骨髓间充质细胞与速固化磷酸钙支架共培养的实验研究

[目的]观察人骨髓间充质干细胞在速固化磷酸钙骨水泥支架中的增殖和生长情况。[方法]将速固化壳聚糖-磷酸钙骨水泥支架材料预先成形。采用全骨髓法分离人骨髓间充质细胞并在体外对细胞进行培养和扩增。72h首次换液,细胞融合80%传代,取第3代细胞用于实验。将细胞与磷酸钙骨水泥支架复合培养,分别利用四甲基偶氮唑蓝MTT法及扫描电镜等检测细胞在材料中的增殖和生长情况。[结果]用酶标仪检测OD值提示共培养后,支架内的细胞数量逐渐增加。扫描电镜结果显示支架材料内部为多孔结构,孔内见有细胞生长,细胞表面可见分泌颗粒。[结论]速固化壳聚糖-磷酸钙骨水泥对人骨髓间充质干细胞有较好的细胞相容性,细胞可在材料内黏附和增殖,是理想的骨组织工程支架材料。     

自制苏芪合剂联合治疗Ⅲ～Ⅳ级IgA肾病的临床疗效观察

目的 探讨自制苏芪合剂对Ⅲ～Ⅳ级IgA肾病患者的疗效及患者T细胞功能的改善.方法 28例Ⅲ～Ⅳ级IgA肾病患者随机分为两组,对照组:醋酸泼尼松-日1mg,kg,隔日晨起顿服,盐酸苯那普利-日10mg;治疗组:在上述用药的基础上加用自制苏芪合剂.8周后,观察患者缓解率、T细胞功能及不良反应.结果 治疗组患者在缓解率、T细胞功能改善等方面优于对照组,且因糖皮质激素的使用而出现的不良反应少于对照组.结论 苏芪合剂联合治疗Ⅲ～Ⅳ级IgA肾病疗效显著并能有效改善T细胞功能.     

In Vivo Anergized T Cells Form Altered Immunological Synapses In Vitro

T cells contact allogeneic antigen presenting cells (APCs) and assemble, at their contact interface, a molecular platform called the immunological synapse. Synapse-based molecules provide directional signals for the T cell--either positive signals, resulting in T-cell activation, or negative signals causing T-cell inactivation or anergy. To better understand the molecular basis of in vivo T-cell anergy we analyzed the contacts made between in vivo anergized T cells and APCs, and determined which signaling molecules were included or excluded from their immunological synapses. Anergy was induced in TCR transgenic mice by the intravenous injection of semiallogeneic donor spleen cells. T cells from anergized mice were mixed with APCs, the T-cell/APC synapses imaged using deconvolution microscopy, and their molecular compositions were determined. T cells from anergic mice formed unstable immunological synapses in vitro with allogeneic APCs and failed to recruit the signaling proteins necessary to initiate T-cell activation. These findings suggest that T-cell anergy induced by exposure to semiallogeneic donor cells is associated with defects in the earliest events of T-cell activation, immunological synapse formation and recruitment of TCR-mediated signaling proteins.     

菲立磁标记兔BMSCs自体移植脊髓后的核磁共振活体示踪及形态学研究

目的通过观察菲立磁标记兔骨髓源性神经干细胞(BMSCs)自体移植脊髓后的核磁共振活体示踪及形态,期待找到一种应用非侵袭性方法来识别、跟踪BMSCs的存活状态及与宿主组织整合情况的方法。方法无菌条件下股骨取骨髓,梯度密度离心法分离获取兔骨髓基质细胞;使用“Feridex-多聚赖氨酸复合物(FE-PLL)”标记骨髓基质细胞,采用普鲁士兰染色和台盼蓝排除实验等方法鉴定FE-PLL标记兔骨髓基质细胞的效率和细胞的活力;体外标记的细胞自体脊髓移植,磁共振、免疫组织化学染色和透射电镜检查。结果普鲁士蓝染色显示FE-PLL标记骨髓基质细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒;与正常未标记的细胞相比较,FE-PLL标记对骨髓基质细胞的活力、增殖和分化等能力没有明显的影响;经菲立磁标记的兔BMSCs自体脊髓移植后,可在核磁共振上活体示踪。结论菲立磁与核磁共振联合可无创性活体标记检测移植的神经干细胞基本的存在部位、存在方式及其一些生物学特性,可以用来活体示踪移植的BMSCs。     

