E-cadherin和β-catenin蛋白的表达与胃黏膜肠上皮化生及胃癌的关系

目的：探讨E-cadherin和β-catenin蛋白的表达与胃黏膜肠上皮化生及胃癌的关系。方法：观察肠上皮化生的胃黏膜形态特点,应用免疫组织化学Envision法分别检测30例单纯肠上皮化生,38例不典型肠上皮化生和55例胃癌组织中E-cadherin和β-catenin蛋白的表达。结果：E-cadherin和β-catenin蛋白在胃癌组织中的减少表达率显著高于单纯肠上皮化生组织（P〈0.05）,而与不典型肠上皮化生组织比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：E-cadherin和β-catenin蛋白参与了胃黏膜从肠上皮化生到胃癌的转化过程,不典型肠上皮化生与胃癌关系密切,属于癌前病变范畴。     

CO_2气腹对大鼠重症急性胰腺炎胰腺病理变化及白介素1、2、6、10表达的影响

目的:探讨腹腔镜手术时CO2气腹对SD大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)胰腺局部病变及血淀粉酶、炎症细胞因子白细胞介素1、2、6、10的影响。方法:随机将雄性SD大鼠50只分为3组:Ⅰ组20只(CO2组),胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠,制备SAP动物模型,用气腹机向大鼠腹腔内注入CO2,压力12mm Hg,维持30min;Ⅱ组20只建立SAP模型后关腹,不充入CO2;Ⅲ组10只(对照组)开腹翻动胰腺后关腹。各组均于术后2.5h处死动物,对胰腺组织行病理学检查,并测定血淀粉酶、IL-1、IL-2、IL-6及IL-10的变化。结果:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的病理组织学评分分别为(1.900±0.370)、(1.750±0.259)及(0.000±0.000);淀粉酶(U/L)为(6 769±2 216)、(5 241±2 048)及(1 610±414);IL-1(pg/ml)为(0.241±0.052)、(0.320±0.067)及(0.143±0.057);IL-2(pg/ml)为(4.480±1.582)、(5.288±0.973)及(4.762±0.812);IL-6(pg/ml)为(176.39±41.75)、(206.10±37.29)及(115.14±24.96);IL-10(pg/ml)为(171.10±28.73)、(182.26±28.09)及(97.79±20.65)。与Ⅱ组相比,Ⅰ组的IL-1及IL-6表达明显降低(P<0.05),血清淀粉酶、IL-2、IL-10及胰腺病理组织学评分差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CO2气腹对SD大鼠SAP胰腺病理变化及白介素1、2、6、10表达改变无不利影响。     

1，25（OH）2D3对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞维生素D受体及肿瘤坏死因子α、转化生长因子β1表达的影响

目的 研究脂多糖（LPS）对大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）维生素D受体(VDR)及肿瘤坏死因子α（TNF-α）、转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响,从而为1,25（OH）2D3在腹膜透析相关腹膜炎中的应用提供理论依据。 方法 胰蛋白酶消化法原代培养腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组：(1)正常对照组;(2)脂多糖组：不同浓度的脂多糖（1、10、100 mg/L）分别作用6 h;10 mg/L脂多糖分别作用2、6、12 h;(3)1,25（OH）2D3作用组：10 mg/L脂多糖预孵育2 h后,加1,25（OH）2D3(10－8 mol/L、10－7 mol/L、10－6 mol/L)再作用6 h。RT-PCR法检测VDR mRNA的表达;Western印迹法检测VDR蛋白表达;ELISA法检测上清液TNF-α、TGF-β1的表达。 结果 与对照组相比,LPS组RPMC VDR mRNA和蛋白表达均显著下调（均P < 0.05）。与LPS组相比,1,25（OH）2D3组VDR mRNA和蛋白表达均显著上调（均P < 0.01）。LPS组上清液中TNF-α、TGF-β1浓度均显著高于对照组（均P < 0.01）;1,25（OH）2D3组上清液中TNF-α、TGF-β1浓度均显著低于LPS组（均P < 0.01）。 结论 LPS能下调RPMC VDR mRNA和蛋白的表达,上调TNF-α、TGF-β1表达。1,25（OH）2D3可逆转LPS的作用,上调RPMC VDR mRNA和蛋白的表达,并下调TNF-α、TGF-β1表达。VDR对腹膜透析相关腹膜炎具有一定的保护作用,并具有抑制腹膜纤维化的作用。     

