几种虫草无性型及其相关真菌体外抑制单胺氧化酶活性研究

目的选择较强抑制单胺氧化酶(MAO)活性的菌株及初步确定活性部位。方法基于消耗底物犬尿胺原理,应用分光光度计对20个菌株进行初筛,在此基础上用酶标仪对10株细脚拟青霉进行比较研究,并由相对抑制率初步确定活性部位。结果RCEF1054、RCEF0943、RCEF1078和RCEF0440菌株活性较强。细脚拟青霉菌丝体不同溶剂先后提取所得产物MAO抑制率不同,氯仿组>甲醇组>水提组。氯仿组抑制率最高的菌株是Pt25(63.66%)。甲醇和水提物活性较低。10个菌株发酵液提取物均有一定活性,抑制率在15.5%~31.7%之间,较高的是pt12、pt02和pt57菌株。结论不同菌种或不同溶剂提取物的抑制MAO活性差异显著。细脚拟青霉RCEF0788(pt57)菌株提取物具有较高活性。     

RNA干扰体外抑制大鼠ICOS基因的表达

目的 观察可诱导共刺激因子(inducible co-stimulator factor,ICOS)短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对大鼠活化T细胞中ICOS基因的沉默效应,筛选有效干扰靶点.方法 设计合成ICOS RNA寡核苷酸片段,经退火、连接等步骤克隆至线性化的pRNAT-U6.1/Neo真核表达载体上,测序鉴定.应用Lipofectamine 2000将该质粒转染活化的大鼠T细胞,荧光定量RT-PCR检测ICOS mRNA表达情况,Western blot检测ICOS蛋白表达情况.结果 成功构建了3个靶点的重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA 1、2、3,荧光定量RT-PCR和Western blot显示转染这3种重组质粒的T细胞ICOS mRNA和蛋白表达均较对照组有不同程度的下降,其中1号靶点的干扰效应最为明显.在转染后的T细胞中,其抑制率分别达到了51.3%、78.3%.结论 重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA能有效抑制大鼠活化T细胞中ICOS基因的表达,并筛选出了有效干扰靶位.RNA干扰技术有望成为研究ICOS在实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎中作用的有效手段.     

Photofrin光动力联合化疗对食管癌细胞株Eca-109增殖的影响

目的研究Photofrin光动力联合氟尿嘧啶和顺铂化疗药物对食管癌细胞株Eca-109增殖的抑制作用。方法将食管癌细胞株Eca-109分为6组，A：对照组，B：化疗组，C：化疗＋高剂量光敏剂治疗组，D：化疗＋低剂量光敏剂治疗组，E：高剂量光敏剂治疗组，F：低剂量光敏剂治疗组。种板孵育24h后，采用台盼蓝染色法检测肿瘤细胞的存活率；于化疗组加入化疗药（5-Fu＋DDP）作用12h，再按实验分组加入光敏剂血卟啉衍生物（HPD）低剂量或高剂量，4h后行630nm激光照射，光能量密度30J／cm^2，照光后继续培育24h，开始行MTT法检测食管癌细胞增殖的抑制率。结果除了低剂量光敏剂＋化疗组同高剂量光敏剂组差异不显著外．其余相互间差异均有统计学意义，高剂量光敏剂＋化疗组细胞抑制率较高，低剂量光敏剂组抑制率较低。结论在特定光源状态下,一定的光敏剂、光照能量密度、孵育时间，光敏剂孵育浓度是人食管癌细胞Eca-109体外光动力效应的主要影响因素。两种不同的HPD孵育浓度下细胞抑制率有显著性差异。相同光照能量密度及孵育时间下，孵育浓度越高，其杀伤效应越强。光动力与化疗联合对食管癌细胞的杀伤力提高，光动力与化疗有协同作用。     

