人胰岛细胞制备过程中细菌性污染的监测与干预

目的:在胰岛细胞制备过程中监测并预防性使用敏感抗生素,防止、清除制备过程中出现的污染,保证用于移植的胰岛细胞质量,以期减少移植后感染的发生,确保移植进一步用于临床的效果。方法:体外分离人胰岛细胞实验是于2004-11/2005-10在广州中山大学附属第三医院中心实验室进行。①成人胰岛细胞的分离纯化及其过程中细菌性污染的监测:胰腺取自成人脑死亡尸体,生前无糖尿病及相关病史(家属知情同意),胰腺进行修剪、灌注后,胰岛细胞消化收集中;COBE-2991细胞纯化机纯化胰岛细胞后;体外培养48h后6个步骤取样进行细菌性污染的鉴定,并作药敏实验。②在同样的制备过程中,分别采用青霉素 链霉素 两性霉素B或泰能 两性霉素B进行干预,未施加干预措施作为对照组。③胰岛细胞的功能测定:采用体外胰岛素释放试验,测定纯化培养后未被污染的胰岛细胞功能。结果:①3组不同处理的胰岛细胞(纯化培养后)的污染率:未用抗生素的对照组为100%、青霉素 链霉素 两性霉素B组为50%,泰能 两性霉素B组为0,3组污染率差异有显著性(P<0.05)。②取培养后未污染的胰岛细胞行体外胰岛素释放试验结果:青霉素 链霉素 两性霉素B组、泰能 两性霉素B组两组胰岛细胞高糖时胰岛素释放量分别是低糖的2.41和2.36倍(t=4.76,P<0.05),提示青霉素 链霉素 两性霉素B组、泰能 两性霉素B组胰岛细胞分泌功能良好。两组间的胰岛素敏感指数(ISI)在统计学上差异也无显著性(t=0.31,P=0.76),说明两组抗生素对胰岛细胞功能的影响无差异。结论:胰岛细胞制备过程中细菌性污染严重。泰能 两性霉素B的联合应用能有效清除胰岛细胞制备过程中出现的细菌性污染,经泰能 两性霉素B处理的胰岛细胞行胰岛素释放试验表明分泌功能良好。     

5-氮-2-脱氧胞苷体内外抑制胆管癌细胞生长的研究

目的研究甲基化抑制剂 5 氮 2 脱氧胞苷在体内、体外对胆管癌细胞株生长的抑制作用。方法应用MTT法检测 5 氮 2 脱氧胞苷及其他抗肿瘤药物对胆管癌细胞株QBC939存活率的影响 ,应用流式细胞术观察细胞生长周期及凋亡率的变化。观察 5 氮 2 脱氧胞苷对裸鼠皮下移植肿瘤生长的影响。结果 5 氮 2 脱氧胞苷抑制胆管癌细胞QBC939的增殖 ,细胞周期阻滞于G1期 ,凋亡增加。以上作用与药物浓度及所用时间在一定范围内呈正相关。 5 氮 2 脱氧胞苷与其他肿瘤化疗药物协同可增强对胆管癌细胞的杀伤作用。经 5 氮 2 脱氧胞苷处理后 ,QBC939在裸鼠体内成瘤率下降 ,肿瘤体积缩小。结论 5 氮 2 脱氧胞苷诱导胆管癌细胞凋亡 ,抑制肿瘤生长 ,与其他肿瘤化疗药物有协同作用。     

高原现场家兔肝细胞体外培养气相条件初探

动物细胞体外培养在医学、生物学等研究领域中已成为一种基本实验技术。高原由于低大气压等特定物理条件，体外细胞培养可能有其特殊性。本研究拟通过家兔肝细胞的体外原代培养，初步探索在高原现场进行体外细胞培养的培养方式及气相条件。     

不同剂量γ刀照射C6细胞的实验研究

胶质瘤经手术加放疗或化疗等治疗措施依然奏效甚微[1]难以完全治愈。γ刀以其高度的精确性为治疗颅内一些疾病开辟了新途径 ,但对于胶质瘤的治疗效果尚有争议[2、3 ]。对γ刀治疗后胶质瘤细胞变化的研究 ,报道极少[4]。因此有必要对其进行较深入地探讨 ,为临床提供尽可能详尽的依据。一、材料和方法1 主要试剂及来源 :IMDM培养基为美国产品 ,小牛血清为长春生物制品所生产 ;C myc(c 3 3 )鼠抗鼠抗体为美国SantaCruz公司产品 ;过氧化酶标记的链霉卵白素染色试剂盒 (SP90 0 0 )为北京中山公司产品。2 细胞培养 :C6细胞购自美国TACC(Poc…     

