应用低压逆相脂质体包裹技术提高小分子Mart-127-35的免疫原性

为提高恶性黑色素瘤抗原Ｍａｒｔ ｌ2 7-3 5肽的免疫原性 ,有效地在体诱发保护性免疫应答 ,本研究采用负压逆相蒸发技术 (ＲＥＶ) ,制备脂质体 ,包裹Ｍａｒｔ 12 7 3 5肽 ,免疫小鼠 ,并与常规应用完全弗氏佐剂 (ＣＦＡ)相比较 ,观察 2种方法对提高该小肽免疫原性的影响。1　材料与方法1.1　脂质体包裹Ｍａｒｔ 1肽的制备与鉴定　根据参考文献 [1]的方法 ,略做改动。所得产物对ＰＢＳ(4℃ )透析过夜 ,去除游离肽和痕量有机溶剂。终产物用 0 .4 μｍ滤膜过滤。取部分用磷钨酸负染 ,在透射电镜下放大 4～ 5万倍观察形态 ,余分装保存于 - 70℃冰…     

免疫脂质体与临床

将特异性抗体粘附于脂质体上形成免疫脂质体,它能特异性识别表达具有某种抗原的细胞或组织.由它携带药物具有靶向性强,毒副作用小,半衰期长等优点.针对其特点,临床应用免疫脂质体开展了对多种疾病的治疗.根据免疫脂质体携带药物对疾病治疗的优缺点,本文综述了近几年的临床观察和研究的进展.     

白屈菜红碱2种脂质体的制备和口服生物利用度比较

目的 制备白屈菜红碱脂质体（chelerythrine liposomes,Che-Lip）和聚乙二醇修饰白屈菜红碱脂质体（PEGylated chelerythrine liposomes,PEG-Che-Lip）,考察其体外释药和体内口服药动学行为。方法 薄膜超声法制备Che-Lip和PEG-Che-Lip。单因素考察结合Box-Behnken响应面法优化Che-Lip处方,引入二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（DSPE-mPEG2000）制备PEG-Che-Lip。比较Che-Lip和PEG-Che-Lip在模拟胃肠液中溶解度、稳定性和体外释药情况。按20 mg/kg ig给药（以白屈菜红碱计）,测定血药浓度,计算Che-Lip和PEG-Che-Lip主要药动学参数及其相对口服吸收生物利用度。结果 最优处方下制备的Che-Lip和PEG-Che-Lip外观为球形及类球形。Che-Li和PEG-Che-Lip包封率分别为（82.54±0.62）%和（91.13±1.04）%,载药量为（7.64±0.11）%和（7.55±0.18）%,平均粒径分别为（148.15±7.63）nm和（159.37±8.14）nm,ζ电位分别为（-34.2±1.1）mV和（-4.2±0.3）mV。PEG-Che-Lip在模拟胃肠液稳定性高于Che-Lip,Che-Lip和PEG-Che-Lip释药过程均符合Weibull模型。药动学结果显示,Che-Lip的达峰浓度（C_max）和相对口服吸收生物利用度分别增加至1.55倍和2.45倍,PEG-Che-Lip的C_max和相对口服吸收生物利用度分别增加至2.08倍和5.04倍。结论 Che-Li和PEG-Che-Lip可有效促进口服吸收,PEG-Che-Lip优势更明显。     

包裹天然骨架CpG ODN和HBsAg的非磷脂脂质体疫苗的免疫效果

非磷脂脂质体NovasomeR○(Np )是由Brij5 2、胆固醇和油酸组成 ,可作为同时传递佐剂和抗原的载体。我们将HBsAg与天然骨架CpGODN (phosphodiesterCpGODN ,pdCpGODN )包裹于Np后免疫BALB/c小鼠 ,检测其免疫效果。结果显示 ,包裹pdCpGODN和HBsAg的Np在小鼠中诱导了很高滴度的抗 HBs抗体产生并诱生了HBsAgS2 8 3 9特异性的CTL ,而铝佐剂组和仅包裹HBsAg的Np组诱生的抗体滴度较低 ,未检测到CTL活力。抗体亚类分析结果表明包裹pdCpGODN和HBsAg的Np诱生的免疫应答类型与pdCpGODN剂量有关 ,较低剂量 (2 4 μgpdCpGODN )诱生的为IgG2a为主的Th1型应答 ,而较高剂量(4 7μgpdCpGODN )诱生的是Th1/Th2混合型应答。铝佐剂和仅包裹HBsAg的Np组诱生的是以IgG1为主的Th2型应答。此外 ,包裹pdCpGODN和HBsAg的Np免疫小鼠脾淋巴细胞在体外HBsAg刺激培养后特异性增殖并分泌高水平的IFN γ。这些结果表明包裹pdCpGODN和HBsAg的Np能增强HBsAg的免疫原性 ,诱生体液 /细胞免疫均衡应答 ,有可能发展为慢性乙肝的治疗性疫苗     