大鼠骨髓间充质干细胞与多孔双相磷酸钙陶瓷支架体外黏附的实验研究

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)诱导培养后在多孔双相磷酸钙(biphasiccalciumphosphate,BCP)陶瓷支架材料上的黏附和生长。方法SD大鼠MSCs经矿化诱导培养、扩增,具有成骨细胞表型后,与多孔BCP陶瓷支架及普通多孔羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)陶瓷支架体外复合培养,扫描电镜观察比较MSCs在两种材料支架表面的黏附数量和形态;同时以0.5、1.0、2.0、3.0和4.0×106/ml浓度细胞悬液接种于多孔BCP支架材料,检测适宜的接种浓度及单位体积支架材料可黏附MSCs数量。结果大鼠MSCs经诱导培养14d后,行矿化沉积茜素红染色、型胶原免疫细胞化学染色及碱性磷酸酶细胞化学染色,结果均为阳性。大鼠MSCs黏附于多孔BCP陶瓷上的细胞数(88.00±6.58)明显高于HA陶瓷组(39.00±3.65),两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。当接种浓度为2.0×106/ml时,单位体积的陶瓷支架材料最多可黏附MSCs数量为1.28×107个/cm3,为细胞适宜接种浓度。结论大鼠MSCs在体外经矿化诱导培养可表达成骨细胞表型,细胞浓度为2.0×106/ml时与多孔BCP陶瓷支架材料具有良好的黏附能力。     

兔视网膜方向选择性神经节细胞树突的独特分枝模式及其生理意义

本实验研究了兔视网膜中的方向选择性神经节细胞 (direction selective retinal ganglion cells,DS cells)树突野的分枝模式。测量了视网膜中方向选择性神经节细胞和作为经典分枝模式神经元代表的α神经节细胞的树突直径。发现 ,方向选择性神经节细胞的树突在分枝后直径达到 0 .5 μm,进一步分枝树突直径仍保持在 0 .5 μm左右 ,这样 ,在方向选择性神经节细胞树突野中大多数树突直径在 0 .5μm左右。而作为经典分枝模式神经元代表的α神经元的树突每次分枝后都逐级变细 ,最终直径达到 0 .5μm左右 ,这样 ,α神经节细胞的树突直径大部分都大于 0 .5μm。我们应用程序“NEU RON”对在两种神经元模型中 ,抑制点落于兴奋点与胞体之间 (proximal)和抑制点不落于兴奋点与胞体之间 (distal)这两种情况进行模拟。我们发现 ,当抑制点不落于兴奋点与胞体之间时 ,在方向选择性神经节细胞的树突分枝模型中 ,抑制效果更强。那么 ,将使得方向选择性神经节细胞对抑制点落于兴奋点和胞体之间的要求变得不是那么迫切。所以 ,方向选择性神经节细胞的这种独特分枝模式 ,也许可以避免或至少减轻其在发育中可能会产生的连线的复杂性。并且 ,我们对得出的结论进行了电路分析 ,对方向选择性神经节细胞这种独特的分枝模式具有的?     

