部分型母源性１６单亲二体型与均称型胎儿生长受限

【目的】应用人类全基因组单核苷酸多态性芯片（ＳＮＰ ａｒｒａｙ）探讨特发性均称型胎儿生长受限（Ｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ＦＧＲ）的病因。【方法】对血清学筛查唐氏综合征高风险且系列超声检查发现２０周前已出现胎儿生长受限征象的３６例孕妇行羊水胎儿细胞Ｇ显带染色体核型分析,其中核型正常的３４例孕妇,应用人类全基因组ＳＮＰａｒｒａｙ对羊水中的胎儿细胞及父母双方的外周血细胞进行遗传学分析。 【结果】 发现２例部分型母源性１６单亲二体型（ｍＵＰＤ １６）,１例位点为１６ｐ１２．２－ｐ１３．３,长度约为２１．０Ｍｂｐ和１６ｑ２４．１－２４．３,长度约为４．１ Ｍｂｐ;另１例位点为１６ｑ２１－ｑ２４．３,长度约为２４．１ Ｍｂｐ。【结论】 部分型母源性１６单亲二体型可能与均称型胎儿生长受限的发生有关,影响胎儿生长发育的基因有可能定位于１６ｑ２４。     

控制性卵巢刺激对多囊卵巢综合征患者和正常排卵妇女卵源性因子表达的差异

【目的】 研究控制性卵巢刺激对多囊卵巢综合征（ＰＣＯＳ）患者和正常排卵妇女卵母细胞和颗粒细胞中卵源性因子（生长分化因子ＧＤＦ９和骨形成蛋白ＢＭＰ１５）表达的影响及两组妇女之间的表达差异。【方法】 收集ＰＣＯＳ患者和正常排卵的不孕妇女共９７例,分为４组：２２例未经历卵巢刺激（未刺激－ＰＣＯＳ组）和１８例经历卵巢刺激（刺激－ＰＣＯＳ组）的ＰＣＯＳ患者,２８例未经历卵巢刺激（未刺激－对照组）和２９例经历卵巢刺激（刺激－对照组）的正常排卵妇女。收集４组患者的卵母细胞和颗粒细胞,采用巢式实时定量ＰＣＲ的方法检测两种细胞中ＧＤＦ９和ＢＭＰ１５ ｍＲＮＡ的表达水平。【结果】 在正常排卵妇女的卵母细胞中,ＧＤＦ９和ＢＭＰ１５ ｍＲＮＡ的表达水平在未刺激组分别为２４．７９ （２．９６－１０９．７３）和０．９３ （０．０５－３．６５）,在卵巢刺激组分别为１４９．９４ （５５．３８－３８７．９３）和４１．６５ （６．５０－９６．１１）,两种因子在卵巢刺激组的表达水平均显著高于未刺激组,差异有统计学意义（Ｐ ＜ ０．０５）。在正常排卵妇女的颗粒细胞中,ＧＤＦ９和ＢＭＰ１５ ｍＲＮＡ的表达水平在未刺激组分别为０．０２ （０．００９－０．２１）和０．００８（０．００１－０．１６）,在卵巢刺激组分别为０．１０ （０．０６, ０．１８）和０．０２（０．０１－０．０３）,两种因子在卵巢刺激组的表达水平均显著高于未刺激组,差异有统计学意义（Ｐ ＜ ０．０５）。在ＰＣＯＳ患者的卵母细胞中,ＧＤＦ９和ＢＭＰ１５ ｍＲＮＡ的表达水平在未刺激组分别为２３．８３ （２．２９－６５．７２）和０．０９ （０．０５－２９．３２）,在卵巢刺激组分别为４４．８１ （５．９３－４８９．１９）和０．１０ （０．０５－１１．４４）,两种因子的表达在未刺激组和卵巢刺激组均没有差异（Ｐ ＞ ０．０５）。在ＰＣＯＳ患者的颗粒细胞中,ＧＤＦ９和ＢＭＰ１５ ｍＲＮＡ的表达水平在未刺激组分别为０．１１ （０．０６, ０．１６）和０．０００ ００５（０．０００ ００４ ８－０．０００ ００９）,在卵巢刺激组分别为０．０５ （０．０３, ０．０９）和０．０２（０．００７－０．０３）, ＧＤＦ９ ｍＲＮＡ的表达在卵巢刺激组显著低于未刺激组,而ＢＭＰ１５ ｍＲＮＡ的表达在卵巢刺激组显著高于未刺激组,差异均有统计学意义（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 控制性卵巢刺激可以促进正常排卵妇女卵母细胞和颗粒细胞中ＧＤＦ９和ＢＭＰ１５的表达,但是对ＰＣＯＳ患者卵母细胞中两种因子的表达没有促进作用,提示ＰＣＯＳ患者卵母细胞中卵源性因子的表达对卵巢刺激的反应性受到抑制,可能影响卵泡发育和卵母细胞成熟,从而导致卵母细胞质量低下。     