烧伤创面水疱液对人骨髓间充质干细胞体外培养及表型转化的影响

Objective To study the effect of blister fluid obtained from burn patient on human MSCs in vitro and its phenotypic modulation in culture. Methods Blister fluid from burn patients was col-lected at 12, 24, 48 post burn hour (PBH). The human MSCs were isolated, cultured, amplified and iden-tified in vitro, then were divided into A (culture with 20% blister fluid collected at 12 PBH) , B (culture with 20% blister fluid collected at 24 PBH) , C (culture with 20% blister fluid collected at 48 PBH), N (with ordinary culture medium) groups. The growth of MSCs and micro-organisms in blister fluid were ob-served. Positive expression rates of CD44 and CK7 were detected by flow cytometry after culture for 8 days. Results Bacterial and fungal growths were absent in 15 blister fluid samples. There was no obvious change in MSC morphology in each group. Compared with that of N group, the number of MSCs in A, B, C groups was decreased, especially in C group. CD44 positive expression rate in A, B, C groups was ( 83.0± 3.1)%, (77.2±2.9)% and (65.1±2.3)%, respectively,which was obviously lower than that in N group [(89.5±3.2)%, P <0.01]. CK7 positive expression rate in A, B, C groups was (24.06± 0.11) % , (16.41±0.09) % and (4.48±0.07) % , respectively, which was obviously higher than that in N group [(3.87±0.04)% , P<0.01 ]. Conclusions Burn blister fluid can obviously inhibit the growth of human MSC cultured in vitro, and may promote modulation of its phenotype to certain extent.     

骨膜成骨细胞的分离培养及其成骨作用的放射自显影研究

取４只家兔胫前骨膜进行成骨细胞分离培养，用３Ｈ－ＴｄＲ标记，然后回植于同一供体的皮下、耳软骨缺损处及挠骨缺损处。分别在２周和４周后处死动物，原位取材，用放射自显影方法观察种植细胞的转归。结果表明，种植的细胞在皮下转化为类骨组织；在软骨缺损处转化为软骨组织；而在骨缺损处则转化为典型的骨组织。提示用骨膜分离培养成骨细胞，回植体内，有可能用于骨缺损和软骨缺损的修复。     

生长曲线拟合及细胞群体倍增时间的简化计算

0　引言　目前细胞群体倍增时间的计算方法有两种 ,而我们基于计数法绘制细胞生长曲线所获数据 ,利用 SPSS软件进行理论推导而得的理论倍增时间计算方法计算相对简单实用 ,现介绍如下 .1　材料和方法　指数函数拟合模型 (Exponential)中 ,Y=b0 × 2 b1 ×t要比 Y=b0 × eb1 × t更符合细胞的生物学特性 ,因为细胞增殖为二分裂生长 .Y=b0 × 2 b1 ×t在 SPSS的曲线模拟功能选项中并没有此函数拟合模型 ,故将原始数据的自变量时间变量作一转换 ,即将原自变量乘以 ln2即可 ,理论依据为Y=b0 × 2 b1 × t=b0 × eb1 × tln2 =b0 × eb1 ×…     

培养细胞中琥珀酸脱氢酶和乳酸脱氢酶的简单显示方法

琥珀酸脱氢酶(SDH)和乳酸脱氢酶(LDH)的组织化学显示方法在许多组织化学手册中均有记载,但这些方法都有一个突出的缺点,即需频繁配液并且所配制的孵育液只能一次性消耗、不能长期保存.本文介绍一种新的琥珀酸脱氢酶和乳酸脱氢酶的显示方法,解决了以上矛盾,特别是对培养的单层细胞效果更好.1 材料与方法1.1 细胞培养 将小鼠成纤维细胞株3T3培养到3×3mm的小玻璃盖片上,培养液为DME外加入10%的小牛血清,待细胞贴壁长满盖片的70%左右时,取出盖片用无钙镁的Hank液洗去培养液中的血清,丙酮4℃下固定10分钟,低温储存备用.     

地塞米松对小鼠胚胎腭胚胎腭突间充质细胞增殖的细胞

目的 探讨地塞米松对小鼠胚胎腭突间充质（EPM）细胞增殖的影响。方法 在显微镜下解剖妊娠第13d的鼠胚腭突，用0．25％胰蛋白酶刊物消化获得游离分散的EPM细胞，在DEMF培养基中进行培养，并采用反复贴壁纯化EPM细胞。在培养基中加入10^-6M地塞米松，采用AgNOR染色、Feulen染色及透射电子量显微镜观察，检测地塞米松对EPM细胞增殖功能力的影响。结果 地塞米松处理的EPM细胞银梁颗粒数减少（P＜0．01），核面积比及DNA合成能力下降（P＜0．01），胞浆内线粒体数目减少，粗面内质网肿胀。结论 地塞米松对EPM细胞的增殖及生物合成有明显的抑制作用，影响腭突的正常发育，是腭裂发生的机制之一。     

成鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的:探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外培养和向神经元样细胞分化的能力.方法:利用Percoll分离液(1.073×103g/L)梯度分离成年大鼠MSCs,采用3种不同的方法对其诱导分化,免疫细胞化学方法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、星形胶质细胞特异性标志(GFAP)和神经前体细胞(Nestin)的表达.结果:成功进行了成年大鼠MSCs的原代和传代培养,3种诱导方法均能使MSCs分化为神经元样细胞,都能表达NSE、NF和Nestin,而不表达GFAP.结论:MSCs能在体外分离、扩增、传代,并能向非间充类细胞分化.