杜氏盐藻糖原合成酶激酶3cDNA片段的克隆及其在鞭毛再生中的功能

目的:克隆杜氏盐藻糖原合成酶激酶3(GSK3)基因序列并探讨它在鞭毛再生中的作用。方法:根据杜氏盐藻转录组测序得到的GSK3的2个片段设计上下游引物,提取盐藻总RNA进行RT-PCR,以此为模板扩增2个片段之间的序列。采用3’RACE方法扩增杜氏盐藻GSK3基因3’端序列,通过杜氏盐藻消减杂交模板扩增得到5’端序列。采用pH休克法去除杜氏盐藻鞭毛,通过实时荧光定量PCR观察鞭毛再生过程中GSK3基因在转录水平上的变化。结果:获得一段长为2116bp的GSK3 cDNA片段,其中包含737bp的3’UTR和1158bp的开放阅读框。实时荧光定量PCR结果表明,GSK3的mRNA转录水平在鞭毛再生过程中明显升高。结论:杜氏盐藻GSK3基因与鞭毛再生密切相关。     

西洋参β-香树脂合成酶基因的克隆和生物信息学分析

目的 克隆西洋参三萜皂苷生物合成途径关键酶β-香树脂合成酶（bAS）全长cDNA,为研究西洋参皂苷生物合成与次生代谢调控奠定基础。方法 采用大规模ESTs测序和cDNA末端扩增（RACE）技术克隆西洋参bAS基因。结果 获得了西洋参bAS基因全长cDNA,命名为PqbAS（GenBank注册号：JX185490）,其核苷酸序列长度为2 309 bp,含有1个开放阅读框,编码631个氨基酸多肽。保守结构域搜索显示PqbAS含有环氧角鲨烯环化酶（OSCs）共有的活性位点和保守基序。Singal P4.0分析表明PqbAS属于非分泌型蛋白,Tmhmm 2.0分析表明其为非跨膜蛋白。实时荧光定量PCR显示PqbAS基因在各个器官中均有表达,在花和幼茎中高表达,根和叶中表达量相对较低。结论 首次克隆了PqbAS基因全长序列,为研究其表达特性以及在三萜皂苷生物合成中的功能奠定了基础。     

中链脂肪酸对高脂肪饲料诱导的肥胖C57BL/6J小鼠脂肪组织中转录因子的影响

目的观察中链脂肪酸（medium chain fatty acid,MCFA）对高脂肪饲料诱导的肥胖C57BL/6J小鼠脂肪组织中转录因子的表达,探讨中链脂肪酸降低体重、体脂肪的可能机制。方法 30只C57BL/6J肥胖小鼠按空腹体重随机分为两组,每组15只,分别给予含2%MCFA和长链脂肪酸（long chain fatty acid,LCFA）的高脂饲料喂养12周,测定小鼠体重、体长,取小鼠肝脏、肠系膜周围脂肪垫、附睾周围脂肪垫及肾周脂肪垫并称重。采用BCA法测定附睾周围脂肪组织（white adiposetissue,WAT）蛋白浓度,采用ELISA法测定小鼠WAT中肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（peroxisome proliferators-activated receptor-γ,PPAR-γ）水平,采用Real-time PCR法检测WAT中PPAR-γ、甾醇调控元件结合蛋白-1（sterol regulatory element-binding protein-1,SREBP-1）和CCAAT/增强子结合蛋白（CCAAT enhancer binding protein-α,C/EBP-α）的mRNA表达。结果 MCFA饲料组肥胖小鼠体质量、体长、肝脏质量、肾周脂肪质量、附睾周脂肪质量以及WAT中TNF-α水平、SREBP-1和C/EBP-α的mRNA表达量均显著低于LCFA饲料组（P〈0.05）。PPAR-γ水平及其mRNA表达量,两组之间无统计学差异（P〉0.05）。结论 MCFA可能通过下调脂肪组织中TNF-α、SREBP-1及C/EBP-α水平和mRNA表达,抑制脂肪细胞分化。     

充血性心力衰竭大鼠心肌及海马组织GSK-3β表达的变化

目的：探讨充血性心力衰竭大鼠心肌及海马区GSK-3β的变化。方法：将25只成年雄性SD大鼠随机分为正常组（5只）、假手术组（10只）和模型组（10只）,采用腹主动脉部分缩窄术建立大鼠慢性充血性心力衰竭模型。术后l、2、4、8周应用超声心动图动态监测左室舒张末期内径（LVEDd）、舒张末期室间隔厚度（IVSd）和左室后壁厚度（LVPwd）;计算心肌重量指数[心重／体重（HW／BW）、左室重／体重（LVW／BW）];免覆组织化学染色法检测大脑海马区GSK-3β和P-GSK-3β表达变化,结果：模型组LVEDd、1VSd、INPWd高于正常组和假手术组,且呈时间依赖性上升趋势（P〈0．01）,模型组心肌重量指数与正常组和假手术组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。模型组心肌和海马组织p-GSK-3β灰度值明显高于假手术组（P〈0．01）。结论：压力超负荷性心力衰竭发生过程中,大脑海马区p-GSK-3β表达量明显增高,GSK-3β活性明显下降。     

