木樨草素等抗心肌缺血/再灌注损伤及抑制脂代谢和细胞凋亡作用研究

目的?探讨香青兰中木樨草素、山奈酚和木樨草苷对大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)模型的保护作用及其抑制脂代谢相关酶11β-羟基类固醇脱氢酶1型（11β-HSD1）、溶血磷脂酸酰基转移酶(LPAATs)和细胞凋亡相关蛋白磷酸酯酶和张力蛋白同系物（PTEN）、蛋白酪氨酸磷酸酶2（SHIP-2）的作用,探讨中药多成分、多靶点抗MIRI的机制。方法?采用Langendorff装置,以洛-林二氏溶液为灌流液,通过停灌和复灌心脏建立MIRI模型,检测心率(HR)、左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、(-dp/dt)/(+dp/dt)、冠脉流量(CF)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌梗死面积。ELISA法测定LPAATβ和11β-HSD1活性。分光光度法测定PTEN和SHIP-2活性。结果?木樨草素、山奈酚和木樨草苷保护HR,降低LDH过量释放,升高LVEDP、LVDP和(-dp/dt)/(+dp/dt),恢复CF,降低心肌梗死面积。LPAATβ、11β-HSD1、PTEN、SHP-2等蛋白活性受木樨草素等的抑制。结论?木樨草素、山奈酚和木樨草苷具有通过抗脂代谢紊乱和抗细胞凋亡分子机制保护大鼠离体心脏MIRI的作用。      

松果菊苷对db/db糖尿病小鼠心肌细胞脂质代谢紊乱的改善作用

目的 探究肉苁蓉提取物松果菊苷(echinacoside)对糖尿病心肌病db/db小鼠模型心肌细胞糖脂代谢紊乱是否具有保护作用及可能作用机制。方法 将29只SPF级6周龄雄性db/db小鼠和db/m小鼠,适应性饲养1周后,按照数字表法随机取9只db/m小鼠作为正常对照组(db/m组,n=9),将db/db小鼠分为糖尿病心肌病组(db/db组,n=10)和松果菊苷干预组(db/db+ECH组,n=10)。其中db/db组和db/m组每天按照0.05ml/10g标准进行0.9%NaCl溶液灌胃10周。db/db+ECH组小鼠按松果菊苷300mg/(kg·d)灌胃干预10周。每周监测各组小鼠体质量,观察小鼠摄食、饮水及活动情况。于小鼠第18周龄用2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠并处死,取尾静脉血测定空腹血糖(FBG);分离血清检测各组小鼠血清脂质水平变化;采用HE染色观察心肌组织病理改变;苏丹红Ⅱ染色观察心肌细胞脂质蓄积情况;免疫印迹(Western blot)法检测糖脂代谢相关蛋白PPAR-α、CPT -Ⅰ、CD36和GLUT-4的表达水平;real-time PCR测定心肌细胞PPAR-α、CPT -Ⅰ、CD36和GLUT-4 mRNA的表达水平。结果 与db/m组比较,db/db组小鼠体质量、血糖和血脂水平显著升高(P＜0.05);同时HE染色切片显示,与db/m组比较,db/db组小鼠心肌细胞可见明显的肥大、坏死,心肌细胞排列结构紊乱;而db/db+ECH组小鼠心肌细胞形态有所缓解,细胞间隙减少,排列较规则。苏丹红Ⅱ染色观测心肌细胞脂质蓄积结果提示相较于db/m组,db/db组小鼠心肌细胞发生严重的脂质变性,可见不同大小的脂质液泡,同时伴有PPAR-α、CPT -Ⅰ和GLUT-4蛋白表达量显著降低(P＜0.01),CD36蛋白表达量显著增加(P＜0.01),且PPAR-α、CPT -Ⅰ、GLUT-4 mRNA表达量明显降低,CD36 mRNA水平上调(P＜0.01)。与db/db组比较,db/db+ECH组上述指标均有明显逆转,且切片观察小鼠心肌细胞脂质沉积显著减少。结论 松果菊苷能够明显改善db/db小鼠心肌细胞糖脂代谢紊乱,其机制可能与通过调控PPAR-α/CPT -Ⅰ信号转导途径有关。     

