迷迭香酸对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用研究

目的：研究迷迭香酸对大鼠乳鼠原代心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。 方法：体外培养大鼠原代心肌细胞,复制心肌细胞缺氧复氧损伤模型,分别观察细胞活力和LDH漏出的改变,采用化学发光法检测细胞ATP含量变化,利用荧光探针技术检测细胞内ROS产生的变化,采用流式细胞术及Western blot法进一步考察迷迭香酸对心肌细胞凋亡,cleaved-caspase 3,Akt和p-Akt蛋白表达的影响。 结果：实验结果显示,25,50,100 mg·L^-1迷迭香酸均能显著抑制缺氧复氧导致的细胞活力下降,LDH漏出及ROS的过度产生,并能维持细胞内ATP水平;50,100 mg·L^-1迷迭香酸显著抑制缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡和下调cleaved-caspase 3 蛋白表达,并且100 mg·L^-1迷迭香酸能够明显上调p-Akt 蛋白的表达。 结论：迷迭香酸具有显著的抗心肌细胞缺氧复氧损伤作用,能够改善心肌细胞能量代谢和减少细胞凋亡,其保护作用可能是通过激活Akt通路实现的。     

迷迭香酸对脂多糖诱导小鼠神经炎症的影响

目的探究迷迭香酸(RA)对脂多糖诱导小鼠神经炎症的影响。方法向C57BL/6雄性小鼠侧脑室注射脂多糖(LPS)建立神经炎症小鼠模型,在造模前30 min通过腹腔注射RA给药,通过HE染色观察小鼠大脑神经细胞形态的改变,应用免疫荧光及RT-qPCR检测小鼠大脑中iNOS、CD14和CD44等炎症相关基因的表达。并通过LPS刺激小胶质细胞BV2的体外炎症模型检测RA干预对iNOS、CD14和CD44等炎症基因表达的影响。结果经LPS刺激后,HE染色结果显示LPS组小鼠大脑海马区神经细胞排列稀疏散乱,少量细胞核结构不清晰,呈不规则状,有固缩情况,而RA给药组能够明显改善LPS引起的改变。免疫荧光结果显示相对于LPS组,RA给药组中小鼠大脑中iNOS的表达明显降低;同时RA给药组中小鼠大脑中CD14、CD44、MCP-1与MIP-1α等基因mRNA表达明显降低。细胞实验结果显示,经LPS诱导的细胞炎症基因CD14、CD44及NO、iNOS的表达均明显提高,这些指标在RA的干预下均明显降低。结论迷迭香酸能够改善LPS诱导的神经炎症。     

迷迭香酸通过MAPK/ERK信号通路对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨迷迭香酸通过丝裂原激活的蛋白激酶/胞外信号调节的蛋白激酶（MAPK/ERK）信号通路对结肠癌细胞增殖凋亡的影响。［方法］ 取对数生长期LS174T细胞,加入迷迭香酸（0、25、50和100μmol/L）处理24、48 和72h后,CCK-8法检测迷迭香酸对细胞增殖活性的影响。以100μmol/L迷迭香酸处理细胞,24、48 和72h后,采用流式细胞仪检测迷迭香酸对细胞周期和细胞凋亡率的影响;采用蛋白质印迹法检测细胞中Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3蛋白的表达及ERK1/2磷酸化水平。［结果］ 迷迭香酸对LS174T细胞呈时间浓度依赖性抑制细胞增殖;100μmol/L迷迭香酸处理LS174T细胞不同时间后,与对照组相比,迷迭香酸组细胞中S期和G2/M期细胞所占比例明显降低,G0/G1期比例显著升高,但组间时间效应不显著（P>0.05）;而Bcl-2蛋白表达、ERK1/2磷酸化水平明显降低,细胞凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达量显著增强,均表现出明显的时效关系（P<0.05）。［结论］ 迷迭香酸能够抑制结肠癌LS174T细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制MAPK/ERK信号通路有关。     

