氮离子束诱变提高黄嘌呤氧化酶产生菌产酶能力

通过氮离子束诱变节杆菌(Arthrobacter sp.g-1984)筛选到黄嘌呤氧化酶高产菌株X7,产酶活力为24.49 U/g,是出发株产酶活力(8.81 U/g)的2.78倍,经发酵条件优化后,产酶活力达到36.67 U/g,是出发菌株产酶活力的4.16倍,产酶高峰缩短了21 h.对细菌黄嘌呤氧化酶酶学性质进行了初步研究,其最适反应条件为37℃、pH 6.5、Fe2 对酶活力有较强的抑制作用,EDTA对酶活力有明显的激活作用.     

模拟失重下空间诱变菌感染巨噬细胞炎症相关microRNAs的筛选及生物信息学分析

目的探索模拟失重下空间诱变大肠杆菌(T1-13)感染巨噬细胞RAW264.7后差异表达的microRNAs(miRNAs)及其意义。方法采用第二代测序技术检测模拟失重染菌组与对照组巨噬细胞miRNAs差异表达,通过生物信息学预测差异miRNAs的靶基因,并对靶基因进行GO功能富集分析、KEGG信号通路分析以及STRING蛋白互作分析。结果模拟失重染菌组与对照组间筛选出33个差异miRNAs,下调23个,上调10个。这些miRNAs互补结合的靶基因参与了MAPK通路、WNT通路、轴突导向以及TGF-β等信号通路,其中关键下调的靶基因是MAPK9,MAPK14,MAP3K7,MAP3K14,PIK3CA,PIK3CB,PIK3CD,MYC,JUN,SMAD4;关键上调的靶基因是AKT3,MAPK8,MAPK9,MAPK10,MAP2K1,PIK3CD。结论模拟失重下空间诱变大肠杆菌感染巨噬细胞后miRNAs表达出现显著差异,这些miRNAs可能通过调控MAPK,WNT以及TGF-β等通路参与失重条件下炎症反应的发生。     

BIGH3基因定点突变体R555W的构建及其对人角膜上皮细胞的影响

目的 构建野生型BIGH3和突变型R555W-BIGH3基因的真核表达载体,探讨其过表达对人角膜上皮细胞的影响.方法 以pMD18-T/BIGH3载体为模板扩增野生型BIGH3基因全长编码序列,克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP上,采用快速体外定点诱变技术获得R555W突变体.瞬时转染体外培养的人角膜上皮细胞,免疫印迹检测野生与突变型BIGH3基因的表达,流式细胞仪和透射电镜定量和定性检查细胞凋亡,分析caspase3活性.多组间数据采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 PCR成功扩增了野生型和R555W突变型的BIGH3基因.荧光显微镜下可见成功转染BIGH3/R555W-BIGH3-pIRES2-EGFP的CRL-11135细胞发绿色荧光,转染率为30.1%.瞬时转染48 h后的HCE细胞的上清液及其细胞裂解液免疫印迹分析显示,BIGH3/R555W-BIGH3-pIRES2-EGFP两组免疫印迹条带的密度比分别为1.26±0.06和1.27±0.08.正常HCE细胞组、转染pIRES2-EGFP空质粒及BIGH3-pIRES2-EGFP细胞凋亡率分别为(1.49 ±0.02)%、(1.53 ±0.02)%、(1.50 ±0.06)%,转染R555W-BIGH3-pIRES2-EGFP组细胞凋亡率达到19.46%±0.08%.差异有统计学意义(F=175 261.23,p<0.01).透射电镜下可见转染组细胞核内染色质凝集,固缩,分布于核膜下,核仁消失,有的胞核碎裂,细胞呈典型的凋亡改变.转染R555W-BIGH3-pIRES2-EGFP组caspase-3活性为561.03 ±1.05,与其他组相比,差异有统计学意义(F=629 347.38,P<0.01).结论 应用快速体外定点诱变技术,成功获得突变型R555W-BIGH3基因,转染人角膜上皮细胞后,通过caspase3途径引起细胞凋亡.     

