赖型钩体flaB2与VR1012中的CpG基序分析

目的：对问号赖型钩端螺旋体（赖型钩体）DNA疫苗[包括内鞭毛蛋白基因（flaB2)和质粒DNA表达载体（VR1012）]的CpG基序（CpG motifs)进行分析，为DNA疫苗免疫机制的阐明和提高DNA疫苗的效能奠定基础。方法：以flaB2与VR1012构建重组DNA的免疫原，对flaB2及VR1012全核苷酸序列进行计算机分析（分类、计数和定位）。结果：CpG的“C”的侧翼为两个嘌呤，“G”的侧翼为两个嘧啶，在flaB2中共3个，分别为GACGCT，GACGTC和GACGCC；在VR1012中共11个，分别为GACGTC1个，GACGCT2个，GACGCC1个，GACGTT1个，GGCGTT2个，GGCGCT2个，GGCGCC1个，AACGCT1个，其中特别重要的TGACGTCA4个和TAACGCCA有1个，位于5'端456－463；509－516；592－599；778－785和486－493；4个TGACGTCA和1个TAACGCCA均位于5'端且相对集中。结论：赖型钩体flaB2与VR1012构成的DNA疫苗含有TGACGTCA等CpG，这些基序又称免疫刺激序列，构成了DNA疫苗中的佐剂。     

肝细胞肝癌中增殖细胞核抗原表达的预后意义

增殖细胞核抗原(PCNA)是细胞G1／S期合成的核蛋白，与细胞的增殖活性有关。本研究采用PCNA单克隆抗体，运用免疫组化染色技术评价肝细胞肝癌(HCC)的增殖活性，以评价PCNA与患者预后的关系。     

重组鼠肝素辅因子Ⅱ在大肠杆菌的表达及纯化

重组鼠肝素辅因子Ⅱ（ｒＨＣⅡ）ｃＤＮＡ在ＰＥＴ一５ａ质粒载体被构建，克隆到大肠杆菌株ＤＨ５ａ；ｒＨＣⅡ蛋白在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）被表达为非糖基化蛋白。用肝素琼脂糖柱，ＭｏｎｏＱ和ＭｏｎｏＳ柱层析纯化ｒＨＣⅡ，获得高活性和纯度单一的ｒＨＣⅡ。ｒＨＣⅡ在免疫反应及硫酸皮肤素或肝素依赖性凝血酶抑制活性方面，与天然鼠血浆ＨＣⅡ无明显差异。     

乌苯美司对体外人白细胞介素—2生成及受体表达的促进作用

乌苯美司（乌比美克）１０￣１００μｇ／ｍｌ能促进人外周血淋巴细胞分泌ＩＬ－２；而０．０１￣０．１μｇ／ｍｌ则能增强人外周血淋巴细胞表达ＩＬ－２受体以及对ＩＬ－２发生反应的能力；在０．０１￣１００μｇ／ｍｌ范围内，乌苯美司对人血清中ＩＬ－２抑制物活性无明显影响。     

前列腺素E1脂微球载体制剂对多柔比星肾病大鼠结缔组织生长因子表达的影响

目的研究多柔比星肾病大鼠肾组织中结缔组织生长因子(CTGF)表达,同时探讨前列腺素E1脂微球载体制剂(Lipo-PGE1)对其表达的影响.方法 将24只雌性SD大鼠(体重180～200 g)随机分为对照组、多柔比星肾病模型组和多柔比星肾病Lipo-PGE1治疗组3组.采用尾静脉一次性注射多柔比星7.5 mg/kg的方法建立多柔比星肾病动物模型,第8周开始Lipo-PGE1治疗组给予尾静脉注射Lipo-PGE1,用量200 μg/(kg*d).10周后处死全部大鼠,并观察肾组织病理改变,应用免疫组织化学方法和原位杂交技术检测CTGF在肾组织中的表达. 结果 Lipo-PGE1治疗组大鼠肾小球硬化及基质增生程度比多柔比星肾病组明显减轻,免疫组织化学染色及原位杂交结果显示多柔比星肾病组较正常对照组肾小球和肾小管区CTGF蛋白及CTGFmRNA表达量明显增加(P<0.05).Lipo-PGE1治疗组肾小球和肾小管间质CTGF蛋白及CTGFmRNA表达量明显低于多柔比星肾病组(P<0.05).结论 多柔比星肾病组大鼠第10周肾小球及肾小管间质尤其是肾小管间质区CTGF蛋白及CTGFmRNA表达量明显增加.Lipo-PGE1延缓多柔比星肾病肾损害,其机制可能与通过下调CTGF的表达有一定关系,并且可能通过减少肾小球内细胞增生和细胞外基质(ECM)沉积,延缓慢性肾脏疾病的进展.     