黄芪-丹参煎液HPLC指纹图谱及多指标定量测定研究

目的建立黄芪丹参煎液的HPLC指纹图谱及多指标成分定量分析方法,为黄芪丹参煎液质量控制提供科学依据。方法采用HPLC-UV法,ODS Hypersil DIM色谱柱(250 mm×4.6 mm,3μm);以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱,柱温25℃,体积流量0.8 mL/min,进样量20μL,检测波长254 nm,建立HPLC指纹图谱;采用LC-MS法,建立黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅱ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、丹酚酸B、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸11个成分含量测定方法,并采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)对测定结果进行识别。结果 10批黄芪丹参煎液的指纹图谱中有12个共有峰,通过与化学对照品比对,指认出7个色谱峰,分别为1号峰咖啡酸、3号峰毛蕊异黄酮葡萄糖苷、6号峰迷迭香酸、8号峰紫草酸、9号峰毛蕊异黄酮、10号峰丹酚酸B、11号峰芒柄花苷,10批样品的相似度≥0.995。黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅱ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、丹酚酸B、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸线性关系良好,r2值均大于0.995;回收率为89.3%～110.9%。通过PCA可将10批黄芪丹参煎液分成2类,并可看出不同产地、不同批次药材之间的质量存在差异,进一步采用OPLS-DA筛选出导致质量差异的两个物质丹酚酸B和芒柄花苷。结论根据黄芪丹参煎液指纹图谱的建立,结合质谱进行定量,能够为其质量控制提供更可靠的参考。     

响应面法优化紫苏子中迷迭香酸超声提取工艺的研究

目的:优选紫苏子中迷迭香酸的超声提取工艺.方法:在单因素试验基础上,以超声功率、乙醇浓度、提取时间为考察因素,以迷迭香酸提取率为考察指标,利用Design-Expert 7.0进行三因素三水平响应面分析优选工艺条件.结果:最佳提取工艺为:超声功率380 W、乙醇浓度60%、提取时间85 min,模型相关系数R2=0.9602,该条件下迷迭香酸平均提取率为0.59%.结论:该提取工艺可为进一步开发紫苏子药用价值提供依据.     

一标多测在注射用丹参多酚酸盐品质评价中的应用研究

中药注射剂优质标准的建立有助于提升产品的品质,通过建立整体质量控制方法,能够反映中药注射剂的内在品质。该文采用一标多测方法,建立了同时测定注射用丹参多酚酸盐中间体和制剂中丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸的多成分定量控制方法,以评价产品品质。采用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱,以0.1%磷酸-乙腈为流动相,等度洗脱,流速1 mL·min^-1,柱温20℃,检测波长286 nm,以丹酚酸B为内参物,建立其与迷迭香酸、紫草酸之间的相对校正因子(fs/i)。在建立的QAMS方法中,丹酚酸B与迷迭香酸、紫草酸的fs/i分别为0.58和0.94。采用该方法涵盖分析了注射用丹参多酚酸盐中约80%~85%的药效物质;通过分析连续4年15批注射用丹参多酚酸盐中间体和18批注射用丹参多酚酸盐制剂中丹酚酸类成分含量,发现注射用丹参多酚酸盐中间体和制剂的丹酚酸B质量分数分别为77.1%~81.5%,70.5%~80.1%,迷迭香酸和紫草酸二者总质量分数约为6%;其中迷迭香酸与紫草酸的比例分别为(3.4∶1~10∶1)和(2.5∶1~5∶1),制剂中二者比例稳定性明显优于中间体。通过建立一标多测方法,为注射用丹参多酚酸盐品质评价提供了的切实可行的整体质量评价方法。     

