兔关节软骨细胞的分离、培养和形态学特征

[目的]探讨兔关节软骨细胞的分离、培养方法,观察单层高浓度培养时细胞表型表达情况.[方法]无菌条件下,从 2周龄新西兰白兔的颞颌关节及四肢关节髁突面削取软骨片,采用机械-酶消化法分离软骨细胞,经台盼蓝拒染计数,将细胞按 1× 106个 /孔接种于 6孔培养板,传代培养,描绘生长曲线.利用相差显微镜及透射电镜观察细胞形态.应用甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组化对细胞进行鉴定.[结果]每克软骨能获取 1 5× 106个软骨细胞,活性率为 95%.培养 2～ 3 d,细胞贴壁、变形,呈多角形; 8 d左右,细胞融合成层.透射电镜观察显示细胞核圆形,有丰富的粗面内质网、高尔基体及分泌的基质成分.甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色阳性.细胞传至 5代后,出现"成纤维细胞样".[结论]本研究建立了简单易行的软骨细胞分离、培养方法;初代、第 2代细胞生长良好,适合于实验研究;软骨细胞 5代培养后,细胞表型发生改变.     

小鼠原始生殖细胞源胚胎干细胞的分离培养和建系

目的 :对小鼠胚胎干细胞分离材料的获取及处理、胚胎干细胞分化抑制培养、细胞系的建立及保存所用技术进行探讨。方法 :取胎鼠生殖嵴及其周围组织 ,采用胎鼠的胚胎干细胞与其成纤维细胞共培养的方式进行。结果 :分离得到大量原始生殖细胞(PGCs)集落。多次克隆传代具有胚胎干 (ES)细胞的诸多特征 ,如有连续传代的能力 (有两组分别传至 3代和 4代 ) ,有典型鸟巢状结构 ,AKP染色阳性 ,体外分化实验具有形成类胚体的能力。结论 :从胎鼠生殖嵴中能够获得大量的ES细胞。采用的胚胎干细胞与其成纤维细胞共培养的方式进行胚胎干细胞的分离培养和建系是可行的     

氧化应激诱导神经细胞凋亡与c-Myc、Fas-FasL、核因子-κB关系的研究

目的　探讨氧化应激诱导神经细胞凋亡与c -Myc、Fas -FasL、核因子 -κB(NF -κB)蛋白表达的关系。　方法　将分离培养的新生SD大鼠大脑皮质神经细胞分为 :A组 (对照组 )、B组 (缺氧处理 )、C组 (低浓度H2 O2 处理 )、D组 [缺氧 +超氧化物歧化酶 (SOD)处理 ]、E组 (H2 O2 +SOD处理 ) ,利用琼脂糖凝胶电泳、末端脱氧核苷酸介导的X -dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)、流式细胞仪测定细胞凋亡 ,免疫组织化学方法 (SP法 )测定细胞c -Myc、Fas -FasL、NF -κB蛋白表达。结果　B组和C组神经细胞凋亡率分别为A组的 6倍和 8倍 (P <0 .0 1) ;A组c -Myc、Fas-FasL、NF -κB阴性表达 ,其余各组均有阳性表达 ;SOD在降低B组和C组细胞c-Myc、Fas-FasL、NF -κB表达强度的同时 ,细胞凋亡率也随之降低。　结论　氧化应激诱导神经细胞凋亡可能与NF -κB的激活 ,启动凋亡相关基因c -Myc、Fas -FasL有关。     

