川续断种子质量分级标准的研究

目的:制定川续断种子的质量分级标准。方法:对来自不同居群的川续断成熟种子进行千粒重、含水量、发芽率、生活力、单粒大小、净度等指标的测定和外观形态的观察,使用SPSS统计软件,通过聚类分析制定川续断种子的质量分级标准。结果:Ⅰ级川续断种子的发芽率不低于85%,千粒重不低于3.94 g,净度不低于90.95%,含水量不高于9.08%;Ⅱ级川续断种子的发芽率不低于64%,千粒重不低于3.57 g,净度不低于83.66%,含水量不高于10.23%;Ⅲ级川续断种子的发芽率不低于35%,千粒重不低于3.04 g,净度不低于75.51%,含水量不高于11.37%。结论:千粒重和发芽率是川续断种子质量分级标准的主要指标,净度和含水量是质量分级标准的重要参考指标。该方法制定的质量分级标准科学、可行,可作为川续断种子的质量控制标准。     

川续断皂苷Ⅵ诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化的研究

目的探讨川续断皂苷Ⅵ(akebia saponin D)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的影响。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,选择合适的培养基,传代扩增。采用不同浓度的川续断皂苷Ⅵ对大鼠MSCs定向诱导分化,MTT法观察各组对MSCs的增殖作用并绘制细胞生长曲线;观察MSCs诱导分化过程中成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaliphosphatase,ALP)活性;采用ELISA法检测MSCs诱导分化过程中骨钙素(Osteo-calcin,OC)的含量;RT-PCR方法检测MSCs诱导分化过程中核心结合因子α-1(Cbfα1)mRNA表达。结果细胞生长曲线显示各组MSCs数量均随时间延长而增加,中、高浓度的川续断皂苷Ⅵ能明显提高MSCs分化为成骨细胞的ALP活性和骨钙素的含量,且使Cbfα1 mRNA的表达升高。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进大鼠体外MSCs向成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高Cbfα1 mRNA的表达有关。     

HPLC法测定大鼠血浆中川续断皂苷Ⅳ的浓度

目的：建立了高效液相色谱测定大鼠血浆中川续断皂苷Ⅳ浓度的方法。方法：血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,采用HPLC法测定。色谱柱为Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm,5μm）;流动相为乙腈-甲醇-水（32：17：51,v/v）;检测波长205nm;柱温为室温;流速1.0mL·min-1。动物实验使用Wistar大鼠6只,采用腹腔注射给药（55mg·kg-1）,进行血药浓度测定和药动学参数计算。结果：大鼠血浆内源物质对药物测定无干扰,在血药浓度5.0～500.0μg·mL-1范围内,浓度对峰面积有良好的线性关系（r=0.9946）,定量下限为5.0μg·mL-1;低、中、高3种浓度样品的回收率分别为85.0%、83.6%和86.6%,平均为85.0%;日内、日间精密度RSD均小于7.8%（n=9）。采用非房室模型分析方法进行数据处理,所得参数符合药物动力学变化趋势。结论：该法准确、简便,可用于川续断皂苷VI在大鼠血浆中的浓度测定和药物动力学研究。     

续断壮骨胶囊中总皂苷和川续断皂苷VI含量测定

目的：建立续断壮骨胶囊中总皂苷和川续断皂苷遇的含量测定方法。方法：采用高氯酸显色,紫外-可见分光光度法测定总皂苷含量。采用高效液相色谱法测定川续断皂苷遇含量,Agilent C18柱（250 mm 215;4.6 mm,5μm）,乙腈-0.15%三氟乙酸水溶液（29∶71）为流动相,检测波长215 nm ,流量1.0 mL/min。结果：总皂苷平均含量为86.3%,平均加样回收率为99.88%, RSD =1.52%;川续断皂苷遇在64～320μg/mL 范围内呈良好线性关系（r =0.9995）,平均加样回收率为100.4%, RSD =0.77%。结论：所建方法准确,能快速测定续断壮骨胶囊总皂苷和川续断皂苷遇的含量,可用于该制剂的质量控制。     