美托咪啶预处理对大鼠自体原位肝移植术后肠道损伤的影响

【目的】 建立大鼠自体原位肝移植模型,探讨右美托咪啶（Ｄｅｘ）及其拮抗剂阿替美唑（Ａｔｉｐ）预处理对大鼠自体原位肝移植术后肠道结构与功能改变的影响。【方法】４８只成年ＳＤ大鼠,随机分为假手术组（Ｓ组）、模型组（Ｍ组）、低剂量Ｄｅｘ预处理组（Ｄ１组）,高剂量Ｄｅｘ预处理组（Ｄ２组）,低剂量Ａｔｉｐ＋低剂量Ｄｅｘ预处理组（Ａ１组）,高剂量Ａｔｉｐ＋高剂量Ｄｅｘ预处理组（Ａ２组）。术后８ ｈ留取末端回肠与动脉血,观察肠黏膜病理改变并行Ｃｈｉｕ’ｓ评分,ＥＬＩＳＡ法检测血清内毒素（ＬＰＳ）水平与二胺氧化酶（ＤＡＯ）活性,分光光度法测定肠道ＭＤＡ含量与ＳＯＤ活力,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测肠上皮紧密连接Ｏｃｃｌｕｄｉｎ与ＺＯ－１蛋白的表达。【结果】Ｍ组肠道病理损伤严重,ＬＰＳ与ＭＤＡ水平升高,紧密连接破坏;Ｄｅｘ预处理后,Ｄ２组较Ｄ１组肠道保护效应明显,ＬＰＳ与ＭＤＡ水平降低,ＳＯＤ活力增强;相反,Ａｔｉｐ＋ Ｄｅｘ预处理后,Ｄｅｘ肠道保护效应显著减弱。【结论】 Ｄｅｘ预处理呈剂量依赖性地减轻大鼠自体原位肝移植术后的肠道损伤,可能与其抗炎、抗氧化作用密切相关。     

激活核因子Ｅ２相关因子２信号通路减轻高糖诱导足细胞的凋亡

【目的】 探讨激活核因子Ｅ２相关因子２（Ｎｒｆ２）通路能否减轻高糖诱导足细胞的凋亡。【方法】体外培养小鼠足细胞,分为５组：对照组、高渗组、高糖组、高糖＋叔丁基对苯二酚（ ｔＢＨＱ）,高糖＋Ｎ－乙酰半胱氨酸（ＮＡＣ）。流式细胞仪检测细胞内活性氧和凋亡;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 及ｒｅａｌ ｔｉｍｅ－ ＰＣＲ检测Ｎｒｆ２、醌氧化还原酶１（ＮＱＯ１）,血红素加氧酶（ＨＯ－１）的表达;检测足细胞丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽（ＧＳＨ）及过氧化氢酶（ＣＡＴ）。【结果】 高糖组足细胞凋亡率、活性氧及细胞ＭＤＡ高于对照组（Ｐ ＜ ０．０５）,而该组足细胞ＳＯＤ、ＧＳＨ及ＣＡＴ低于对照组（Ｐ ＜ ０．０５）;高糖＋ＮＡＣ组的足细胞凋亡率、活性氧及细胞内丙二醛低于高糖组（Ｐ ＜ ０．０５）;高糖＋ｔＢＨＱ组足细胞的总Ｎｒｆ２及核Ｎｒｆ２、 ＨＯ－１、ＮＱＯ１的表达高于高糖组（Ｐ ＜ ０．０５）,细胞内ＳＯＤ、ＧＳＨ及ＣＡＴ高于高糖组（Ｐ ＜ ０．０５）,高糖＋ｔＢＨＱ组足细胞的凋亡率、活性氧及细胞内丙二醛低于高糖组（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 激活 Ｎｒｆ２通路降低高糖诱导足细胞的氧化应激,减轻足细胞凋亡。     