大鼠自体异体表皮细胞悬液混合移植的实验研究

目的　探讨自、异体表皮细胞悬液混合移植技术在创面修复中的应用。　方法　 30只大鼠随机配成 15对后 ,分成细胞悬液移植组 (A组 ,10对 )和细胞膜片移植组 (B组 ,5对 )。取每只大鼠全厚皮 ,分离表皮细胞 ,并根据配对情况按 1∶1的细胞比例混合 ,体外常规培养。 4d后收获A组混合细胞悬液 ,14d后收获B组混合细胞膜片。将此细胞悬液和膜片分别转移至A、B组相应供体大鼠的去全厚皮创面。随后A组每对大鼠的创面交叉覆盖配对方的异体全厚皮 ;B组创面覆盖胶原膜及“优妥”敷料。比较移植后 2～ 3周两组的创面修复情况。　结果　术后 2～ 3周 ,A组创面大多愈合 ,表面光滑 ,与皮下连接紧密。术后第 5天 ,B组创面部分细胞膜片脱落 ,部分成活 ,膜片成活的创面后期再次出现小创面 ,经久不愈。　结论　自、异体表皮细胞悬液混合移植是一种可行的、体内构建皮肤、修复创面的方法。     

利用CO_2培养箱敞开式不换液羊水细胞培养方法的改进

本文对羊水培养方法进行了改进研究,探讨了培养液 pH 值对羊水细胞生长的影响。结果表明用 CO_2培养箱敞开培养,在 CO_2浓度为5.4%时羊水细胞最容易贴壁生长,一次性加液中间不换液可保持细胞生长的微环境稳定,是羊水细胞培养成功的关键。     

备用根大鼠脊髓后角提取液中神经营养活性组分的分离及生物活性测定

制作备用根大鼠脊髓后角提取液，取其分子量大于10kD的组分进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，发现手术侧和非手术侧的电泳区带数目大致相同，但手术侧样品的第四条蛋白质区带扫描的吸收峰面积百分比大于非手术侧样品的第四条区带，两者在量上可能有差别。将手术侧样品经交联葡聚精G-75凝胶层析，得到两个洗脱峰．第一峰洗脱液有促进体外培养的背根节神经元存活及其突起生长的作用，其电泳分析显示4条主带，分子量在40～80kD之间．实验结果提示部分去传入纤维支配的脊髓后角组织含有神经营养活性物质，该物质的分子量约在40～78kD之间．     

肾小球系膜细胞和上皮细胞的相互作用

了解肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）和上皮细胞（ＧＥＣ）的相互作用。方法运用肾小球细胞体外培养方法和双同位素标记技术，观察阿霉素肾病大鼠ＧＭＣ条件培养液（ＧＭＣ－ＣＭ）对正常大鼠ＧＥＣ掺入３５Ｓ、３Ｈ－亮氨酸和３Ｈ－ＴｄＲ的影响，以及肾病大鼠ＧＥＣ－ＣＭ对正常大鼠ＧＭＣ掺入３Ｈ－ＴｄＲ的作用。结果肾病极期的ＧＭＣ－ＣＭ明显促进了ＧＥＣ增殖及合成含硫化合物、蛋白质的功能，反之肾病极期ＧＥＣ－ＣＭ则明显刺激了ＧＭＣ增殖。结论ＧＭＣ和ＧＥＣ可通过其可溶性产物相互作用。     

BGM细胞,Hela细胞,HEL细胞与A549细胞对HSV—1敏感性的比较

用单纯疱疹病毒－１型（ＨＳＶ－１）感染ＢＧＭ细胞、Ｈｅｌａ细胞、ＨＥＬ细胞及Ａ５４９细胞，利用空斑试验，比较四种细胞对ＨＳＶ－１的敏感性。结果示，ＨＳＶ－１在ＢＧＭ细胞培养中空斑形成单位（ＰＦＵ）数最多，出现细胞病变的时间早。提示ＢＧＭ细胞可为ＨＳＶ－１的分离培养提供一种新的、敏感细胞。     

用漏出液代替标准培养基培养人体外周血淋巴细胞

用漏出液代替标准培养基培养人体外周血淋巴细胞生物学教研室肖桂芝，刘朝晖，冯立新关键词培养基，淋巴细胞，有丝分裂指数培养人体外周血淋巴细胞一般是用Ｍ１９９、ＲＰＭＩ１６４０、ＨａｍＦ１０等标准培养基，但标准培养基均由国外购进，价格比较昂贵，不利于基层及...