雷公藤红素作用于HSP60抗肺纤维化的靶点研究

雷公藤红素是来源于传统中药雷公藤的五环三萜类天然活性化合物,具有抗肺纤维化作用,但是其对于肺成纤维细胞功能影响、作用靶点和机制尚不明确。本研究发现雷公藤红素具有抗成纤维细胞-肌成纤维细胞转化(fibroblast-myofibroblast transformation, FMT)功能,表现为显著抑制转化生长因子β1 (transforming growth factorβ1, TGFβ1)诱导的α-平滑肌肌动蛋白和一型胶原表达。前期研究提示热休克蛋白60 (heat shock protein 60, HSP60)可能是雷公藤红素抗FMT的作用靶点,本研究通过细胞热迁移实验、表面等离子共振实验确证了雷公藤红素与HSP60相互作用,并且发现二者相互作用K_D值为8.59μmol·L^-1。进一步研究显示,使用siRNA在人肺成纤维细胞(human pulmonary fibroblast, HPF)敲低HSP60后, HPF对于TGFβ1的敏感性显著增加,表现为相同浓度TGFβ1刺激下,敲低组FMT程度显著高于对照组,此效应在中低剂量TGFβ1处...     

基于生物信息学分析揭示枸杞红素抗青光眼靶点及分子机制的研究

目的 本研究拟通过网络药理学研究策略旨在揭示枸杞红素抗青光眼的药理靶点及分子机制。方法 运用整合数据库分别获取枸杞红素治疗靶点和青光眼病理靶点，并经映射后获得枸杞红素治疗青光眼的潜在靶点。采用STRING数据库获得靶点-靶点功能相关蛋白间的网络关联图。运用Cytoscape软件Network Analyzer分析网络自由度中位数和最大自由度等拓扑参数，并根据Degree值筛选现枸杞红素抗青光眼的核心靶点。此外，应用R语言中的“ClusterProfiler”、“org.Hs.eg.Db”、“ggplot2”等数据包对核心靶点进行GO和KEGG富集分析及可视化。结果 生物信息学分析筛选出128个枸杞红素、1196个青光眼潜在靶点及19个共有靶点。GO富集分析结果表明枸杞红素抗青光眼药理活性可能与通过调控这些核心靶点有关，提示枸杞红素通过多靶点调控进而发挥治疗青光眼的潜在作用。KEGG富集分析结果显示，枸杞红素抗青光眼作用可能与调控眼组织细胞因子活性，内环境稳态及激活神经修复因子/受体活性进而促进神经细胞增殖或修复有关。此外，枸杞红素抗青光眼分子机制可能与抗炎症反应、氧化损伤、细胞凋亡及增...     

中药三萜类成分防治膝骨关节炎作用机制研究进展

膝骨关节炎（knee osteoarthritis,KOA）是一种严重影响患者生活质量的膝关节功能退行性疾病，目前已成为全球致残率最高的疾病之一。中医药治疗KOA有着悠久的历史和广阔的应用前景，能够有效弥补现代医学治疗KOA的不足。中药三萜类成分对KOA具有良好的防治作用，可通过抑制炎症反应、抗氧化应激反应、抑制软骨细胞凋亡、促进软骨细胞增殖、合成胶原蛋白等延缓KOA的进程，具有多靶点协同性的特点。通过对中药三萜类成分防治KOA的作用机制进行综述，为开发临床治疗KOA的药物提供科学依据。     

雷公藤红素联合米托蒽醌对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察雷公藤红素（Celastrol,Cela）联合米托蒽醌（Mitoxantrone,MIT）对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响。方法：通过MTT法检测Cela、MIT单独或联合用药对肝癌HepG2细胞增殖能力的抑制作用；通过集落形成实验观察Cela、MIT单独及联合用药对肝癌HepG2细胞集落形成的影响；通过流式细胞实验检测Cela、MIT单独及联合用药对促进肝癌HepG2细胞凋亡的影响；Western blot法检测Cela、MIT单独及联合用药对肝癌HepG2细胞细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果：MTT、集落形成和流式细胞实验结果表明，Cela、MIT单独用药对肝癌HepG2细胞增殖能力有抑制作用，促进其凋亡，联合用药后抑制作用更为显著（P <0.05）; Western blot结果表明，与对照组比较，Cela、MIT单独用药组能显著减少Bcl-2蛋白的表达（P <0.05），上调Bax蛋白的表达（P <0.05），联合用药组较单用药组效果更为显著（P <0.05）。结论：雷公藤红素协同米托蒽醌能显著减少肝癌HepG2细胞增殖，诱导其凋亡。     

雷公藤红素衍生物的合成与评价

目的 以蛋白酶抑制剂雷公藤红素为先导化合物进行结构修饰,以期得到脂溶性的前体药物。方法 经常规提取分离得到雷公藤红素(Ⅰ),通过脱水缩合方法和先成盐后酯化方法合成雷公藤红素衍生物;采用MTT法研究了5个衍生物的细胞毒活性。结果 合成的5个衍生物经结构确证为雷公藤红素甲酯(Ⅱ)、雷公藤红素苄酯(Ⅲ)、雷公藤红素正十六醇酯(Ⅳ)、雷公藤红素环氧丙酯(Ⅴ)和雷公藤红素酰胺(Ⅵ);5个衍生物除雷公藤红素酰胺外,其余4个衍生物的细胞毒活性与母体相当,均比阳性对照药顺铂的细胞毒活性强。结论 首次合成了雷公藤红素酯类衍生物,且具有较强细胞毒活性。     