门静脉血白蛋白mRNA检测在肝癌术后肝内转移监测中的意义

【目的】通过检测门静脉血中白蛋白mRNA的表达，探究其在肝癌术后肝癌肝内转移过程中的意义。【方法】采用RT-PCR方法检测32例肝癌患(其中单发大肝癌17例、多发大肝癌8例、小肝癌7例)门静脉血中白蛋白mRNA的表达，9例非肝病对照门静脉血中白蛋白mRNA的表达。【结果】①17例单发大肝癌中有9例白蛋白mRNA的表达呈阳性，8例多发大肝癌中有7例白蛋白mRNA的表达呈阳性，7例小肝癌中有1例白蛋白mRNA的表达呈阳性；②17例门静脉血中白蛋白mRNA表达呈阳性中有16例在术后3年内出现肝内转移。【结论】门静脉血中白蛋白mRNA表达呈阳性患较门静脉血中白蛋白mRNA表达呈阴性患出现术后肝内转移几率高。     

Pten基因敲除对过氧化物酶家族表达和活性氧水平的影响

目的:探讨Pten基因敲除后对过氧化物酶家族(Peroxiredoxins,Prdxs)水平和活性氧水平的影响.方法:采用Western印迹和化学/荧光发光分析法分别检测了在Pten / MEF和Pten-/-MEF细胞中PRDXs的表达和细胞内活性氧水平.结果:Western印迹结果显示,与Pten / MEF细胞相比,Pten-/-MEF细胞PRDX Ⅰ,Ⅱ,Ⅴ,Ⅵ蛋白水平下调,PRDX Ⅲ不变,PRDX Ⅳ上调.DCFH探针标记后流式结果显示Pten-/-MEF 细胞活性氧荧光值显著高于对照Pten / MEF细胞(P＜0.05).结论:Pten基因敲除引起数种PRDXs表达下调,细胞内活性氧水平增高.     

γ刀对胶质瘤C6细胞基因蛋白表达变化的实验研究

立体定向外科（steriotactic radiosurgery，SRS）以其高度的精确性为治疗颅内一些疾病开拓了新途径，但对于胶质瘤的治疗效果尚有争议。笔者用体外培养的胶质瘤细胞，在亚细胞水平探讨了7刀对肿瘤细胞凋亡的机制，报道如下。     

膀胱癌组织P-gp,GST-π和TOPO-Ⅱ表达评估灌注化疗

目的：探讨膀胱癌的多药耐药性(MDR)，指导灌注化疗用药。方法：采用免疫组化法检测44例膀胱癌病理标本中P-糖蛋白(P-gp)、谷胱肽S转移酶(GST-π)和拓扑异构酶(TOPO—Ⅱ)的表达，评估肿瘤耐药谱。结果：①P-gp检测显示，54．5％的病例对阿毒索、丝裂毒索、长春新碱等抗生索类和生物碱类抗癌药高耐药。②GST-π检测显示仅34．1％的病例对顺铂、环磷酰胺等高耐药，而反有56．8％的病例对该类药无耐药或低度耐药。③TOPO-Ⅱ检测显示对阿霉索、柔红毒索、VP16等TOPO-Ⅱ抑制剂类抗癌药，仅13．6％的病例高度耐药，29．5％中度耐药。56．8％低度耐药。结论：检测膀胱癌MDR，了解多药耐药谱，可指导灌注化疗用药。