白细胞介素6对体外培养人脐动脉平滑肌细胞成骨样转化、钙化的影响

目的 研究白细胞介素6（IL-6）对体外培养人脐动脉平滑肌细胞（HUASMC）成骨样转化、钙化的作用及可能的信号通路。 方法 组织植块法原代培养HUASMC。培养基加入不同浓度重组人IL-6（rhIL-6）孵育细胞,设空白对照组。茜素红S钙沉积染色及甲氧-酚酞络合酮法检测细胞层钙盐含量。实时定量PCR、荧光定量法以及Western印迹法分别检测骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨桥蛋白（OPN）、骨形成蛋白2（BMP２）和骨保护素（OPG）基因以及蛋白表达。凝胶迁移滞后实验（EMSA）检测核心结合因子α1亚基（Cbfα1）的结合活力,以及分别应用p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂SB203580和蛋白激酶C二氢神经鞘氨醇（DHC）后Cbfα1的结合活力。 结果 rhIL-6 50 μg/L诱导12 d,细胞基质层茜素红S染色阳性。与对照组相比,细胞层钙盐含量在rhIL-6 10 μg/L组刺激9 d[（0.76±0.02） mmol/g蛋白]和12 d[（1.54±0.11） mmol/g蛋白]升高,50 μg/L组刺激6 d[（1.81±0.03） mmol/g蛋白]、9 d[（2.08±0.10） mmol/g蛋白]和12 d[（3.22±0.18） mmol/g蛋白]升高,并呈时间、剂量依赖地增加。rhIL-6 10 μg/L刺激12 h,BMP2 mRNA（3.04±0.07）和蛋白（8.14±0.41）及BAP mRNA（2.51±0.11）和蛋白（3.96±0.54）表达上调;刺激72 h,OPN mRNA（3.14±0.32）和蛋白（2.57±0.43）水平及OPG mRNA（4.06±0.24）和蛋白（3.46±0.34）水平上调。rhIL-6刺激6 h,Cbfα1结合活力增加;DHC能够部分抑制rhIL-6诱导的Cbfα1结合活力增加,SB203580没有明显作用。 结论 IL-6体外能够诱导HUASMC发生钙化和成骨样转分化,这可能是临床观察到IL-6与血管钙化相关的机制之一。IL-6的这一作用可能与细胞内蛋白激酶C通路的活化有关。     

内皮抑素在大鼠腹膜的表达及其与腹膜血管新生的关系

目的 研究大鼠腹膜血管内皮抑素（endostatin, ES）基因及蛋白表达与腹膜血管新生的关系。 方法 32只雄性SD大鼠,按随机数字表法分为正常组、肾衰竭非透析组（非腹透组）、1.5%腹膜透析组（1.5% PD组）、4.25%腹膜透析组（4.25% PD组）,每组8只。PD组经规律PD 28 d后,取各组大鼠新鲜腹膜组织,用RT-PCR检测ES mRNA表达;用组织免疫组化染色检测ES蛋白表达;以CD34染色观察腹膜组织毛细血管密度（MVD）。 结果 各组均有ES mRNA表达,正常组为0.47±0.05;非腹透组为0.45±0.04;1.5% PD组为0.46±0.04;4.25% PD组为0.47±0.03;各组表达差异无统计学意义。正常组ES蛋白表达积分0分;非腹透组积分2分;1.5%PD组积分4分;4.25%PD组呈高表达,积分9分。正常组MVD为3.13±1.13;非腹透组为5.13±1.14;1.5%PD组为9.00±1.51;4.25%PD组为10.75±1.83;组间差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 尿毒症状态和非生理性腹透液刺激可使大鼠腹膜组织ES蛋白表达升高,其在长期透析所致腹膜组织毛细血管生成增多中可能发挥一定的作用。     