高效液相色谱法测定续断饮片中马钱苷的含量

目的建立中药饮片续断中马钱苷的含量测定方法。方法液相色谱法。色谱柱:InertsilRODS(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(10∶90);流速1.0 mL·min-1;柱温:35℃;检测波长:240 nm。结果马钱苷在0.421 2～4.212μg范围内呈线性关系(r=1.000 0,n=6),平均加样回收率为98.9%,RSD为1.6%(n=6)。结论该方法操作简便,结果可靠,可用于中药饮片续断中马钱苷的含量测定。     

川续断皂苷Ⅵ对M1/M2型巨噬细胞极化的调节作用及机制

目的：研究川续断皂苷Ⅵ对M1/M2型巨噬细胞极化的调节作用及机制。方法：MTT法检测川续断皂苷Ⅵ对RAW264.7细胞活力的影响。ELISA检测脂多糖（LPS）诱导状态下RAW264.7细胞上清中TNF-α和IL-6的分泌量；Griess法检测LPS诱导状态下RAW264.7细胞上清中一氧化氮（NO）含量；荧光定量PCR检测TNF-α、IL-6、精氨酸酶-1(Arg-1)、血红素加氧酶1(HO-1)和细胞因子信号转导抑制蛋白-2(SOCS2)基因表达水平。Western blot检测一氧化氮合酶（iNOS）和p-p65蛋白表达。结果：在LPS诱导的RAW264.7细胞中，川续断皂苷Ⅵ抑制TNF-α、IL-6、iNOS和p-p65蛋白或基因表达水平，同时增加HO-1基因表达。川续断皂苷Ⅵ能抑制LPS诱导下RAW264.7细胞分泌的NO。川续断皂苷Ⅵ增加IL-4诱导下M2型巨噬细胞标志物Arg1和SOCS2基因表达。结论：川续断皂苷Ⅵ可以抑制RAW264.7巨噬细胞向M1型极化，同时促进其向M2型极化，可通过调节M1/M2型巨噬细胞极化发挥其抗炎免疫调节作用。     

基于熵权法结合Box-Behnken响应面优化筋骨痛消液的制剂醇提工艺

目的 优化筋骨痛消液的制剂工艺。方法 采用熵权法结合Box-Behnken响应面法对筋骨痛消液中乳香、续断、龙血竭与红花及大黄与薄荷的醇提工艺进行优化。结果 11-羰基-β-乙酰乳香酸含量与乳香醇提液浸膏得率权重系数分别为0.5166,0.4834;川续断皂苷Ⅵ含量与续断醇提液浸膏得率权重系数分别为0.4790、0.5210。乳香、续断、龙血竭与红花、大黄与薄荷最优醇提条件乙醇浓度分别为95%,55%,80%,60%;加醇倍量分别为5倍，5倍，7倍，8倍；浸泡时间分别为48 h, 72 h, 24 h, 72 h。结论 通过熵权法结合响应面法设计优化筋骨痛消液的制剂提取工艺，为筋骨痛消液制剂质量提升及质量保证提供科学依据。     

川续断中林生续断甙Ⅲ的结构研究

从川续断Dipsacusasperoides根的乙醇提取物中分得4个化合物，经理化性质、光谱分析和文献对照，鉴定为林生续断甙Ⅲ、蔗糖、胡萝卜甙和β-谷甾醇。其中林生续断甙Ⅲ为首次从川续断中分得。     

ＨＰＬＣ法测定续断接骨胶囊中川续断皂苷Ⅵ含量

目的：采用高效液相色谱法测定续断接骨胶囊中川续断皂苷Ⅵ的含量。方法色谱柱：Amethyst C18柱(4．6 mm ×250 mm,5μm),流动相：乙腈-水(28∶72),检测波长：212 nm,流速：1．0 mL/min。结果川续断皂苷Ⅵ的质量浓度线性范围为0．019~0．612 mg/mL(r=0．9999),平均加样回收率为100．89%,RSD=1．10%。结论该方法简便快捷,结果准确可靠,可作为续断接骨胶囊的质量控制手段。