雷公藤红素对人多发性骨髓瘤H929细胞凋亡的诱导作用及分子机制研究

目的：观察雷公藤红素诱导人多发性骨髓瘤H929 细胞凋亡的效果，并分析诱导凋亡的分子机 制。方法：取培养48 h 后处于平台期的H929 细胞，按照1.0×109/L 细胞密度接种于6 孔细胞培养板中，分为 对照组、雷公藤红素组（0.5 mg/L、1.0 mg/L 和5.0 mg/L），各浓度雷公藤红素组分别加入对应浓度的雷公藤红 素，对照组加入等体积二甲亚砜（DMSO） 溶液。比较不同浓度雷公藤红素组H929 细胞活力抑制率，比较各 组H929 细胞凋亡率及H929 细胞培养物中P53、剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cleaved caspase-3）、剪 切型聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（cleaved PARP-1）、bax、bcl-2 表达水平。结果：H929 细胞活力抑制率随着 雷公藤红素处理浓度升高而升高，不同浓度雷公藤红素组H929 细胞活力抑制率两两比较，差异均有统计学意 义（P＜0.05）。与对照组比较，不同浓度雷公藤红素组H929 细胞凋亡率均较高（P＜0.05）。H929 细胞凋亡率 随着雷公藤红素处理浓度增加而增加，不同浓度雷公藤红素组H929 细胞凋亡率两两比较，差异均有统计学意 义（P＜0.05）。与对照组比较，不同浓度雷公藤红素组H929 细胞培养物中P53、cleaved caspase-3、cleaved PARP-1、bax 表达水平均较高（P＜0.05），bcl-2 表达水平均较低（P＜0.05）。H929 细胞培养物中P53、 cleaved caspase-3、cleaved PARP-1、bax 表达水平随着雷公藤红素处理浓度升高而升高，bcl-2 表达水平随着 雷公藤红素处理浓度升高而降低，不同浓度雷公藤红素组H929 细胞培养物中P53、cleaved caspase-3、 cleaved PARP-1、bax、bcl-2 表达水平两两比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：雷公藤红素对人多 发性骨髓瘤H929 细胞具有活力抑制和凋亡诱导作用，且有一定的剂量效应，这一作用可能与线粒体凋亡途径 有关。     

人促红素注射液致血液透析患者过敏性休克1例

1例72岁男性尿毒症患者，在维持性血液透析中，首次使用人促红素注射液治疗肾性贫血，静推后约8 min,出现呼吸困难、脸色发白、胸闷等过敏性休克症状。采用停药，异丙嗪25 mg肌内注射，地塞米松5 mg静推，吸氧，心电图监护，肾上腺素2 mg静推，呋塞米注射液20 mg静推等抢救措施，20 min后，患者症状和各项指标逐步恢复正常。改用其他药物继续治疗，直至出院未再发生过敏性休克。     

人促红素注射液生物学活性体外法的ELISA验证

本研究用双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附试验)检测人促红素注射液(Human erythropoietin injection, EPO)中EPO效价，并对其进行方法学验证。研究从准确度、重复性、中间精密度、线性、耐用性等各方面，对ELISA检测EPO建立的体外生物活性测试方法进行方法学验证。在准确度验证中，不同浓度供试品测定的回收率在87.20%～118.40%之间，同一浓度的6份样品的加标回收率为93.5%～107.2%之间；将5个不同浓度的供试品分别为2.5,5,20,50,100 mIU/mL进行3次重复性试验，结果RSD均<20%;在中间精密度验证过程中，在不同时间由不同人员各操作测定，检测结果的RSD=0.019%,<20%,人员和时间对结果均无统计学意义影响(P>0.05,F=0.043);线性验证实验结果表明，人促红素国家标准品和EPO成品重复3次的R²分别为0.987 2,0.996 8,0.989 3,0.997 8,0.998 8,0.985 6,均>0.98;在试验加入终止液后，不同长度时间间隔内的生物学活性测定结...     

雷公藤红素联合槲皮素体外抗癌增效作用

目的 探讨雷公藤红素联合槲皮素体外对人肺癌A549和食管癌Eca9706细胞的抗癌增效作用。方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测试雷公藤红素配伍槲皮素前后对人肺癌A549和食管癌Eca9706细胞增殖抑制率影响，并计算半数抑制浓度(IC50)及30%抑制浓度(IC30),通过配伍槲皮素前后雷公藤红素对两种癌细胞抑制作用的分析，从单体配伍层面评价抗癌增效作用。结果 配伍IC30槲皮素后，雷公藤红素在0.25、1.25μmol/L使人肺癌A549细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01),而在其他更高浓度时，配伍槲皮素后抑制率无统计学差异(P>0.05);配伍IC30槲皮素后，雷公藤红素在0.25、1.25及2.50μmol/L时使人食管癌Eca9706细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01,P<0.05),而在其他更高浓度时，配伍槲皮素后抑制率均无显著差异(P>0.05)。此外，配伍槲皮素使雷公藤红素对A549、Eca9706细胞的IC50值分别降低至2.064、2.040μmol/L、IC30值分别降低至0.337、0.408μmol/L。结论 雷公藤红素联合...     

RP-HPLC双波长法同时测定参橘草营养强化饮液中5种成分的含量

目的：采用双波长HPLC同时测定参橘草营养强化饮液中5种化合物(腺苷、虫草素、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、橙皮苷)的含量。方法：依利特Hypersil BDS C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相：乙腈-水，梯度洗脱；流速：1.0 ml/min;柱温25℃;检测波长203 nm(人参皂苷Rg1、人参皂苷Re),260 nm(腺苷、虫草素、橙皮苷)。结果：5种化合物在各自的浓度范围内均呈现良好的线性关系(r>0.9990),平均加样回收率(n=6)分别为96.72%、97.93%、98.04%、99.22%、101.69%。结论：该法简单快捷、稳定可靠，准确率高，重复性好，可用于参橘草营养强化饮液的质量评价。