TNF—α的生物活性检测法与酶联免疫吸附法比较

比较了生物活性检测法与酶联免疫吸附法对大鼠腹腔巨噬细胞分泌的肿瘤坏死因子－α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α，ＴＮＦ－α）的检测。在静息Ｍ＋φ培养上清液中，用两种方法的未测到ＴＮＦ－α；而脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ，１００μｇ／Ｌ）刺激组，用两种方法均测到大量ＴＮＦ－α；如ＬＰＳ与秋水仙碱（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎ，Ｃｏｌ）联用，ＴＮＦ－α的产生受到抑制，ＢＡ法检测     

磷酸钙骨水泥的研究和临床应用进展

近年来，生物活性材料在医学领域中获得了广泛应用，其中对骨缺损如何填充和修复一直是生物材料的研究热点。磷酸钙骨水泥（Calcium Phosphate Cement．简称CPC）是一种自固型非陶瓷型羟基磷灰石类人工骨材料，1985年由Brown和Chow首先研制出用于骨移植和修复。由于其具有良好的生物相容性和骨传导性、生物安全性、能任意塑形、缓慢降解、在固化过程中放热量低，CPC适应了临床修复骨缺损的需要。随着对CPC的研究进一步深入和展开，取得了许多成果，现就目前磷酸钙骨水泥的研究和临床应用进展综述如下。     

突变型天花粉蛋白TCSYFF81-83ACS的生物活性及免疫原性分析

目的:构建一种突变型天花粉蛋白(trichosanthin,TCS),并对其生物活性和免疫原性进行分析。方法:选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83)进行定点突变,并将所构建的突变体(TCSYFF81-83ACS)在大肠杆菌中进行表达及纯化。随后与野生型TCS(wTCS)比较,分析其DNA酶活性、致核糖体失活活性、免疫原性和急性毒性。结果:初步检测显示,所构建的突变型TCS活性与wTCS活性几乎相当,而其免疫原性有所降低。结论:通过该方法改造TCS是可行的,有可能为抗HIV治疗提供一种高效、低毒、廉价的药物。     

电化学共沉积制备有机高聚物/钙磷复合陶瓷膜层--Ⅱ XPS、SIMS表征及力学性能研究

通过电化学共沉积方法制备具有生物活性的有机高聚物／钙磷陶瓷复合膜层。用XPS、SIMS等对复合膜层的化学组分进行表征，证明少量有机高聚物可能在分子层次上掺杂形成有机高聚物／羟基磷灰石复合膜层。对电沉积HAP陶瓷膜层进行微刮痕实验表明，陶瓷膜层与金属基体的结合力得到显著改善。     

肾上腺髓质素：一种新的生物活性肽

肾上腺髓质素：一种新的生物活性肽第三军医大学病理生理学教研室、高原医学研究室（重庆６３００３８）高钰琪肾上腺髓质素（Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｉｎ，ＡＤＭ）是由日本学者近年从人肾上腺嗜铬细胞瘤中分离纯化出的一种新的生物活性肽。人ＡＤＭ（ｈＡＤＭ）含有５２...     

人趋化细胞因子超家族研究进展

人趋化细胞因子超家族是由分子量８－１８ＫＤ小分子蛋白组成的一大类细胞因子，主要由白细胞分泌，具有对中性粒细胞，单核细胞，淋巴细胞，嗜酸性细胞的趋化和激活性，在机体防御，抗感染，抗肿瘤等方面起重要作用。因此，对趋化细胞因子超家族成员的结构和功能研究具有较大的理论和应用价值。     

脂肪细胞新蛋白My027原核表达、纯化及生物活性研究

目的通过原核表达获得大量脂肪新蛋白质My027,并在体外初步研究其生物活性。方法RT-PCR法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-My027。转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,经亲和层析法获得融合蛋白,利用SDS-PAGE、Western印迹及质谱进行鉴定。在还原性谷胱甘肽存在的条件下,将纯化得到的融合蛋白作用于乙二醛酶Ⅰ的底物甲基乙二醛,通过分光光度法检测产物乳酸谷胱甘肽的生成。结果融合蛋白以水溶形式分泌于大肠埃希菌BL-21胞浆中,纯化后的目的蛋白SDS-PAGE、Western印迹及质谱证实高效表达,氨基酸序列正确。结论人脂肪细胞新蛋白质My027在pGEX-4T-2原核表达载体中可获高效表达,所纯化蛋白具有类似于乙二醛酶Ⅰ的作用。     

