褪黑素对大鼠腹膜透析相关性腹膜纤维化的影响

目的观察褪黑素(melatonin,MT)对大鼠腹膜透析相关性腹膜纤维化的影响。方法将38只雄性SD大鼠分为对照组(6只)、腹膜纤维化模型组(8只)、模型+低剂量MT(5mg·kg~(-1)·d~(-1))腹腔给药组(8只)、模型+中剂量MT(10mg·kg~(-1)·d~(-1))腹腔给药组(8只)、模型+高剂量MT(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))腹腔给药组(8只)。腹腔注射4.25%腹膜透析液100 ml·kg~(-1)·d~(-1)建立腹膜纤维化大鼠模型。实验第28天行4h腹膜平衡实验(peritoneal equilibration test,PET),量取超滤量(ultrafiltration,UF),检测腹透液尿素氮浓度(dialysate urea nitrogen concentration,D)、血浆尿素氮浓度(plasma urea nitrogen concentration,Purea)、初始腹膜透析液葡萄糖浓度(D0)、4 h后透出液葡萄糖浓度(D4),并计算D/Purea、D4/D0。取大鼠壁层腹膜组织行HE和Masson染色,采用免疫组化方法检测转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1),胶原Ⅰ(collagenⅠ,Col-Ⅰ)和α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达。结果 4 h PET显示模型组与对照组相比,UF和D4/D0明显减少(P0.05),D/Purea明显增加(P0.05);MT各给药组与模型组比较,UF和D4/D0明显增加(P0.05),D/Purea明显减少(P0.05);HE和Masson染色显示对照组腹膜菲薄,间皮细胞连接紧密,模型组腹膜明显增厚,部分可见间皮细胞缺失,间皮下可见胶原沉积,MT各给药组上述腹膜病理改变较模型组明显减轻;免疫组化显示模型组TGF-β1、Col-Ⅰ、α-SMA表达明显高于对照组(P0.05),MT各给药组表达明显低于模型组(P0.05)。结论 MT能通过改善腹膜的结构和功能来发挥其对抗大鼠腹膜纤维化的作用并能抑制TGF-β1、Col-Ⅰ和α-SMA表达。     

脑梗死患者脑小动脉平滑肌细胞表型转化与血管修复的相关性

目的:观察两种血管收缩功能相关蛋白在脑梗死患者小动脉血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell,VSMC)中免疫组织化学表达变化,以期了解脑小动脉病变中VSMC的表型转化及细丝蛋白在表型转化中的意义,指导临床小动脉硬化型脑卒中的准确防治。方法:选取尸解脑标本,分为脑梗死组及对照组;免疫组化显示脑小动脉α平滑肌肌动蛋白及细丝蛋白的表达变化,并进行定量分析。结果:对照组α平滑肌肌动蛋白及细丝蛋白表达强度(PU)分别为53.50±2.00和34.21±2.36;梗死组为57.40±2.43和36.10±1.51,与对照组相比F值为15.273和4.592,P值为0.001和0.046,梗死组阳性表达强度增高,差异有统计学意义。讨论:硬化小动脉中膜数目减少。内膜下VSMC显著增生,并可能同时存在合成及收缩表型VSMC,分别代偿性的高表达细丝蛋白及α平滑肌肌动蛋白,以维持血管构型及收缩能力。     

肿瘤相关成纤维细胞在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其意义

目的检测甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)相关成纤维细胞(tumor-associated fibroblasts,TAFs)中成纤维细胞特异性蛋白-1(fibroblast-specific protein 1,FSP1/S100A4)、平滑肌肌动蛋白-ɑ(ɑ-smooth-muscle actin,ɑ-SMA)和成纤维细胞活化蛋白(fibroblast-activated protein,FAP-ɑ)的表达,探究其与PTC发生、发展的关系。方法通过免疫组化SP法检测FSP1/S100A4、ɑ-SMA、FAP-ɑ在正常甲状腺组织和PTC中的表达情况,并分析这些指标与重要临床病理参数的关系。结果FSP1/S100A4、ɑ-SMA和FAP-ɑ在PTC间质细胞中可见阳性表达,而在正常甲状腺组织的滤泡上皮或间质细胞内均不表达。患者肿瘤的大小、是否有淋巴结转移及TNM的不同分期与FAP-ɑ的阳性病例数有统计学差异(χ^2=6.833,P<0.05;χ^2=10.296,P<0.05;χ^2=4.910,P<0.05);ɑ-SMA阳性病例数在是否被膜侵犯、淋巴结转移有显著差异(χ^2=6.008,P<0.05;χ^2=11.766,P<0.05),而S100A4的阳性病例数在患者的性别、年龄、瘤体的大小、有无被膜侵犯、有无淋巴结转移及患者的TNM分期差异均没有统计学意义(P>0.05)。结论PTC中TAFs的存在可能提示肿瘤具有较强的侵袭转移能力,TAFs有望成为PTC诊疗的一个新靶点。     

大黄酚对单侧输尿管梗阻模型大鼠肾组织CTGF、α-SMA和FN的影响

目的探讨大黄酚对大鼠单侧输尿管梗阻模型(UUO)肾间质纤维化的影响。方法 27只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄酚组。用单侧输尿管梗阻术建立肾间质纤维化模型,大黄酚治疗14 d后检测血肌酐、尿素氮水平;采用免疫组织化学方法观察肾组织结缔组织生长因子(CTGF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)的表达情况。结果与假手术组相比,模型组血肌酐、尿素氮的水平以及CTGF、α-SMA、FN的表达均显著增高。与模型组相比,大黄酚组血肌酐、尿素氮水平降低,CTGF、α-SMA、FN的阳性表达显著下调。结论大黄酚可能通过抑制UUO大鼠肾组织CTGF、α-SMA、FN的表达,从而缓解肾间质纤维化的发生发展。     

