不同浓度骨碎补提取液对体外培养人牙髓细胞增殖及超微结构的影响

背景:体外培养人牙髓细胞难度很大,国内外已有生长因子对体外培养牙髓细胞增殖分化作用的研究,而中药骨碎补对体外培养牙髓细胞的影响,经作者检索未见报道.目的:观察不同浓度骨碎补提取液对体外培养的人牙髓细胞增殖分化的影响.设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-03/2007-05在河北医科大学第四医院科研中心完成.材料:人牙髓细胞组织选自河北医科大学第四医院口腔科要求正畸治疗需拔除的健康阻生智齿着,取得所有供者对标本采集的知情同意.产地云南的骨碎补购自河北医科大学第四医院中药房.方法:采用组织块法体外培养人牙髓细胞.水提醇沉法提取骨碎补有效成分,以每1 mL药液含生药1 g加入积体分数为0.02的胎牛血清培养液,稀释成质量浓度为10,50,100,500,1 000 mg/L.分别以此培养液作用于体外培养的人牙髓细胞,以不加骨碎补提取液培养的细胞做对照.主要观察指标:①人牙髓细胞原代培养和来源鉴定.②四甲基偶氮唑盐法检测各质量浓度组骨碎补对人牙髓细胞增殖的作用.③免疫组织化学法观察各浓度组骨碎补对人牙髓细胞纤维连接蛋白的表达.④扫描电镜和透射电镜下观察骨碎补对人牙髓细胞超微结构的影响.结果:原代培养的人牙髓细胞呈梭形或多角形.各浓度骨碎补均对体外培养的人牙髓细胞有促增殖作用,其中以100 mg/L浓度组促增殖作用最明显,可诱导牙髓细胞合成、分泌纤维连接蛋白.电镜下实验组人牙髓细胞表面枝状嵴丰富,细胞周围可见细胞外基质,细胞浆内有丰富粗面内质网和游离的核糖体,核内常染色质均匀分散,异染色质少.结论:含1 00 mg/L骨碎补培养液对体外培养的人牙髓细胞有明显的促增殖作用.     

中药双黄补对体外培养人牙周膜细胞增殖活性的影响

背景:目前的研究大多为单味中药或单一中药成分对体外培养人牙周膜细胞的影响,而中药组方提取液对体外培养细胞影响的研究较少.目的:观察中药双黄补对体外培养的人牙周膜细胞增殖活性的影响.设计、时间及地点:对比观察实验,于2008-11/2009-02在河北医科大学第四医院科研中心完成.材料:人牙周膜细胞组织选自河北医科大学第四医院口腔科要求手术拔除的埋伏多生牙者.黄连、黄芩、骨碎补均购自河北医科大学第四医院中药房.方法:采用组织块法体外培养人牙周膜细胞.水提醇沉法制各双黄补提取液.以每1 Ml药液含生药1 g加入体积分数20%的胎牛血清培养液,稀释成质量浓度为10,25,50,100,150,200,250,500,750,1 000 mg/L,分别作用于体外培养的人牙周膜细胞,以不加双黄补提取液的培养细胞为对照.主要观察指标:采用四甲基偶氮唑蓝法测定培养细胞增殖活性的变化,应用流式细胞术检测100 mg/L的双黄补提取液对牙周膜细胞周期的变化和对成纤维细胞生长因子18水平的影响.结果:双黄补对人牙周膜细胞的增殖活性的影响存在质量浓度和时间效应,各质量浓度双黄补均能促进体外培养人牙周膜细胞的增殖活性,其中以100 mg/L质量浓度促增殖活性作用最明显(P<0.01),相同质量浓度不同作用时间对细胞促增殖活性作用也不同,以48 h作用最明显(P<0.05).与对照组相比,100 mg/L的双黄补促进牙周膜细胞成纤维细胞生长因子18水平增高,S期和G2M期细胞数目增多,在48 h最明显.结论:中药双黄补可增强人牙周膜细胞的增殖活性,具有明显的浓度效应和时间效应.     