白芍总苷对缺血性脑损伤大鼠脑保护作用的研究

目的 研究白芍总苷(TGP)预处理对缺血性脑损伤大鼠脑组织的保护作用及其机制。方法 240只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平(NMP)10mg/(kg·d)组和TGP 50、100、200mg/(kg·d)组,每组40只;采用线栓阻断大脑右侧中动脉的方法制备缺血性脑损伤大鼠模型,造模手术前7天开始1次/天灌胃给药。24h后,Zausinger六分法评估神经功能,伊文思蓝渗透法测定血-脑脊液屏障(BBB)通透性,干湿比重法测定脑组织含水量,HE染色法行脑组织病理学检查,TUNEL法观察神经细胞凋亡状况,生化分析法测定脑组织抗氧化酶活性和MDA含量。结果 与模型组比较,TGP 100、200mg/(kg·d)和NMP 10 mg/(kg·d)组大鼠Zausinger评分升高,伊文思蓝含量和含水量降低,脑组织病理性改变和神经细胞凋亡状况明显改善,凋亡指数(AI)降低,SOD、CAT活性升高且MDA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与NMP 10mg/(kg·d)组比较,TGP 200mg/(kg·d)组Zausinger评分升高,伊文思蓝含量降低,脑组织病理性改变明显改善,AI降低,SOD活性升高且MDA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TGP对缺血性脑损伤大鼠脑组织具有保护作用,其机制可能与抑制氧化应激、保护BBB通透性、抑制脑水肿有关。     

二苯乙烯苷和远志总皂苷配伍对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的影响

目的探讨二苯乙烯苷(tetrahydroxy stilbene glycoside,TSG)和远志总皂苷(Tenuigenin,TEN)配伍对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的影响。方法PC12细胞除空白组外运用Aβ25-35诱导建立阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型,被随机分成模型组、TSG(200 mmol/L)组、TEN组(100 mg/L)、TSG-TEN配伍组(TSG200 mmol/L+TEN100 mg/L)、多奈哌齐组(10μmol/L)。采用MTT比色法检测各组细胞存活率;取细胞上清液分别测各组的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量及乙酰胆碱酯酶(AchE)、超氧化物歧化酶(SOD)活力;统计各组的细胞分化率。结果(1)细胞存活率的高低为:TSG-TEN组>TSG组>多奈哌齐组>TEN组(P<0.01);TSG组、TEN组、多奈哌齐组均低于TSG-TEN配伍组(P<0.01,P<0.05);(2)与模型组比较,TSG组、TEN组、TSG-TEN配伍组可降低LDH含量、MDA含量、抑制AchE活力及增强SOD活力(P<0.05)。且TSG-TEN配伍组对降低LDH含量、MDA含量、抑制AchE活力及增强SOD活力效应比TSG或TEN单用组效应更好(P<0.01);(3)PC12细胞的分化率高低为:TSG-TEN组>多奈哌齐组>TSG组>TEN组(P<0.01,P<0.05);TSG组、TEN组、多奈哌齐组均低于TSG-TEN配伍组(P<0.01,P<0.05)。结论TSG和TEN配伍对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤具有显著的协同保护作用,其作用机制可能与改善胆碱能系统、抗氧化应激、降低突触可塑性损伤有关,且TSG优于TEN。     

miR-483/CREB1轴介导桃叶珊瑚苷抑制髓核细胞胞外基质降解的研究

目的研究miR-483/CREB1轴在桃叶珊瑚苷(aucubin,AU)抑制人退行性髓核(nucleus pulposus,NP)细胞胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解中的功能作用。方法AU处理人退行性NP细胞后,检测细胞活性、ECM相关蛋白及cAMP反应元件结合蛋白1(c AMP responsive element binding protein 1,CREB1)的表达。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)和Western blot检测miR-483表达变化对CREB1丰度的影响;双荧光素酶报告实验(luciferase,LUC)检测miR-483和CREB1-3’-UTR的靶向结合;CREB1过表达载体和(或)miR-483 mimics共转染后,AU处理,检测CREB1及ECM相关蛋白的表达。结果AU可显著增强NP细胞活性(P=0.0004),抑制ECM降解酶基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-5(a disintegrin and metalloproteinase domain with thrombospondin motif-5,ADAMTS-5)与CREB1的表达,促进胶原蛋白Ⅱ型胶原α1(collagen type II alpha 1 chain,COL2A1)和miR-483的表达(P<0.001)。miR-483过表达可抑制CREB1的表达(P<0.0001),LUC实验表明miR-483可与CREB1-3’-UTR靶向结合。功能实验结果表明CREB1可削弱AU对NP细胞ECM的降解的抑制作用,而miR-483可部分逆转CREB1对AU的抑制作用。结论AU诱导NP细胞表达miR-483,进而抑制CREB1的表达,增强NP细胞的活性,抑制ECM的降解。     