迷迭香酸对自发AD小鼠学习记忆的影响及基于海马神经元突触功能的机理研究

目的:评价迷迭香酸(Rosmarinic Acid, RA)灌胃给予对自发阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)小鼠学习记忆的影响及基于海马神经元突触功能的可能机理。方法:迷迭香酸以100、200、400 mg/kg灌胃给予App-/ps1-自发AD小鼠连续30 d;采用Morris水迷宫试验评估迷迭香酸对AD小鼠学习记忆的影响;采用脑片膜片钳研究迷迭香酸100μmol/L对脑自发微小兴奋性突触后电流(miniature excitatory postsynaptic current, mEPSC)的影响。结果:与C57正常小鼠比较,AD模型小鼠在训练第2 d～4 d,逃避潜伏期显著延长(P<0.01),第5 d跨越平台潜伏期显著延长、次数显著减少(P<0.01);与AD模型对照组比较,迷迭香酸400 mg/kg组在第4 d逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),第5 d跨越平台次数显著增加(P<0.01)。针对海马神经元突触功能的试验显示,迷迭香酸100μmol/L局部给予能明显增加AD小鼠脑海马神经元mEPSC的峰幅(P<0.05),并明显提高响应斜率(P<0.05)。结论:迷迭香酸灌胃给予可改善自发AD小鼠学习记忆能力,其机制与增强脑海马神经元突触传递效率有关。     

迷迭香酸对大鼠心肌缺血损伤保护作用机制的探讨

目的 通过对迷迭香酸作用于结扎大鼠左冠状动脉前降支所致心肌缺血模型相关指标的影响,初步探讨迷迭香酸对心肌缺血保护作用的可能机制.方法 取120只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血模型组、硝酸异山梨酯组、迷迭香酸小剂量组、迷迭香酸中剂量组、迷迭香酸高剂量组.结扎冠状动脉前降支造成大鼠急性心肌缺血模型,检测细胞内SOD、MDA量,免疫组织化学法检测心肌细胞bcl-2和bax基因的蛋白表达.结果 与假手术组比较,缺血模型组细胞MDA值升高,SOD值减小；与迷迭香酸组比较,缺血模型组MDA值增加,SOD值降低,bcl-2,bax蛋白表达量增加,bax 表达尤其明显.迷迭香酸各给药组bcl-2,bax蛋白的表达量比假手术组有所增加,但b积明显较缺血模型组低(P＜0.05或P＜0.01).结论 迷迭香酸对大鼠冠脉结扎后引起的心肌缺血损伤的保护作用机制可能与提高氧化酶活性、增强清除自由基能力以及抑制心肌缺血后心肌细胞凋亡的发生有关.     

双波长HPLC法同时测定夏枯草中8种成分的含量

目的: 建立一种同时测定夏枯草中咖啡酸、对香豆酸、东莨菪内酯、迷迭香酸、秦皮乙素、芦丁、金丝桃苷、槲皮素8种成分含量的高效液相色谱方法。方法: 采用InertSustainTM ODS C18色谱柱（250.0 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为乙腈-0.1%乙酸水溶液,梯度洗脱,流速1 mL/min,柱温30 ℃,检测波长为325 nm和360 nm。对所建立的HPLC方法进行线性关系考察、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率试验等方法学考察。结果: 8种成分在1~100 μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率为98.63%~102.36%,精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3%。结论:本方法能同时测定夏枯草中8种成分的含量,简单高效、准确可靠、重复性好,可用于夏枯草的质量控制。     

高效液相色谱法同时测定万通炎康片中3种有效成分的含量

目的建立高效液相色谱法同时测定万通炎康片中异嗪皮啶、迷迭香酸和苦玄参苷ⅠA的含量。方法采用Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱(0→18→22→42→42.01→45 min,乙腈24%→24%→41%→41%→24%→24%);流速0.6 mL·min-1;检测波长:0～16 min为344 nm,16.01～22 min为327 nm,22.01～45 min为264 nm,柱温40 ℃。结果该方法可在45 min内完成对3种成分的色谱分析,且主成分峰与相邻的色谱峰之间分离度均＞1.5;异嗪皮啶、迷迭香酸和苦玄参苷ⅠA的线性范围分别为0.006 006～0.120 200 μg(r＝1),0.004 992～0.099 840 μg(r＝0.999 9), 0.080 72～1.614 40 μg(r＝1);平均加样回收率(n＝9)分别为103.71%(RSD＝0.96%),96.75%(RSD＝1.2%),101.75%(RSD＝0.95%)。结论该方法简便,准确,可用于万通炎康片的质量控制。