Ｍｉｒ－１６对人肺腺癌Ａ５４９细胞增殖及凋亡的影响

【目的】 探讨基因Ｍｉｒ－１６在肺腺癌细胞株Ａ５４９中的表达状况以及Ｍｉｒ－１６对Ａ５４９细胞生物学行为的影响。【方法】 Ｍｉｒ－１６在肺腺癌细胞中的含量采用实时荧光定量ＰＣＲ的检测,后将Ｍｉｒ－１６转染至Ａ５４９细胞,用ＭＴＳ、流式细胞仪检测细胞的增殖、凋亡及细胞周期。构建野生型及突变型ＷＩＰ１３’－ＵＴＲ的荧光素酶报告载体,检测荧光素酶的相对活性,验证在肺腺癌中ＷＩＰ１是Ｍｉｒ－１６的作用靶点。【结果】 在人肺腺癌Ａ５４９细胞中Ｍｉｒ－１６呈低表达;将Ｍｉｒ－１６转染至Ａ５４９细胞后表达上升,并可促进Ａ５４９细胞的增值率明显降低;早期凋亡的细胞比例增加;处于Ｇ１期的细胞比例明显增加,处于Ｓ期的细胞比例明显减少。与各对照组相比,Ｍｉｒ－１６显著抑制野生型ＷＩＰ１－３’ＵＴＲ表达载体的荧光素酶活性。【结论】Ｍｉｒ－１６在肺腺癌细胞中低表达,并抑制肺腺癌细胞的增殖及促进细胞的早期凋亡,有望成为肺腺癌靶向治疗的新靶点。     

慢性阻塞性肺疾病加重期和稳定期Ｔｈ１７和Ｔｒｅｇ细胞的表达

摘 要： 【目的】 探讨慢性阻塞性肺疾病（ ＣＯＰＤ） 急性加重期、稳定期患者和肺功能正常吸烟者外周血中Ｔｈ１７ 、Ｔｒｅｇ细胞的表达。【方法】 选取慢性阻塞性肺疾病急性加重患者２８例、慢性阻塞性肺疾病稳定期患者２２例、吸烟肺功能正常者（对照组）２２例为研究对象。流式细胞术检测外周血中Ｔｈ１７细胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ Ｔｒｅｇ细胞的比例,ＥＬＩＳＡ 检测诱导痰ＩＬ－１７、ＴＧＦ－β１的水平。【结果】 急性加重期ＣＯＰＤ组的外周血Ｔｈ１７比例（％）较稳定期ＣＯＰＤ组增高（２．９２ ± ０．１６ ｖｓ １．２５±０．１４,Ｐ ＜ ０．００１）、痰液ＩＬ－１７水平（ｎｇ／Ｌ）较稳定期ＣＯＰＤ组增高（８２．３３ ± １７．３８ ｖｓ １２．６４ ± ２．７４,Ｐ ＜ ０．００１）,外周血Ｔｒｅｇ比例（％）低于稳定期ＣＯＰＤ组（８．５２ ± ０．４７ ｖｓ １１．４５ ± ０．７８,Ｐ ＜ ０．００１）。急性加重期ＣＯＰＤ组、稳定期ＣＯＰＤ组外周血中Ｔｈ１７比例与Ｔｒｅｇ比例均呈负相关（ｒ分别为－０．７２３和－０．６７４,Ｐ均＜ ０．００１）。【结论】 急性加重期ＣＯＰＤ的气道局部和全身的免疫反应以促炎的“Ｔｈ１７反应”占优势,稳定期ＣＯＰＤ以“Ｔｒｅｇ反应”占优势。     

眼前段生物学结构与青光眼激发试验的关系

【目的】 探讨房角狭窄者眼前段结构参数与青光眼暗室激发试验阳性的相关关系。【方法】 回顾性分析２６０例房角狭窄者的眼前段生物学参数和青光眼暗室激发试验结果。所有患者应用超声生物显微镜定量测量眼前段生物学参数,包括前房深度（ＡＣＤ）、瞳孔直径（ＰＤ）、晶状体矢高（ＬＶ）、周边虹膜厚度（ＩＴ）、虹膜膨隆度（ＩＣ）、房角开放距离（ＡＯＤ）、小梁网－睫状突夹角（ＴＣＰＡ）和房角同位关闭的象限数（ＮＰＡＣ）;所有患者均完成青光眼暗室激发试验。比较暗室激发试验阳性者与阴者间的眼前段结构差异,分析青光眼暗室激发试验中眼压升高的相关因素。【结果】 房角狭窄者青光眼暗室激发试验的阳性率为２７．３％;暗室试验中眼压升高的幅度与ＡＯＤ（ｒ ＝ －０．２４９,Ｐ ＜ ０．００１）、ＩＣ（ｒ ＝ －０．１２５,Ｐ ＝ ０．０４３）负相关,与 ＩＴ（ｒ ＝ ０．１８８,Ｐ ＝ ０．００２）、ＮＰＡＣ（ｒ ＝ ０．３０５,Ｐ ＜ ０．００１）正相关;暗室试验阳性者的ＩＴ和ＮＰＡＣ大于阴性者,ＡＯＤ小于阴性者。【结论】房角和虹膜参数与青光眼暗室激发试验结果相关,房角狭窄、房角同位关闭、厚虹膜是暗室激发试验阳性的危险因素。     