迷迭香醇提取物对肺腺癌细胞增殖的影响及其机制

目的 研究迷迭香醇提取物 (RE) 对人肺腺癌细胞株 (AGZY) 增殖的影响及其机制.方法 采用改良MTT法、集落形成试验检测 RE 对 AGZY 生长增殖的影响;采用流式细胞术检测 RE 对 AGZY 细胞增殖周期的影响.结果 RE 为12.5、25、50 μg/mL和100μg/mL浓度作用5 d对AGZY的抑制率分别为47%、35%、86%和98%,半数抑制浓度IC50为17.8μg/mL;RE为25μg/mL作用AGZY 15 d,细胞集落形成明显减少,与溶媒对照比较差异有高度显著性;RE在50 μg/mL浓度作用细胞5 d,流式细胞仪检测到凋亡峰,100μg/mL有明显的凋亡峰出现.结论 RE体外明显抑制人肺腺癌细胞株(AGZY)的生长增殖,其财细胞增殖周期的阻滞可能是其抑制细胞增殖的机制之一.     

丹参酮ⅡA对小鼠骨髓瘤细胞SP2／O体外增殖与凋亡的影响

目的 研究丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)对小鼠骨髓瘤细胞SP2/0的生长抑制与诱导凋亡作用.方法 选用小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0,运用光镜、MTT法、DNA琼脂糖凝胶电泳分析SP2/0细胞增殖及凋亡的改变.结果 经丹参酮ⅡA处理后,SP2/0细胞增殖明显被抑制,当4.Oug/ml Tan ⅡA处理SP2/0细胞72小时,增殖抑制率达(79.6±2.1),镜下可见凋亡细胞的形态学改变,细胞DNA片断化(呈现"梯状"断裂现象).结论 Tan ⅡA能有效地抑制小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0增殖,促进SP2/0细胞凋亡.     

藿香正气水对大鼠胃肠道影响的研究

目的:研究藿香正气水对大鼠胃肠道的影响。方法:运用乙酰胆碱刺激的兔离体十二指肠的影响实验、对胃排空和肠推进的影响和对胃泌素分泌的影响来研究藿香正气水对胃肠道的影响。结果:藿香正气水对乙酰胆碱刺激的兔离体肠具有明显的抑制作用,对胃排空和肠推进具有促进作用,对胃泌素的分泌具有促进作用。结论:本研究对藿香正气水临床上用于胃肠道疾病提供了实验根据。     

祛风息痛丸对小鼠实验性疼痛的镇痛作用

目的 观察祛风息痛丸的镇痛作用,为其临床应用提供一定的实验依据. 方法 制备小鼠实验性疼痛模型,观察祛风息痛丸的镇痛作用.①扭体法:取昆明种小鼠100只,随机分为5组,每组20只,雌雄各半.对照组灌胃给予生理盐水10 ml/kg;祛风息痛丸低、中、高剂量组分别灌胃祛风息痛丸0.36,1.08,3.24 g/kg.阳性对照组灌胃阿司匹林0.4 g/kg.每Et用药1次,10 d后观察各组动物腹腔注射醋酸后5-20 min内的扭体反应次数.②热板法将小鼠放在(55±1)℃的热板上,以小鼠舔后足为疼痛反应指标,观察小鼠的热痛阈值.选用痛觉阈值在5-30 s的雌性小鼠50只,随机分为5组,每组10只,分组与给药方法与①同.给药10 d后记录各组小鼠热板法痛阈值,比较各组间的差异. 结果 ①扭体法实验结果显示,祛风息痛丸0.36,1.08,3.24 g/kg灌胃10 d使腹腔注射醋酸所致的小鼠扭体反应次数较对照组明显减少,对扭体反应次数的抑制率分别为25.4%,30.0%和43.4%(P<0.05).②热板法实验结果显示,给药前各组小鼠热痛阈值无统计学差异(P>0.05);给药10 d后祛风息痛丸各剂量组小鼠热痛阈值均较给药前显著提高(P<0.05),与对照组比较,祛风息痛丸组给药后热痛阈值显著延长(P<0.05). 结论 祛风息痛丸对小鼠实验性疼痛具有良好的镇痛作用.     

