各种方法的最佳提取条件,运用GC/MS法分析鉴定不同方法提取草果挥发油的化学成分。结果:3种提取方法的最高收率分别是4.50%(微波萃取)、3.82%(超声萃取)、2.75%(水蒸气蒸馏),3种方法共分离出39种化合物,主要为单萜类化合物。结论:3种方法提取挥发油的化学成分、指纹图谱均相似,在快速提取挥发油时可以采用微波、超声辅助提取。     

阳春砂种子蛋白质提取方法的探索

【目的】探索适用于阳春砂种子蛋白质的提取方法,为研究阳春砂种子休眠与萌发过程中的差异蛋白质组学奠定基础。【方法】分别采用4种较常用的蛋白质提取方法[Tris-HCl提取法、三氯乙酸（TCA）-丙酮沉淀法、直接裂解法以及改良Tris-饱和酚法]提取,对得到的蛋白质提取液进行定量及十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳分析。【结果】直接裂解法蛋白质提取率最大,小分子蛋白较多; Tris-HCl法提取率最小,且条带扩散; TCA-丙酮沉淀法和改良Tris-饱和酚法提取率居中,但是TCA-丙酮沉淀法条带少,饱和酚法条带多,且可以得到大分子蛋白。【结论】可以综合直接裂解法和改良Tris-饱和酚法,为阳春砂种子双向电泳的蛋白质提取方法提供参考。     

行气祛瘀汤煎煮工艺研究

目的评价不同煎煮工艺对行气祛瘀汤中一般煎煮药物丹参和特殊煎煮药物木香、砂仁的影响,以制订最佳煎煮工艺。方法分别以丹参酚酸B、木香挥发油、砂仁挥发油的含量为考察指标,采用L9(34)正交试验,改进煎煮工艺。结果行气祛瘀汤中丹参酚酸B的最佳煎煮条件为,在正常大气压下,药材浸泡30 min,然后在100℃沸水中煎煮40 min;木香挥发油的最佳煎煮条件为,在正常大气压下,药材浸泡30 min,然后在丹参煎煮20 min时投入,再煎煮20 min;砂仁挥发油的最佳煎煮条件为,在正常大气压下,药材浸泡20 min,然后在木香煎煮15 min时投入再煎煮5 min。结论煎煮时间对行气祛瘀汤中的丹参酚酸B、木香挥发油、砂仁挥发油的含量影响最大,其次为浸泡时间,煎煮温度和煎煮压力的影响不明显。