神经干细胞的单层培养及分化过程中ＨＥＳ１和ＭＡＳＨ１的表达变化

摘 要： 【目的】 建立神经干细胞（ＮＳＣ）体外培养方案,使ＮＳＣ的体外可以得到增殖和分化,并检测ＮＳＣ分化过程中ＨＥＳ１和ＭＡＳＨ１的表达变化。【方法】无菌条件下取ＳＤ大鼠胚胎端脑,无血清悬浮培养,形成Ｐ２代神经球后,将神经球消化成单细胞,分为神经球悬浮培养和单层贴壁培养,并对两种不同培养方式下的ＮＳＣ进行干性鉴定和分化能力鉴定。用不同浓度（２０、４０、８０ μｇ／Ｌ）的脑源性神经生长因子（ＢＤＮＦ）诱导ＮＳＣ分化,选出最合适的浓度。用ＢＤＮＦ最佳诱导浓度诱导ＮＳＣ分化,Ｑ－ＰＣＲ检测分化过程中ＨＥＳ１和ＭＡＳＨ１的表达变化。【结果】神经球悬浮培养和单层贴壁培养均可得到的ＮＳＣ;分化３ ｄ后,在不加入任何诱导因素的情况下,单层贴壁培养的ＮＳＣ能更高比例［（１９．５５ ± １．０９）％］地分化为β－ｔｕｂｕｌｉｎ Ⅲ阳性细胞;ＢＤＮＦ ４０ μｇ／Ｌ能诱导出更多的β－ｔｕｂｕｌｉｎ Ⅲ阳性细胞［（３４．１７ ± ０．６０）％］;在分化１、３ 和７ ｄ时,Ｑ－ＯＣＲ结果表明ＭＡＳＨ１在ＢＤＮＦ诱导下组较ＮＳＣ和对照组表达水平明显上升。【结论】单层贴壁培养的神经干细胞更利于分化为神经元,ＢＤＮＦ为４０ μｇ／Ｌ时能诱导出更高比例的神经元,ＢＤＮＦ可以诱导ＭＡＳＨ１在ＮＳＣ分化过程中表达明显上升。     

基于ＤＥＮＶ－ｐｒＭ／Ｅ基因构建ＤＥＮＶ－ＶＬＰ及其免疫学特性

摘 要：【目的】 构建和表达登革病毒４型病毒样颗粒,初步研究其免疫学特性。【方法】 用ＲＴ－ＰＣＲ法扩增ＤＥＮＶ４－ｐｒＭ／Ｅ基因,构建重组质粒ｐＧＡＰＺ－ｓｐｒＭ／Ｅ－Ｄ４,转化Ｘ３３酵母菌株,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定目的蛋白表达。切片电镜检测病毒样颗粒,蔗糖密度梯度离心纯化。免疫三组Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠,每组１５只。采用间接ＥＬＩＳＡ检测抗原特异性抗体,间接免疫荧光法检测免疫血清与天然病毒粒子的结合,流式细胞术分析小鼠脾淋巴细胞表型,酶联免疫斑点法（ＥＬＩＳＰＯＴ）检测脾分泌ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α和ＩＬ－１０的细胞。【结果】重组质粒在酵母中以病毒样颗粒形式表达,为直径２０ ～ ３０ ｎｍ的球形颗粒,ＶＬＰ免疫组刺激小鼠产生抗体与灭活病毒组相似,流式及ＥＬＩＳＰＯＴ结果提示ＤＥＮＶ４－ＶＬＰ与灭活病毒组相似,用登革病毒抗原刺激后,分泌ＩＦＮ－γ,ＴＮＦ－α的细胞数目明显增加,各组分泌ＩＬ－１０细胞数目的整体水平均不高。【结论】应用毕赤酵母表达系统成功表达获得了ＤＥＮＶ４－ＶＬＰ,具有良好的免疫原性,可诱导Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠产生有效的体液免疫应答,并能诱导Ｔｈ１型免疫应答而诱导Ｔｈ２型免疫应答较弱。