人端粒酶逆转录酶基因转染人髓核细胞的安全性研究

目的评价人端粒酶逆转录酶（humantelomerasereverse transeriptase,hTERT）基因转染对人椎间盘髓核细胞“安全性”的影响．方法将构建好的重组腺相关病毒人端粒酶逆转录酶基因（recombinantadeno—associatedvirusvee—tor—nlediatedhTERTgene,rAAV—hTERT）按感染复数（muhiplieityofinfection,MOI）10^5v．g每细胞转染体外培养二代髓核细胞。没立rAAV—hTERT转染组,AAV空病毒转染组及未转染组;利用RT—PCR及Western—blot检测转染后hTERT基闪的表达;对体外培养120d的细胞进行染色体核型分析;将3组细胞（100μL,3×10^7／mL）分别注入裸鼠腋下检测其成瘤性,以人Hela细胞为阳性成瘤实验对照。结果成功检测出rAAV—hTERT转染髓核细胞后hTERT轼因的表达;G-带核型分析未见染色体结构异常克隆;3组细胞均未观察到裸鼠体内肿瘤形成。结论rAAV—hTERT能成功转染人惟问盘髓核细胞并IF确表达,rAAV—hTERT转染髓核细胞在有限的体外培养过程中是安全的,可为进一步的在体研究提供安伞性证据.     

端粒重复序列结合因子1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义

目的研究端粒重复序列结合因子1（TRF1）蛋白在胃癌中的表达及其与胃癌发生发展的关系。方法用Westerllblot方法检测TRFI蛋白在10例正常胃黏膜、15例胃癌前病变、20例胃癌、5例淋巴结转移胃癌组织中的表达。结果TRFI蛋白在癌前病变组、胃癌组、转移癌组比正常组表达高；胃癌组、转移癌组比癌前病变组表达高（P〈0．01）：存胃癌组织中，TRF1蛋白的表达与胃癌分化程度有关，分化越差，表达越高（P〈0．01）。结论TRFI蛋门可能在胃癌的发生发展中起重要作用。     

Tankyrase1、TRF1及hTERT在肝细胞癌中的表达及意义

目的 检测端锚聚合酶1(Tankyrase 1)、端粒重复序列结合因子1(TRF1)及端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在肝细胞癌(HCC)组织中的表达,探讨其在肝癌发生过程中的作用及其临床意义.方法 应用RT-PCR技术对30例HCC及癌旁组织中Tankyrage1、TRF1及hTERT mR-NA的表达水平进行检测,分析其表达与HCC临床病理特征的关系.结果 HCC组织中Tankyrage1及hTERT mRNA表达相对强度明显高于癌旁组织(P<0.05);TRF1在肝癌组织中的表达相对强度明显低于癌旁组织(P<0.05);HCC组织中Tankyrase1及TRF1表达与年龄、性别、肝硬化、HbsAg(+)、肿瘤大小、肿瘤个数、术前Child-Push分级、TNM分期、Edmondson分级和血清AFP值均无显著相关(P>0.05);在HCC中Tankyrage1 mRNA和hTERT mRNA的表达呈正相关(r=0.519),Tankyrage1与TRF1 mRNA表达呈负相关(r=-0.395),TRF1 mRNA和hTERT mRNA表达呈负相关(r=-0.472).结论 HCC中Tankyragel表达增加和TRF1表达下降可能是hTERT表达增加的原因之一,其对肝癌的发生可能起重要作用.     

肝癌组织端粒酶逆转录酶hTERT基因及GGT-mRNA-H亚型表达与肝癌早期诊断的研究

目的：研究肝癌组织中端粒酶逆转录酶hTERT基因及谷氨酰转移酶GGTmRNA-H亚型表达，探讨其在肝癌早期诊断中的意义。方法：应用RT—PCR法，检测65例原发性肝癌患者癌组织及癌周组织、108例良性肝病肝组织、6例健康对照肝组织的hTERT与GGTmRNA—H亚型，观察这两种基因的表达情况。结果：在65例原发性肝癌中，癌组织hTERT阳性56例（86．2％），GGTmRNA-H亚型阳性6l例（93．8％），AFP阳性40例（61．5％）（P〈0．05）；hTERT在20例小肝癌癌组织阳性表达16例（80．0％），GGTmRNA—H亚型阳性表达18例（90．0％），与健康对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。急慢性肝炎组、肝硬化组与健康对照组比较，端粒酶逆转录酶、GGTmRNA-H亚型阳性表达率虽明显升高，但其差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：肝癌组织中hTERT、GGTmRNA-H亚型联合分析可弥补AFP检测的不足，对提高肝癌、癌前病变的早期诊断具有重要意义。小肝癌中端粒酶活性增高在癌形成中扮演重要的角色。hTERT基因检测比AFP更敏感、特异性更高，有望成为肝癌早期诊断的理想指标。     