IgY牙膏对远缘链球菌黏附定居的影响

目的 研究IgY牙膏对远缘链球菌体外黏附及体内定居的影响. 方法 ①分别在培养远缘链球菌的培养基中加入浓度分别为2.5 mg/ml、1.25 mg/ml、0.625 mg/ml、0.3125 mg/ml的特异性抗变形链球菌IgY抗体和IgY牙膏溶液及对照牙膏(不含IgY抗体,其他成分与IgY牙膏相同)溶液,厌氧培养24 h后,用分光光度计测定细菌生长黏附状况.②将24只Wistar大鼠随机分为3组,每组8只,雌雄各半.第1周广谱抑菌,第2周在大鼠牙面上接种S.sobrinus6715,2次/d,50 μl/次.从第3周开始按分组用不同的溶液涂抹大鼠牙齿,连续3周.取细菌标本,用MSB和BHI平板培养基定量培养,测定远缘链球菌占总菌落的比例. 结果 ①IgY牙膏组与对照牙膏组比较,黏附率有统计学差异(P<0.05),IgY牙膏与0.312 5mg/ml IgY溶液对远缘链球菌的黏附抑制率之间无统计学差异(P>0.05).②远缘链球菌占总菌落的比例IgY牙膏组与对照牙膏组之间的差异有统计学意义(P<0.05),IgY牙膏组与IgY组之间的差异无统计学意义(P>0.05). 结论 IgY牙膏对远缘链球菌的体外黏附和体内定居具有抑制作用.     

紫杉醇对人喉鳞状细胞癌Hep-2放射增敏作用的实验研究

目的 在体外用细胞生物学实验技术了解紫杉醇联合直线加速器X射线照射对Hep-2细胞株的作用，以及紫杉醇对Hep-2细胞株细胞周期的影响，并探讨其作用机制。方法 ①用MTT法计算Hep-2细胞经直线加速器照射组；先紫杉醇作用12、18、24、30h后再直线加速器照射组；先直线加速器照射再联合紫杉醇作用12、18、24、30h组各组细胞生长抑制率。②应用流式细胞仪检测Hep-2细胞经紫杉醇作用12、18、24、30h后各组细胞周期分布。结果 ①先紫杉醇作用再直线加速器照射组细胞生长抑制率较高（各组均值达到87．51％～89．64％），与先照射再联合紫杉醇组细胞生长抑制率（各组均值为57．84％～64．34％）及单纯照射组细胞生长抑制率（均值为41．90％）相比有统计学意义（P〈0．01）。②用紫杉醇后Hep-2细胞株细胞周期停滞于G2／M期，G2／M期停滞于24-30h达到峰值（24．65％～25．15％），并在用药后30h观察到凋亡峰。结论 紫杉醇有放射增敏作用，其可能机制是使细胞生长停滞于射线敏感期G2／M期，从而加强射线对肿瘤细胞的杀伤效应。     

rhGH在体外对人肝癌细胞系的作用及其Cyclin D1蛋白表达的影响

目的 研究重组人生长激素(rhGH)在体外对人肝癌细胞系SMMC7721生长的作用及其Cyclin D1蛋白表达的影响.方法 实验分为对照组、rhGH组、rhGH 阿霉素(ADM)组及ADM组;通过体外细胞培养、MTT比色技术及免疫细胞化学技术等手段,测定不同浓度的rhGH及其与ADM合用时对人肝癌细胞系SMMC7721的生长曲线、细胞抑制率及其Cyclin D1蛋白表达的影响.结果 与对照组相比,不同浓度的rhcH在体外对人肝癌细胞系SMMC7721的分裂增殖无明显影响,生长曲线、Cyclin D1蛋白表达不随rhGH浓度的增加而升高;rhGH ADM组与ADM组比较差异无显著性,生长曲线、Cyclin D1蛋白表达无显著变化;与对照组及rhGH组相比较,单用ADM或rhGH ADM对该细胞的抑制率增加,Cyclin D1蛋白表达降低(P<0.01),而两组间差异无统计学意义.结论 rhGH在体外对人肝癌细胞系SMMC7721的分裂增殖无明显促进作用,对Cyclin D1蛋白表达无明显影响.