剖宫产术患者瑞芬太尼辅助用药对新生儿的影响及其胎盘转移

目的 探讨剖宫产术患者瑞芬太尼辅助用药对新生儿的影响及其胎盘转移情况.方法 择期足月剖宫产术患者40例,初产,ASA Ⅰ级,年龄26～32岁,体重70～90 kg,随机分为2组(n=20),对照组(C组)和瑞芬太尼组(R组).于L3-4间隙穿刺行脊椎-硬膜外联合阻滞,控制阻滞平面上界T6-T8.R组靶控输注瑞芬太尼,血浆靶浓度1.5 ng/ml,C组按瑞芬太尼的血浆靶控模式和靶浓度输注生理盐水,血样采集完毕时停止输注.于入室平静5 min(T0)、切皮(T1)、胎儿娩出(T2)、子宫修补(T3)和关腹(T4)时记录MAP、HR、分钟通气量(MV)、呼吸频率(RR>、警觉,镇静评分(OAA/S评分);记录T0时和消毒前胎心率(FHR)、子宫切开到胎儿娩出时间(分娩时间)、新生儿体重、新生儿1、5 minApgar评分、1、24 h新生儿神经行为评分(NBNA)和患者不良反应发生情况.胎儿娩出后3 min内分别取脐动脉血(UA)、脐静脉血(UV)各2 ml,于足背动脉取母体动脉血(MA)2 ml,行血气分析,测定瑞芬太尼血浆浓度.结果 与C组和T0时比较,R组T1,2时OAMS评分降低(P<0.05).两组间MAP、HR、MV、RR、分娩时间、FHR、血气分析指标、新生儿体重、Apgar评分和NBNA评分的比较差异无统计学意义(P>0.05),且均在正常范围内.胎儿娩出时MA、UV及UA中瑞芬太尼血浆浓度分别为(0.85±0.31)、(0.57±0.12)、(0.22±0.09) ng/ml,CUV/CMA为0.67±0.41,CUA/CUV为0.39±0.08.结论 靶控输注瑞芬太尼(血浆靶浓度1.5 ng/ml)时,尽管瑞芬太尼可迅速进行胎盘转移,但进入胎儿体内后,可迅速被代谢或重分布,因而对新生儿无不良影响.     

不同血浆靶浓度瑞芬太尼对患儿吸入七氟烷诱导气管插管最低肺泡有效浓度的影响

目的 评价不同血浆靶浓度瑞芬太尼对患儿吸入七氟烷诱导气管插管最低肺泡有效浓度(MAC)的影响.方法 择期全麻患儿126例,年龄3～8岁,ASAⅠ或Ⅱ级,随机分为4组,对照组(C组,n=30);R1组(n=30)、R2组(n=30)和R3组(n=36)瑞芬太尼血浆靶浓度分别为1、2、3 ng/ml.均吸入5%七氟烷行麻醉诱导,睫毛反射消失后鼻腔置入导管连接气体分析仪,建立静脉通路,注射阿托品0.01 mg/kg,R1-3 组靶控输注瑞芬太尼.C组注射阿托品、R1-3组瑞芬太尼血浆浓度与效应室浓度达平衡后,采用改良序贯法进行试验,初始呼气末七氟烷浓度均为3.0%,相邻浓度比值为1.2,七氟烷呼气末浓度达到预定值并维持10 min后行气管插管.气管插管条件满意的标准:气管插管条件评分为6分.计算每组七氟烷MAC,并观察不良反应的发生情况.结果 C组、R1-3组患儿吸入七氟烷诱导气管插管的MAC分别为5%、3%、2%、1%,依次降低(P<0.01);所有患儿均无心动过缓、低血压等发生,R2组3例、R3组8例患儿因下颌松弛度差致喉镜无法置人或声门关闭,静脉注射罗库溴铵完成气管插管.结论 瑞芬太尼1 ng/ml可降低患儿吸入七氟烷诱导气管插管的最低肺泡有效浓度,且不良反应少.     