紫外线照射对两种不同类型细菌的影响

目的观察紫外线照射对阴沟肠杆菌和表皮葡萄球菌生物学特性的影响。方法采用紫外线照射诱导,通过抑菌试验法和生化鉴定方法对诱变后细菌耐药性及生化特性进行了观察。结果阴沟肠杆菌和表皮葡萄球菌的原代菌耐受紫外线照射最长时间均为7 min,阴沟肠杆菌随着紫外照射的代数增多而存活率增加。经紫外线照射后的阴沟肠杆菌生化反应有改变,而表皮葡萄球菌生化反应无变化。经紫外线照射后的阴沟肠杆菌药物敏感变化较大,部分耐药性增加;而表皮葡萄球菌药物敏感变化较小。结论阴沟肠杆菌对紫外线的适应能力较表皮葡萄球菌强,紫外线照射可以诱导阴沟肠杆菌出现亚胺培南不稳定性耐药性增加。     

十溴联苯醚(BDE-209)染毒对雄性BALB/c小鼠睾丸毒性作用

Objective To explore the lipid peroxidation and the testicular morphological change induced by decabrominated diphenyl ether (BDE-209) in male BALB/c mice. Methods Twenty one male BALB/c mice were randomly divided into three groups: the high exposure group (500 mg/kg BDE-209), the low exposure group (200 mg/kg BDE-20) and control group (normal saline). The mice were exposed by gavage one time a day for 6weeks, then were sacrificed. Body weight, testis weight, malonyldialdehyde (MDA),total supemxide dismutase (T-SOD) and glutathione (GSH) in testis were examined. the morphological alteration of testis was observed. TUNEL assay was used to detect the apoptosis in testicular cells. Results Body weight and testis weight in high and low exposure groups were (21.6140 ± 2.3550)g, (20.8000 ±1.7630)g and (0.1859±0.0349) g, (0.1718±0.0266) g, respectively, which were significantly lower than those (27.7570±1.2880) g and (0.2302±0.0335)g in the control group (P＜0.05); the testis coefficient in high exposure group was (0.8640%±0.1706%), which was significantly higher than that (0.8329±0. 1386%) in the control group (P＜0.05). The GSH level and SOD activities of testis in 2 BDE-209 groups were 0.044±0.006,0.039±0.005 nmol/mg prot, and 0.735±0.179, 0.907±0.198 U/mg prot, respectively, which were significantly lower than those (0.052±0.067) mol/mg and (1.161 ±0. 188) U/mg in the control group (P＜0.05). The levels of MDA in 2 BDE-209 groups were (2.365±0.339) and (1.752±0.366) nmol/mg prot, which were significantly higher than that (1.173±0.232 nmol/mg prot) in control group (P＜0.05). there were significant differences of SOD and MDA levels between high exposure group and low exposure group (P ＜0.05). Histological examination showed that the number of spermatogenic cells and layer were decreased significantly in 2 exposure groups as compared with control group. TUNEL assay showed that apoptosis cells appeared in 2 exposure groups. Conclusion BDE-209 changed lipid peroxidation in male BALB / c mice testis and caused toxic effects on the testis.     