抗癌生物活性肽对人乳腺癌nm231细胞的增殖抑制作用

 目的 探讨抗癌生物活性肽（ACBP）对人乳腺癌 nm231细胞的作用及其机制。 方法 nm231 细胞经不同浓度（0.05、0.10、0.20、 0.25 µg/ml）ACBP 作用 72 h，以噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖活性。以 0.25 µg/ml 的 ACBP 分别作用于 nm231 细胞 4、6、24、48、72 h，行光镜和透射电镜（作用 48 h 细胞）观察。应用 DNA 凝胶电泳和磷脂结合蛋白 V（Annexin V，AV）/碘化丙啶（PI）双标记染色流式细胞术等方法，观察 0.25 µg/ml 的 ACBP 作用不同时间对nm231 细胞凋亡发生及作用 48 h 对细胞周期的影响。以上各项检测均设以 RPMI 1640 培养液取代 ACBP 的对照组。 结果 浓度为 0.1 µg/ml 的 ACBP 即对 nm231 细胞的增殖有明显抑制作用，抑制率为 10.3%，抑制作用具有浓度依赖性，ACBP 浓度为 0.25 µg/ml 时抑制率达 35.1%。光镜观察显示，经 0.25 µg/ml 的 ACBP 作用 24 h，细胞出现凋亡特征；作用 48 h，光镜及电镜下均可见大量的典型凋亡细胞。DNA 凝胶电泳显示，经 0.25 µg/ml 的ACBP 作用 24 h 的细胞出现 DNA 断裂；作用 48 h 的细胞出现典型的梯形电泳图谱。流式细胞术分析显示，ACBP 作用后AV（+）/ PI（－）细胞和 AV（+）/ PI（+）细胞比例均随培养时间延长而增大；作用 48 h 的 nm231细胞 G0/1 期细胞比例高于对照组（P < 0.01），而细胞增殖指数低于对照组（P < 0.01）。 结论 ACBP 可抑制 nm231 细胞的增殖，其机制与抑制nm231 细胞的 DNA 合成和诱导细胞凋亡相关。     

人λ-干扰素在BHK-21中的表达及生物学活性的研究

目的:研究HuIFN-λ1和HuIFN-λ2真核细胞重组表达及其生物学活性.方法:用水疱性口炎病毒(VSV)刺激人宫颈癌HeLa细胞, 用RT-PCR克隆HuIFN-λ1和HuIFN-λ2基因, 与PCAGG-EGFP真核表达载体连接, 构建重组体PCAGG-HuIFN-λ1和PCAGG-HuIFN-λ2并进行鉴定, 后在BHK-21细胞进行表达, 采用VSV*GFP于人肺腺癌A549上进行表达产物抗病毒活性测定;并通过已构建的MDBK-Mxp-Luc细胞系对HuIFN-λ1和HuIFN-λ2诱导MxA抗病毒蛋白产生的特性进行研究.结果:HuIFN-λ1-PMD18-T Vector和HuIFN-λ2-PMD18-T Vector的SacⅠ、XhoⅠ和SacⅠ和SalⅠ双酶切鉴定, 均出现610 bp大小的带, 测序示与GenBank上报道的序列完全一致.PCAGG-HuIFN-λ1活性104 IU/mL, PCAGG-HuIFN-λ2活性为102 IU/mL, 且PCAGG-HuIFN-λ1诱导Mx抗病毒蛋白的表达一定时间内随时间延长表达不断增强, 9～12 h达高峰, 24 h后消失(P＜0.05).结论:成功构建了PCAGG-HuIFN-λ1PCAGG-HuIFN-λ2 的真核表达载体并在BHK-21细胞中得到表达, 其抗病毒活性与诱导Mx抗病毒蛋白密切相关.