低氧对家兔心脏成纤维细胞增殖与表型的影响

目的 :观察不同程度低氧对家兔心脏成纤维细胞 （CFs）增殖与表型的影响。方法 :分离、纯化、培养家兔 CFs,随机分为 3组 :对照组、中度低氧组和重度低氧组 ,以四唑盐 （MTT）比色法检测细胞的增殖情况 ,采用激光共聚焦显微镜检测各组细胞内肌动蛋白 α- actin的表达。结果 :中度低氧组 MTT的 4 90 nm吸光值 （A4 90 nm）为 0 .4 6± 0 .0 5较对照组 （0 .37± 0 .0 4 ）显著增加 （P<0 .0 5 ,n=8） ,而重度低氧组 A4 90 nm值为 0 .31± 0 .0 3较对照组显著降低 （P<0 .0 5 ,n=8）。激光共聚焦显微镜结果显示 ,对照组 CFs内无明显的 α- actin表达 ,荧光值为 112 7± 12 0。中度低氧组细胞内 α- actin表达显著增加 ,荧光值为 16 72± 193,与对照组比差异显著 （P<0 .0 5 ,n=4 ）。重度低氧组细胞内 α-actin表达较少 ,荧光值为 135 5± 2 31,与对照组比无显著差异 （P>0 .0 5 ,n=4 ）。结论 :中度低氧促进家兔 CFs增殖 ,并且出现肌成纤维细胞的表型特点 ,而重度低氧具有细胞毒性。     

miR-449a通过靶向KLF4蛋白导致血管平滑肌细胞表型转化

目的探讨miR-449a对于血管平滑肌细胞表型转化、增殖和迁移的作用。方法首先构建携带miR-449a抑制剂、miR-449a mimic的质粒和携带KLF4 siRNA的病毒,并将其转染到血管平滑肌细胞当中,用即时荧光定量PCR检测miR-449a的量,用Western blot检测KLF4的表达量,并检测表型转化相关代表蛋白SM-MHC、α平滑肌肌动蛋白、骨桥蛋白。同时,用CCK-8和细胞划痕试验来评估细胞的增殖和迁移状况。用免疫荧光检测蛋白表达量及细胞结构变化。用荧光素酶报告基因实验来证实miR-449a与KLF4之间的关系。结果实验发现,miR-449a的下调可以增加KLF4的表达以此达到促进血管平滑肌细胞表型转化的作用,并增加其增殖和迁移能力。结论可以通过上调miR-449a降低KLF4的表达,从而抑制血管平滑肌细胞的表型转化及降低其增殖和迁移能力。     

灵芝三萜对癫痫大鼠学习记忆损伤的效果

目的 研究灵芝三萜对戊四氮致痫大鼠认知功能的影响及其作用机制。方法 75只Sprague-Dawley大鼠随机分为空白对照组、癫痫模型组、灵芝三萜组、外源性单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)组和灵芝三萜联合GM1组,每组15只。除空白对照组外,其余各组用戊四氮35 mg/kg腹腔注射,每天1次,持续28 d。各用药组在每天腹腔注射戊四氮的同时进行相应给药。造模后,行Morris水迷宫测试;HE染色及透射电镜观察海马神经元;实时定量聚合酶链反应检测大鼠海马肌动蛋白结合蛋白(Cofilin)、突触素(SYN)、神经生长相关蛋白43 (GAP-43)的mRNA表达水平。结果 与空白对照组比较,各时间点癫痫模型组逃避潜伏期延长(P < 0.05);与癫痫模型组比较,各用药组逃避潜伏期均缩短,部分时间点有显著性差异( P < 0.05)。与癫痫模型组比较,各用药组穿越平台次数明显增多( P < 0.01),在目标象限停留时间明显延长( P < 0.01)。各用药组海马神经元数增加,核溶解碎裂减少,核膜结构较清楚,突触小泡增多,突触数量增加,细胞器结构有所改善。与空白对照组相比,癫痫模型组Cofilin mRNA水平上调( P < 0.05),SYN mRNA和GAP-43 mRNA水平降低( P < 0.05);与癫痫模型组比较,各用药组Cofilin mRNA表达水平降低( P < 0.05),SYN mRNA表达水平升高( P < 0.05),仅灵芝三萜联合GM1组GAP-43 mRNA升高( P < 0.05)。 结论 灵芝三萜和GM1及两者联合用药均可改善癫痫大鼠的学习记忆能力及神经元形态结构,其机制可能与影响海马突触生长重塑相关基因表达有关,以达到保护大脑神经元的作用。     

维甲酸对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用

目的 探讨维甲酸（at-RA）对单侧输尿管梗阻大鼠（UUO）肾间质纤维化的影响.方法将26只大鼠随机分为假手术组、模型组、给药组,结扎单侧输尿管造成梗阻性肾病模型.术后9天处死大鼠,取梗阻侧肾做组织学检查,HE染色,用免疫组化方法检测肾组织中结缔组织生长因子（CTGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）.结果维甲酸显著减轻肾小管间质损害,治疗组肾间质炎细胞浸润和肾间质CTGF、α-SMA表达显著低于对照组.结论维甲酸减轻UUO模型大鼠肾小管间质损害和炎细胞浸润,降低CTGF表达,抑制α-SMA表达,从而减轻肾间质纤维化.