福建产舟山眼镜蛇毒细胞毒素的快速分离纯化及鉴定

目的 从舟山眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素(CTX)，并鉴定其理化性质。方法 采用SP—Sephadex C-25阳离子交换色谱及Sephasil Peptide C18反相高效液相色谱法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化CTX，SDS—PAGE(Tris—Tricine系统)鉴定纯度，Edman降解法测定N端氨基酸序列。结果 粗毒经阳离子交换色谱，得到14个蛋白峰，其中第X～XⅢ峰具CTX活性；再分别经反相色谱纯化，得到4个CTX．总得率为32.48％；SDS—PAGE显示为均一蛋白，分子量依次为：7．28，7．33，7．24和7．38kD；测定它们N端20个氨基酸序列。结论 采用阳离子交换和反相高效液相色谱可快速、高效地从眼镜蛇毒中获得4个CTX纯品。     

A型肉毒毒素多表位串联体的设计、表达、纯化及鉴定

目的:设计、表达两个A型肉毒毒素多表位串联体.方法:从文献报道的A型肉毒毒素(botulinum neurotoxin type A,BoNT/A)的表位及生物信息学方法预测得到的B细胞表位中遴选表位,并加入适当的辅助性元件,设计多表位串联体A、B.对其基因进行优化后,经重叠PCR方法合成串联体A、B的全长基因.分别插入原核表达载体pQE-30,再转化E.coli M15[pREP4]感受态细胞中进行诱导表达,以金属螯合亲和层析法纯化重组蛋白,并进行鉴定.结果与结论:成功设计并构建了两个多表位串联体A、B,并在E.coli中以包涵体形式获得高效表达.Ni-NTA法纯化后分别获得纯度大于92.2%、99%的重组串联体A、B蛋白,并经透析复性法复性.Western印迹和间接ELISA显示纯化、复性后的重组蛋白与抗天然BoNT/A马血清有特异性结合反应.     

FKBP6基因278C/A单核苷酸多态性与原发无精症相关研究

目的对FKBP6基因第3、4外显子进行突变和多态性筛查,研究第3外显子278C/A位点及第2内含子C/T位点(rs7797242)在无精症患者和正常男性中的多态性,初步探讨与原发无精症的相关性。方法采用变性高效液相色谱和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,对第3、4外显子进行突变和多态性筛查,对177例无精症患者和231名正常男性的278C/A和C/T(rs7797242)多态性进行基因分型。结果278C和278A等位基因频率符合Hardy-Weinberg平衡。无精症患者278A显著低于正常对照,差异有统计学意义(P<0.05)。C/T多态性在两组中均未检出,第3、4外显子未筛查到新的变异。结论278A等位基因可能与原发无精症相关。C/T(rs7797242)及370G/A,430G/C,467T/C,468G/A在中国人群中非常罕见。     

高效液相色谱法测定不同部位两面针原植物中L-芝麻脂素和L-细辛脂素的含量

目的　建立两面针原植物中L-芝麻脂素和L-细辛脂素的测定方法,并测定两面针不同部位两者的含量。方法　采用高效液相色谱法（HPLC）,色谱柱为HYPERSIL　BDS　C18,流动相为乙腈:水（50:50）,检测波长287nm。结果　L-芝麻脂素和L-细辛脂素的平均回收率和相对标准差分别为100.13％、1.61％和101.24％、1.46％。结论　此法可用于两面针的质量控制。两面针原植物根部的被测成分含量最高。     

色谱新技术在药物分析上的应用

<正> 薄层层析法具有设备简单、成本较低、操作方便、分析速度快等优点。TLC还可作为HPLC选择色谱体系,预测分离的先导技术。近年来,TLC技术获得了全面发展,在展开技术方面,出现了连续展开,自动展开,自动多步程序展开等方法,扩大了TLC技术在定性定量药物     

高效液相色谱法测定肾病Ⅰ号颗粒中牛蒡苷含量

目的:建立肾病Ⅰ号颗粒中牛蒡苷的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为ProntosilEurobond C18柱(4.6mm×125mm,5μm)流动相为甲醇-水(1:1.1),检测波长为280 nm.结果:牛蒡苷线性范围为2.10～10.51μg(r=0.999 9),平均回收率为99.28%,RSD=0.32%(n=6).结论:高效液相色谱法简便、准确,重现性好,可用于肾病Ⅰ号颗粒的质量控制.     

高效液相色谱法测定复方万年青胶囊中大黄素

目的建立复方万年青胶囊中大黄素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱(HPLC)法,以Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm×5μm)为分析柱,甲醇-0.1%磷酸溶液(80∶20)为流动相,流速为1.0 ml/min,柱温为35℃,检测波长254 nm。结果大黄素在0.039~0.355μg范围内呈良好线性关系,r=1.0000。平均回收率为99.3%,RSD=0.4%(n=5)。结论HPLC法是一种简便、准确、可靠的分析方法。