多穗石柯叶水提物及其主要成分对PC12细胞增殖的影响

目的考察多穗石柯叶水提物及其主要成分对PC12细胞的增殖影响。方法将对数生长期的PC12细胞接种于96孔板,多穗石柯叶水提物(0,25,50,75,100和200μg·L-1)、根皮苷(0,25,50,75,100和200μmol·L-1)、三叶苷(0,25,50,75,100和200μmol·L-1)及茶多酚(0,25,50,75,100和200μmol·L-1)分别作用PC12细胞72 h,采用Brd U ELISA试剂盒检测PC12细胞的Brd U相对含量以反映其促增殖的作用。结果多穗石柯叶水提物75～200μg·L-1和三叶苷75～200μmol·L-1可显著增加PC12细胞的Brd U相对含量,而不同浓度的根皮苷及茶多酚对PC12细胞的增殖无影响。同时经多穗石柯叶水提物75～200μg·L-1的作用的PC12细胞Brd U相对含量相比于经三叶苷75～200μmol·L-1作用的PC12细胞Brd U相对含量较高。结论多穗石柯叶水提物和三叶苷均可显著促进PC12细胞增殖,而根皮苷及茶多酚则无促增殖作用。说明多穗石柯叶水提物的促增殖作用可能与三叶苷有关,但其作用机制有待于进一步研究。     

淫羊藿次苷对犬颌骨间充质干细胞增殖与成骨分化的影响

目的 研究淫羊藿次苷Ⅱ（Icarisid Ⅱ,ICSII）对体外培养的比格犬颌骨间充质干细胞（alveolar bone-derived stem cells, AMSCs）增殖与成骨分化的影响。方法 取比格犬颌骨骨片,体外分离培养出dAMSCs,传代至第4代,做多向分化鉴定。以10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9 mol/L浓度的ICSII刺激dAMSCs后,取1、3、5、7 d的细胞,分别用CCK-8及碱性磷酸酶（ALP）试剂盒检测dAMSCs的增殖及ALP活性;用10^-6 mol/L的ICSII处理dAMSCs后14 d,作ALP染色,21 d时作茜素红染色,以判断ICSII对细胞分化及矿化能力的影响。在成骨诱导及10^-6 mol/L的ICSII药物诱导第4、8天后,用蛋白免疫印迹试验分析成骨相关蛋白OSX、Runx-2及OCN的表达量;在诱导第6天时,利用RT-PCR分析成骨相关基因OSX、bFGF、Runx-2及OCN的表达情况。采用SPSS 22.0软件包进行统计分析。结果 原代培养的dAMSCs贴壁生长,呈梭形,具备多向分化能力;ICSII在不同浓度下均可促进dAMSCs的增殖,其ALP活性亦有提高,且在实验浓度时可观察到钙结节形成。各成骨相关基因在ICSII诱导后表达量有不同程度增加,均高于完全培养基组。随着时间延长,加药组Runx-2蛋白表达量有所下降, OCN蛋白表达量逐渐增多,与对照组差距加大;OSX的蛋白表达量虽高于对照组,但无统计学差异。结论 ICSII可促进dAMSCs的增殖及成骨分化。     

黄芪甲苷的神经保护作用研究进展

黄芪是一种补中益气、利水消肿的传统中药。现代医学研究表明,黄芪甲苷是黄芪的主要活性成分,具有多种生物活性作用,在中枢神经系统发挥特殊的保护作用。星形胶质细胞及小胶质细胞的TLR4,NF-κB和NLRP3炎症小体过度活化是中枢神经系统最常见的病理变化,引起的神经炎症会导致神经元损伤、认知功能损伤等。黄芪甲苷显著抑制中枢神经系统炎症,缓解神经炎症导致的器质性损伤。同时黄芪甲苷也能够激活mTOR信号通路,降低胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶9水平,提高Livin,LC3-Ⅱ,Beclin-1,Atg5和LAMP2的水平,从而起到保护神经元免于凋亡。线粒体功能紊乱是细胞氧化应激的重要原因,黄芪甲苷通过调节线粒体渗透性转变、膜电位下降及ROS生成,提高脑组织中SOD,GSH-Px和CAT活性,抑制NF-κB转位、Bcl-2水平的下调及胱天蛋白酶3活化,可起到抗氧化作用,对神经退行性疾病具有明显的缓解作用。黄芪甲苷还能提高NGF m RNA表达,促进海马区神经干细胞增殖及分化;上调视神经损伤大鼠视网膜组织NGF与TrkA的表达,提高NF-κB转录水平,促进视神经修复和神经再生。