瑞芬太尼预先给药对大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡相关基因和炎性相关基因表达的影响

目的 探讨瑞芬太尼预先给药对大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡相关基因及炎性相关基因表达的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠24只,体重280～320 g,采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注45 min的方法 建立心肌缺血再灌注模型,随机分为3组(n=8):假手术组(S组)动脉下仅穿线,不结扎;缺血再灌注组(IR组)行心肌缺血再灌注;瑞芬太尼预先给药组(R组)以6 μg·kg-1·min-1的速率经股静脉输注瑞芬太尼,15 min后行心肌缺血再灌注.于再灌注45 min时处死大鼠,取左心室心尖部缺血区心肌组织,应用信号转导基因芯片技术检测心肌细胞凋亡相关基因及炎性相关基因的表达.结果 与S组比较,IR组Bax基因,Bcl-2基因、Bcl-2L1基因和Birclb基因表达下调;肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因、细胞间粘附分子1(ICAM-1)基因表达上调,Birc3基因、白细胞介素2(IL-2)基因、IL-2rα基因、IL-4基因表达正常.与IR组比较,R组Bar基因、Bcl-2基因、Bcl-2L1基因Birclb和Bitc3基因表达上调,ICAM-1基因表达下调,IL-2基因、IL-2rα基因、IL-4基因、TNF-α基因表达正常.与S组和R组比较,IR组Bcl-2/Bax基因比降低(P<0.05).结论 瑞芬太尼预先给药可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制与上调抗心肌细胞凋亡相关基因表达和下调促炎性相关基因表达有关.     

异丙酚对LPS诱导中性粒细胞Toll样受体2和Toll样受体4表达的影响

目的 探讨异丙酚对内毒素(LPS)诱导中性粒细胞Toll样受体2(TLR2)和TLR4表达的影响.方法 健康志愿者6名,年龄20～35岁,各采集外周静脉血样50 ml,加入20 U/ml肝素抗凝,分离提纯中性粒细胞,制备细胞悬液,然后随机分为6组,每组6皿:对照组(C组)不给予任何药物,置于37℃、5%CO_2培养箱中培养12 h;异丙酚脂质溶剂intralipid组(I组)、异丙酚组(P组)和LPS组(L组):分别加入intralipid(终浓度为5 μg/ml)、异丙酚(终浓度为5 μg/ml)或LPS(终浓度为1μg/ml),置于37℃、5%CO_2培养箱中孵育12 h;intralipid+LPS组(IL组)和异丙酚+LPS组(PL组)先分别加入intralipid(终浓度为5 μg/ml)或异丙酚(终浓度为5 μg/ml)后,置于37℃、5%CO_2培养箱中孵育20 min,然后加入LPS(终浓度为1μg/ml),置于37℃、5%CO_2培养箱孵育12 h.采用流式细胞仪测定中性粒细胞膜TLR2和TLR4的表达;采用荧光定量PGR检测中性粒细胞膜TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达;采用ELISA法测定培养上清液TNF-α和IL-8的浓度.结果 与C组比较,I组和P组TLB2和TLR4的表达、1NF-α和IL-8L-8的浓度差异无统计学意义(P>0.05),L组和IL组TLR2和TLR4的表达上调,L组TNF-α和IL-8L-8的浓度升高,IL组IL-8浓度升高(P<0.05);与L组比较,IL组TLR2和TLR4的表达、TNF-α和IL-8L-8的浓度差异无统计学意义(P>0.05),PL组TLR2和TLR4的表达下调,TNF-α和IL-8L-8的浓度降低(P<0.05).各组TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 异丙酚可下调LPS诱导的中性粒细胞TLR2和TLR4的表达,从而抑制炎性反应.     

关节镜下行关节腔清理术治疗痛风性膝关节炎的临床研究

目的探讨痛风性膝关节炎在内科治疗后仍反复发作时,采用关节镜辅助下的关节腔清理术对这些患者的治疗效果和手术技巧。方法自2004年1月至2007年1月,对经内科治疗后仍反复发作的31例痛风性膝关节炎患者,行关节镜下的关节腔清理术等。术后坚持正规的降尿酸治疗,对术中难以彻底清除的尿酸盐结晶结合术后短期冲洗,对术前使用糖皮质激素患者比较术后的体温变化情况,比较患者术前和术后12个月的膝关节Lysholm评分。结果痛风性关节炎的关节镜表现为特异性的白色团块状物质沉积在滑膜、软骨和其他关节内结构的表面。术后31例切口甲级愈合,随访12—24个月中全部患者症状均较术前明显缓解,术前曾给予糖皮质激素的患者在术后容易出现体温明显升高,患者术前和术后12月的膝关节Lysholm评分存在显著性统计学差异（t=21．42,P〈0,01）。结论关节镜手术对痛风性膝关节炎具有较高的治疗价值,手术创伤小,术后康复快。术前曾给予糖皮质激素的患者在术后要加强管理。