端粒酶在大鼠胚胎神经干细胞的表达及其生物学特性

目的观察Wistar大鼠胚胎神经干细胞及其分化细胞的端粒酶活性，探讨神经干细胞维持其生物学特性的分子生物学基础及神经干细胞分化调控的内在机制。方法显微镜下分离大鼠胚胎室管膜下区细胞，在含生长因子的神经干细胞完全培养液中培养形成神经干细胞，然后在不含生长因子而含10％血清培养液中分化14～16d，应用改良的端粒重复序列扩增法(TRAP)研究神经干细胞及其分化细胞的端粒酶活性。结果Wistar大鼠胚胎神经干细胞表达较强的端粒酶活性，而分化后的细胞则不再表达端粒酶活性。结论端粒酶活性的改变可能是胚胎神经干细胞诱导分化的机制。随着端粒酶活性的逐渐下降，胚胎神经干细胞随之分化为具有一定生物学特性的细胞。     

由软组织推断个体年龄方法研究综述

年龄推断是法医学个体识别的重要内容.本文介绍了有别于传统用硬组织形态学方法推断年龄的三类用软组织推断年龄的方法,1)软组织的颜色改变;2)氨基酸构型比;3)DNA分析技术.阐述了这些方法的原理,并对软组织年龄推断的研究方法进行了展望.     

端粒、端粒酶与肿瘤

早在 2 0世纪 30年代 ,遗传学家Ｍｕｌｌｅｒ和ＭｃＣｌｉｎｔｏｃｋ就提出了端粒 (ｔｅｌｏｍｅｒｅ)的概念 ,70年代Ｇｒｅｉｄｅｒ和Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ在四膜虫中证实了这种端粒结构为简单的ＴＴＧＧＧＧ核苷酸重复序列[1 ] ,1 984年Ｇｒｅｉｄｅｒ和Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ在四膜虫中发现了端粒酶(ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ) [2 ] 。现在端粒和端粒酶的研究十分活跃 ,我们就其一些进展及与肿瘤发生的关系予以阐述。1　端粒 (ｔｅｌｏｍｅｒｅ)端粒是位于真核细胞染色体末端的一种特殊结构 ,它是由染色体末端ＤＮＡ和末端结合蛋白形成的复合体 ,7…     

不同治则代表方药对胃癌BGC细胞株细胞凋亡及端粒酶活性的影响

目的:初步探讨不同治则代表方药对人胃癌BGC细胞株细胞凋亡和端粒酶活性的影响。方法:不同治则代表方药含药血清作用于BGC细胞48 h,以流式细胞术检测细胞凋亡率及端粒酶活性。结果:各含药血清作用于BGC细胞48 h后,凋亡率均有不同程度增加、端粒酶活性均有不同程度降低。但凋亡率、端粒酶活性与含药血清浓度不完全成正比。结论:促进BGC细胞凋亡并抑制端粒酶活性,可能是不同治则代表方药抑制BGC细胞增殖的共同作用机制之一。     

核酶对肝癌SMMC-7721细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的:观察针对人端粒酶RNA模板区的核酶对肝癌细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法:利用脂质体Lipofectamine介导,将已构建好的带有端粒酶核酶基因的重组质粒pBBS212Rz及空载质粒pBBS212转染肝癌SMMC-7721细胞,采用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,用倒置相差显微镜及流式细胞仪观察细胞生长和凋亡情况。结果:重组质粒pBBS212Rz转染的肝癌SMMC-7721细胞的端粒酶活性明显下降,细胞生长速度明显变慢,凋亡加速。结论:端粒酶核酶对肝癌细胞端粒酶活性和细胞生长有抑制作用,可望成为肝癌基因治疗的方法。     

端粒，端粒酶的研究进展及与妇科肿瘤的关系

端粒和端粒酶活性的研究是近年来肿瘤细胞学、肿瘤分子生物学的研究热点。端粒 (ｔｅｌｏｍｅｒｅ)长度与细胞寿命控制有关 ,而端粒酶 (ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ)活化又与细胞永生化 (ｉｍｍｏｒｔａｌｉ ｔｙ)有关 ,当端粒酶活化后 ,细胞染色体端粒倾向于稳定而不再丢失 ,细胞进入永生化状态 ,这一状态是细胞癌变的实质[1] 。近年来所有人类恶性肿瘤组织及人工培养的恶性肿瘤细胞株中均测出端粒酶的活性 ,而正常组织细胞多为阴性 ,表明端粒酶活化在肿瘤的发生、发展中起着重要的作用。1　 端粒 ,端粒酶的发现及其作用1.1　端粒　早在 30年代 ,…