有机膨润土遗传毒性的体外试验研究

目的 体外试验研究有机膨润土的遗传毒性.方法 人B淋巴母细胞(HMy2.CIR)染毒0、1.88、3.75、7.50、15.00μg/ml有机膨润土24、48、72 h,并设硫酸钙(30μg/ml)和游离SiO2(30、240μg/ml)为阴性和阳性颗粒对照.用彗星试验和胞浆分裂阻滞微核试验(cytokinesis-block micronucleus,CBMN)检测有机膨润土颗粒部分和可溶性部分的遗传毒性.结果 彗星试验结果表明,有机膨润土组彗星尾部DNA百分含量(%tail DNA)随染毒剂量和时间的增加而增高,剂量为15.00 μg/ml、染毒时间24、48、72 h时的%tail DNA分别为3.20±0.19、4.63±0.88和9.49±1.31,均明显高于30μg/ml硫酸钙组(分别为1.40±0.11、1.37±0.22和0.90±0.16)和30μg/ml二氧化硅组(分别为1.83±0.21、1.41±0.27和2.48±0.25),差异均有统计学意义(P＜0.01).CBMN试验结果发现,有机膨润土组(除1.88μg/ml染毒24h外)微核率(MNF)均明显高于30μg/ml硫酸钙组(分别为1.33‰±0.58‰、1.33‰±1.15‰和1.33‰±0.58‰)和30μg/ml二氧化硅组的MNF(分别为2.00‰±0.00‰、1.68‰±0.58‰和2.33‰±0.58‰),差异有统计学意义(P＜0.01).2种试验结果还表明有机膨润土可溶性部分并不诱发遗传毒性.结论 体外试验有机膨润土可诱发人B淋巴细胞系DNA损伤和微核率增高,毒性主要来源于不可溶部分.     

海洋来源放线菌无活性野生株的链霉素抗性抗肿瘤活性突变株新产代谢产物研究

目的研究阐明无活性放线菌野生株L35-1来源硫酸二乙酯（DES）诱变链霉素抗性抗肿瘤活性突变株D2s4-1新产代谢产物及其抗肿瘤活性。方法组合利用活性跟踪与微量预试先导-放大实验制备的实验模式,通过与原始菌样品直接对照,在快速确定差异活性斑点基础上,组合利用各种色谱技术,分离纯化突变株新产代谢产物。根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。采用MTT法测定抗肿瘤活性。结果从突变株D2s4-1发酵物中分离鉴定了6个该突变株新产代谢产物,即1,9-二甲酯吩嗪（1）、2-羟基苯乙酰胺（2）、2-吡咯甲酸（3）、大豆黄素（4）、环（4-羟基-脯氨酸-亮氨酸）二肽（5）和尿嘧啶（6）。其中1、3、5和6有一定抗肿瘤活性,浓度为100μg/ml时对K562细胞的抑制率分别为33.3%、16.3%、33.3%和21.1%。结论阐明了抗肿瘤活性突变株D2s4-1的6个新产物,其中4个为活性产物。化合物1为新天然产物,其抗肿瘤活性亦属首次筛选发现。用化学诱变组合抗性筛选技术从无活性放线菌野生株转化获取的活性突变株可供筛选新产活性产物,从而拓展放线菌药源活性新菌株资源。     

类球红细菌空间诱变效应研究

目的利用空间诱变手段处理类球红细菌,通过诱变后菌株生理生化情况的变化,筛选辅酶Q10(CoQ10)高产菌株,为空间诱变手段筛选产业化菌株的应用提供实验和理论依据。方法利用返回式卫星搭载类球红细菌,检测搭载后菌株的抗逆性及发酵CoQ10能力。结果空间搭载后筛选到生长温度、pH值、盐浓度范围变宽,抗逆性增强的菌株,同时菌落颜色出现乳白色、粉红色等颜色变异菌株。从颜色变浅的变异菌株中筛选到一株CoQ10高产菌,发酵生产CoQ10比对照高73.13%。结论与传统单因素诱变方式相比,空间诱变是多因素综合作用,诱变效果明显,能获得高抗逆性和高CoQ10生产能力的突变株,可以作为产业化菌株筛选的诱变方式。     

利用亚硝酸诱变原生质体筛选L—亮氨酸高产菌株的研究

本实验以Ｌ－亮氨酸产生菌黄色短杆菌ＣＦＮ－１９为出发菌株。我们首先对ＣＦＮ－１９菌株制备原生质体，原生质体制备率为９５．１％，再生率为２５％，然后对原生质体进行亚硝酸、利福平、氯化锂复合诱变处理，从再生菌株中筛选出一株高产菌株Ｈ６－６６，产酸量由原来的２３．１ｍｇ／ｍｌ提高到３２．６ｍｇ／ｍｌ，提高率达４１％。同时又对Ｈ６－６６菌株进行遗传稳定性考察，考察结果Ｈ６－６６菌株是高产稳定菌株。