骨碎补对牙周炎大鼠正畸牙移动保持阶段RANKL表达影响的研究

目的 研究牙周炎的大鼠牙齿移动保持阶段,中药骨碎补对牙槽骨成骨作用以及对RANKL表达影响的研究。方法 将45只雄性Wister大鼠建立牙周炎实验模型。按照随机数字表法将大鼠分成9个组,每组5只,进行标记。其中1组设为空白组,4组对照组,4组实验组。空白组拉簧牵拉上颌左侧第一磨牙向近中移动,牵拉21 d后分别在保持3,7,14,21 d处死;实验组和对照组分别建立牙移动模型,实验组在保持阶段的3,7,14,21 d的前1天灌服骨碎补水煎液0.9 g/kg, 1次/d;对照组同样时间灌服等量0.9%氯化钠溶液,1次/d。HE染色观察成骨细胞和破骨细胞。免疫组织化学切片观察RANKL因子表达量。结果 实验组的RANKL表达量在初期先增加,从第7 d开始RANKL表达量开始逐渐降低。同一节点对比,实验组RANKL表达量低于对照组。实验组在保持第21 d RANKL表达量非常少,牙周膜处于稳定状态,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 骨碎补水煎液可以促进成骨,稳定牙槽骨及牙周膜的改建,降低RANKL的表达。     

骨碎补治疗骨关节炎的网络药理学研究

目的基于网络药理学和生物信息学研究骨碎补治疗骨关节炎(OA)可能的分子机制。方法通过中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)对骨碎补可能的生物活性成分和靶点进行筛选和预测,通过TTD等5个数据库挖掘骨关节炎相关的作用靶点,采用Clue Go分析骨碎补治疗OA可能的分子机制。结果从TCMSP检索出71个骨碎补相关成分,根据口服生物利用度(OB)和药物相似性(DL)值筛选获得生物活性成分18个,同时预测出92个可能的作用靶点;通过相关数据库共检索到与OA密切相关的靶点168个;拓扑分析筛选出骨碎补治疗OA的99个关键靶点;Clue GO分析显示,骨碎补治疗OA的关键靶点主要涉及细胞周期、炎症、感染、癌症相关等31条信号通路。结论骨碎补治疗OA具有多系统、多成分、多靶点的特点;其可能的作用机制包括直接参与骨重建的细胞增殖、凋亡及分化,调节成骨、破骨代谢平衡,以及调节免疫、炎症反应等干预和影响骨微环境以达到控制疾病发生发展的目的,与目前治疗OA的作用机制相符合。     

骨碎补总黄酮抗炎作用的实验研究

目的观察骨碎补总黄酮对急性炎症、炎症早期的毛细血管渗透性增高、棉球诱发肉芽肿的作用.方法采用二甲苯所致小鼠耳廓肿胀试验、醋酸所致小鼠毛细血管渗透试验及大鼠蛋清足跖肿胀试验、大鼠棉球肉芽肿增生试验,观察骨碎补总黄酮的抗炎作用.结果骨碎补总黄酮对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有一定的抑制作作用,和对照组比较有明显差异(P<0.01、P<0.05);对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管扩张和渗透性增高,有拮抗作用,大剂量组和对照组比较有明显差异(P<0.05);对蛋清造成大鼠足跖肿胀、棉球诱发的肉芽肿有抑制作用,和对照组比较有显著差异(P<0.01).结论骨碎补总黄酮具有抗炎作用,并能抑制毛细血管渗透性的增高.     

骨碎补对实验性骨性关节炎的治疗作用

用形态学观察骨碎补对160只骨性关节炎模型大鼠的治疗作用。结果表明:骨碎补具有一定的改善软骨细胞的功能、推迟细胞退行性变、降低骨关节病病变率的治疗作用。     

骨碎补注射液促进钙磷沉积的初步研究

通过组织培养发现骨碎补注射液明显促进鸡胚骨原基的生长和钙化,用药组碱性磷酸酶的活性和氨基已糖的含量分别为对照组的155.1±19.7％和113.7±6.3％,用药组钙、磷含量分别为对照组的119.9±8.8％和126.4±8.0％。但骨碎补明显抑制胶原的合成,用药组羟脯氨酸的含量仅为对照组的73.6±4.8％。在有足量维生素C存在的情况下,骨碎补促进钙磷沉积的作用尤为明显。     

烫制对骨碎补中二氢黄酮甙含量和溶出率的影响

骨碎补经砂烫后便于净制,但对于所含的有效成分是否有影响,未见报道。本文以陈皮甙为对照品,应用聚酰胺柱层析一紫外分光光度法,分析了骨碎补烫制前后二氢黄酮甙的含量和溶出率,结果对所含二氢黄酮甙含量影响不大,却能明显提高溶出率。一、材料及仪器材料骨碎补购自济南药材站,经鉴定为