氨甲酰磷酸合成酶缺乏症Ⅰ型1例报告

<正>尿素是通过五种酶和尿素循环的作用形成的。这些酶缺乏症的患者多发生在新生儿期,典型表现为急性高氨血症。氨甲酰磷酸合成酶缺乏症缺乏症(CPS)携带者的基因特征是一种遗传代谢性疾病,CPS的致病原因是氨甲酰磷酸合成酶缺乏,使尿素循环阻断,血氨增高,对脑产生毒性。笔者总结氨甲酰磷酸合成酶缺乏症Ⅰ型1例的经验和体会报告如下。     

姜黄素对PC-3前列腺癌细胞株生长抑制的体外实验研究

目的探讨姜黄素对PC-3前列腺癌细胞株的生长抑制的作用及其可能机制.方法用MTT法检测姜黄素对PC-3前列腺癌细胞的生长抑制作用.流式细胞学(flow gytometry,FCM)检测细胞凋亡率.RT-PCR检测姜黄素对PC-3细胞中脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)mRNA及BAX mRNA表达的影响.结果姜黄素分别作用24 h和48 h后,PC-3细胞的生长受到了明显地抑制,并且具有时间-剂量依赖性.各实验组与对照组相比,抑制率具有统计学意义(P<0.01).姜黄素处理PC-3细胞24 h组,凋亡率随浓度的增加而增高,在姜黄素浓度为40μmol/L时凋亡率最大,各给药组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).不同浓度姜黄素作用于PC-3细胞后FASN mRNA的表达明显降低,随姜黄素的浓度增加而减少;而BAX mRNA的表达明显增高,随姜黄素的浓度增加而增高.结论姜黄素明显抑制PC-3前列腺癌细胞的生长.抑制FASN mRNA的表达,增加BAX mRNA的表达,诱导细胞凋亡增加可能是其作用机制之一.     

小儿急性阑尾炎细菌移位与阑尾组织NOS、血清NO及IL-10的关系

目的 探讨小儿急性阑尾炎发生细菌移位情况,分析其与阑尾组织中的NOS、血清中NO及IL-10的关系.方法选择在我院进行治疗的急性阑尾炎患儿24例为阑尾炎组,分别于术前和术后7 d采集静脉血,术中吸取腹腔液体.选择肠旋转不良且无阑尾炎的患儿15例为肠旋转不良组,选择20例健康儿童为正常对照组,采集血标本.检测全血细菌DNA,收集的腹腔液体和切取的淋巴结进行细菌培养,测定阑尾组织NOS的表达情况,检测血清中NO和IL-10的水平.结果 NO与NOS呈负相关,与IL-10成正相关.结论 小儿化脓性阑尾炎可出现肠道细菌移位与NO有密切关系.     

非ST段抬高型急性冠状动脉综合征患者H-FABP界值点的意义

目的探讨非sT段抬高型急性冠状动脉综合征（NSTE-ACS）患者心脏型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）界值点的临床意义。方法采用酶联免疫吸附（双抗体夹心）试验（ELISA）测定192例住院患者入院时血清H-FABP水平,记录随访8个月间患者再次发生主要不良心血管事件的情况。应用受试者工作特征曲线确定H-FABP水平截断点,根据该值将患者危险分层分为高危组（81例）和低危组（111例）。结果血清H-FABP水平危险分层的最佳截断点取1830ng／L,其敏感性为62．9％,特异性为80．8％,高危组中发生不良心血管事件31例（38.2％）,无事件者为50例（61．8％）;而低危组中发生不良心血管事件12例（10．8％）、无事件者为99例（88．2％）,高危组预后情况较低危组更差（P〈0．01）。结论血清H-FABP水平对A非sT段抬高型CS患者危险分层的最佳截断点为1830ng／L．     

酵母胱硫醚β-合成酶的表达及酶活鉴定

将重组质粒pET45b-yCBS转入E.coli BL21中,构建高效表达酵母胱硫醚β-合成酶(yeast cystathionine β-synthase,1)的重组菌.研究诱导时菌体浓度、诱导剂IPTG浓度、诱导时间和温度,以及在培养基中添加不同浓度的山梨醇、葡萄糖、甘油对1表达量的影响.使用Ni2+亲和色谱柱纯化重组蛋白,再经His-Trap脱盐柱脱盐,以茚三酮法检测蛋白活性.结果表明,培养基中添加0.05％的山梨醇,重组菌在37℃培养3h后,添加终浓度为0.1 mmo/L的IPTG于20℃诱导培养15h,可溶性1表达量达到110 mg/L;纯化后比活为1 320 u/mg.     

抗真菌药物靶标及其抑制剂的研究进展

目的综述抗真菌药物靶标及其抑制剂的研究进展。方法本文结合自身研究工作,分析近5年文献,总结抗真菌药物靶标及其抑制剂的最新进展。结果β-1,3-葡聚糖合成酶、羊毛甾醇14α-去甲基化酶、N-肉豆蔻酰基转移酶和分泌型天冬氨酸蛋白酶是目前研究最为集中的抗真菌药靶,其抑制剂显示了良好的新药开发前景。结论优化现有药物化学结构和发现全新作用机制的先导化合物,对研发新一代抗真菌药物具有重要意义。