前列通瘀提取液对前列腺平滑肌细胞增殖与凋亡的作用

目的:研究前列通瘀提取液对体外培养前列腺基质平滑肌细胞增殖与凋亡的作用。方法:分别以1、2、10、50、100×10-5g/L 5种不同浓度前列通瘀提取液作用体外培养前列腺基质平滑肌细胞,采用MTT和TUNEL法分别测定抗增殖指数和凋亡指数。结果:5种不同浓度前列通瘀提取液作用48 h后抗增殖指数分别为50.61%、53.52%、56.92%、65.53%、72.94%,抗增殖效果随着浓度增大而增大。100×10-5g/L前列通瘀提取液作用24、48、72 h后凋亡指数与对照组比较差异无显著性。结论:(1~100)×10-5g/L前列通瘀提取液体外作用前列腺基质平滑肌细胞具有显著的抗增殖作用。     

基因转移FasL治疗人黑素瘤的实验研究

目的探讨体内外基因转移F as配体(F as-ligand,F asL)对恶性人黑素瘤细胞凋亡的影响。方法用携带人F asL cDNA的缺陷型重组腺病毒(A d-F asL),在体外转导两株黑素瘤细胞,并使其表达;通过流式细胞仪、RT-PCR法进行F as/F asL表达检测,TUNEL法及荧光显微镜相关凋亡检测、分析。建立人黑素瘤裸鼠模型,并对其进行体内疗效观察及病理学检查。结果流式细胞仪和RT-PCR检测两株黑素瘤细胞表面均表达F as,不表达F asL,而A d-F asL转导的两株黑素瘤细胞均能表达F asL;A d-F asL能显著诱导两株黑素瘤细胞在体外凋亡或抑制其生长。体内疗效观察黑素瘤荷瘤鼠模型治疗组瘤重(0.48±0.16)g与对照组瘤重(1.02±0.19)g相比,差异有显著性(P<0.05)。肿瘤组织形态学检查,治疗组可见肿瘤细胞凋亡坏死区及炎性细胞浸润。结论F asL基因重组腺病毒在体内外均具有显著诱导人黑素瘤细胞凋亡的效果。     

In vivo detection of single cells by MRI.

The use of high-relaxivity, intracellular contrast agents has enabled MRI monitoring of cell migration through and homing to various tissues, such as brain, spinal cord, heart, and muscle. Here it is shown that MRI can detect single cells in vivo, homing to tissue, following cell labeling and transplantation. Primary mouse hepatocytes were double-labeled with green fluorescent 1.63-microm iron oxide particles and red fluorescent endosomal labeling dye, and injected into the spleens of recipient mice. This is a common hepatocyte transplantation paradigm in rodents whereby hepatocytes migrate from the spleen to the liver as single cells. One month later the animals underwent in vivo MRI and punctuated, dark contrast regions were detected scattered through the livers. MRI of perfused, fixed samples and labeled hepatocyte phantoms in combination with histological evaluation confirmed the presence of dispersed single hepatocytes grafted into the livers. Appropriate controls were used to determine whether the observed contrast could have been due to dead cells or free particles, and the results confirmed that the contrast was due to disperse, single cells. Detecting single cells in vivo opens the door to a number of experiments, such as monitoring rare cellular events, assessing the kinetics of stem cell homing, and achieving early detection of metastases.     

供者表达活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体对造血干细胞移植预后的影响

目的 观察供者表达活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体（aKIR）对受者造血干细胞移植（HSCT）预后的影响。方法 1996年至2001年共行亲缘性人类白细胞抗原（HLA）全相合骨髓移植59例，以序列特异性引物多聚酶链反应法（SSP-PCR）检测供者aKIR的表型。分析供者表达aKIR对受者移植后病毒、细菌和真菌感染及出血、复发、存活情况的影响。结果 供者表达aKIR与受者移植后出血、病毒及细菌感染发生的概率无明显相关性；当供者表达KIR3DS1表型时，发生真菌感染概率增高（X^4．804，P=0．028）。供者表达aKIR对受者HSCT后存活率和白血病复发率均无明显影响。结论 亲缘性HLA全相合HSCT中，供者表达aKIR并不能改善受者的移植效果。