瘤体内注射脂质体包裹的IL—2基因的抗肿瘤作用及其局部…

脂质体可以介导体内的细胞因了基因治疗，将脂质体包裹的ＩＬ－２基因直接注射到小鼠黑色素瘤（Ｂ１６－Ｆ１０）瘤体内，结果发现，肿瘤的生长明显受到抑制，部分小鼠的瘤体完全消退，存活期明显延长，从瘤体中分离的肿瘤细胞经Ｇ４１８筛选后产生阳性克隆，其上清中分泌有ＩＬ－２，肿瘤局部浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）具有较高的杀伤活性，提示瘤体内注射质包裹的ＩＬ－２基因后，可增强肿瘤细胞的免疫原性，激活瘤体具部的抗肿瘤免     

脂质体介导Neo R和Lac Z双标志基因共转导原代造血细胞及其表达的研究(英文)

在介导体内外基因转移方面,脂质体已显示出许多优于病毒载体的特征.然而,有关脂质体介导造血细胞基因转移的报道很少.本文描述了脂质体介导双标志基因(Neo~R和Lac Z)在体外共转移进入人及小鼠原代造血细胞的研究.基因转移的效率通过X-gal染色及观察集落的形成来评价.结果显示,在存在G418的体系中,转导细胞能够存活并形成集落,而未转导细胞则不能存活.同时,转导阳性细胞能够被X-gal染成蓝色.其蓝染阳性细胞率在人及小鼠造血细胞于G418选择前分别为13.33± 2.68%和16.28± 2.95%.经G418选择启分别达到46.06±3.47%及43.45±4.1%,显著高于筛选前(P<0.01).提示,利用脂质体这一简单、安全的转导策略在原代造血细胞可获得高效的基因转移及稳定的表达.同时,共转导双标志基因进入造血细胞可用作高集转导阳性细胞.这一结论对于临床进一步探讨造血重建的生物学特征、追踪白血病的复发机制以及利用造血细胞作为靶细胞进行基因治疗的研究提供了实验依据.     

脂质体介导下重组pcDNA3-hBMP3转染兔关节软骨细胞的条件

目的　探讨基因转移效率与 pc DNA3- h BMP3质粒及阳离子脂质体的浓度、转染时机以及细胞的种殖密度等因素的关系 ,以寻求最佳的基因转染条件 .方法　细胞密度按 2× 10 4· cm- 2 接种后 ,对细胞接种后即时、孵化 2 ,5和 7d进行转染效率研究 ;G418浓度每 m L DMEM分别含有 2 0 0 ,30 0 ,40 0 ,5 0 0和 6 0 0μg,探讨 G418对软骨细胞的杀伤作用 ;选择不同细胞接种密度、不同脂质体浓度和 pc DNA3- BMP3浓度 ,在细胞对数生长期且细胞融合至 70 %～ 80 %时开始做转染 ,各组软骨细胞爬片的原位杂交结果通过计算机图像分析 ,以其灰度值判定基因转染的效率 .结果　最佳期的转染时机为软骨细胞接种后在孵箱内放置 2 d转染 ,即在软骨细胞对数生长期内做转染 .G418对软骨细胞的最佳筛选浓度为 40 0 mg· L- 1 .最佳的细胞种植密度、pc DNA3- BMP3浓度和脂质体的量应分别为 2× 10 4· cm- 2 ,5 μL 和 10 μL.结论　通过本研究探索出脂质体介导下 pc DNA 3- BMP3转染兔关节软骨细胞的最佳条件 .     

99m锝标记紫杉醇脂质体在移植荷瘤鼠体内分布的研究

对 2 0只雌性裸鼠建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型 ,经其尾静脉注射锝标紫杉醇脂质体 (99m TC- TL) 0 .2m l,于 15 min、 30 m in、 90 m in各处死动物 5只 ,将心、肝、脾、肺、肾、小肠、子宫附件、骨及肿瘤组织分别称重。其余 5只动物尾静脉注射游离锝 (99m TC— F) 0 .2 m l,于 90 min处死 ,取肝、脾、肺及肿瘤组织称重 ,用 γ-定标仪测其放射强度 (单位 :CPM/ 10 0 mg)。肝、脾、肺脏器内 99m TC动态放射值最高 (5 5 2 .1± 92 .8～ 2 6 0 .1± 2 1.0 cpm/ 10 0m g) ,其放射强度随时间延长呈下降趋势 ,肿瘤组织放射值较低 (3.6± 0 .6 cpm/ 10 0 m g) ,动态测量呈水平位。99m TC- TL组与 99m TC- F组在 99m TC示踪显示 90 min时 ,TC- TL 组肝、脾、肺内放射强度高于 99m TC- F组 (P<0 .0 5 ) ,而肿瘤组织中两组无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论 :静注紫杉醇脂质体在荷瘤鼠体内主要定向分布于网状内皮系统丰富的肝、脾、肺器官内 ,肿瘤组织有一定滞留性 ,但亲和力较差