组织工程化人形下颌骨髁状突的实验研究

目的　评价采用组织工程技术构建人下颌骨髁状突软骨复合组织的可行性。方法　以可降解生物材料聚羟基乙酸 (polyglycolicacid ,PGA) /聚乳酸 (polylacticacid ,PLA)预制人下颌骨髁状突模型 ,体外培养扩增牛骨膜成骨细胞和牛关节表面软骨。实验分 3组 :第 1组 ,模型内仅注入 1.5 %藻酸钙和 30 %氧化乙丙烯 ;第 2组 ,模型内分别注入成骨细胞和软骨细胞悬液 ,浓度为 5× 10 7/ml;第 3组 ,模型内接种成骨细胞藻酸钙悬液 ,同时在模型关节表面涂敷软骨细胞 PluronicF12 7悬液 ,浓度为 5× 10 7/ml。分别植入裸鼠皮下 ,12周后取材 ,作大体和组织学观察。结果　第 1组无骨和软骨形成 ,模型支架明显缩小 ,形态不规则 ;第 2组仅留残缺不全的组织结构 ,标本体积缩小变形 ;第 3组形态结构与原植入模型支架相同 ,组织学观察有骨和软骨组织结构 ,两者界面连接有序 ,骨组织内有大量新生骨板。结论　以人工合成生物材料预制人下颌骨髁状突支架 ,采用组织工程技术 ,可以在裸鼠体内构建具有骨软骨复合结构的正常形态的人形下颌骨髁状突 ,从而为进一步临床应用提供了理论依据     

纳米氧化铝陶瓷对成骨细胞功能代谢影响的研究

目的 :比较纳米氧化铝 (nAl2 O3 )和常规氧化铝 (cAl2 O3 )对成骨细胞功能代谢方面影响。方法 :采用压制成型和无压烧结工艺制备nAl2 O3 和cAl2 O3 的块体材料 ,将体外原代分离培养成骨细胞分别接种于nAl2 O3 和cAl2 O3 的表面 ,分别在 7、14、2 1、2 8d时检测细胞内总蛋白、ALP活性及细胞基质钙含量。结果 :所制备的nAl2 O3 和cAl2 O3 的平均粒径分别为 60nm和 1.80 μm。 14、2 1和 2 8d时 ,nAl2 O3 表面附着的成骨细胞ALP活性和细胞基质钙含量均高于cAl2 O3 。结论 :与相应的cAl2 O3 比较 ,nAl2 O3 更能增强成骨细胞的功能及代谢活动     

同一个体成骨细胞和牙周韧带成纤维细胞的原代培养

目的：探索用简单，高效的方法对同一个体的成骨细胞和牙周韧带成纤维细胞进行原代培养，以便迅速建立相关的体外研究模型，为进一步研究两种细胞的相互作用奠定基础。方法：实验用酶消化法结合组织块培养法获取大鼠牙周韧带成纤维细胞，用组织块移行生长法培养成骨细胞，并对细胞培养中取材的对象和部位，酶消化时间，污染的控制等进行探讨。结果：发现所获得的细胞符合成骨细胞和成纤细胞的形态特征和生物学特性，且生长良好。结论：用酶消化法结合组织块培养法培养大鼠牙周韧带成纤维细胞，其方法可行，结果可靠。     

大鼠下颌骨来源的成骨细胞对甲硝唑和替硝唑的转运

目的：应用SD大鼠下颔骨来源的原代成骨细胞，观察成骨细胞对甲硝唑和替硝唑的转运，探讨人工种植牙给药的影响及可行性。方法：将原代培养的新生鼠成骨细胞（newborn rat’s osteoblast，N）和成年鼠成骨细胞（adult rat’s osteoblast，A）与溶于PBS的药物共同孵育，分别于1，3，5，10min后，弃去细胞外液，收集各时间点细胞悬液，用高效液相色谱法测定细胞内药物量，用考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量。结果：（1）高效液相色谱法可以准确测定2种药物的量。（2）2种成骨细胞均可将甲硝唑和替硝唑转运至细胞内。结论：成骨细胞具有转运硝基眯唑类药物的能力，证实了人工种植牙给药的可行性。     

2 种新型骨植入钛合金的细胞生物相容性研究

目的:研究国内2种新研制骨植入钛合金Ti1、Ti2对成骨细胞生物学行为的影响。方法:采用SD乳鼠体外原代分离培养的成骨细胞,将细胞分别接种于新型钛合金表面建立体外共同培养。采用MTT比色试验检测第3天成骨细胞的增殖百分率,采用扫描电镜(SEM)观察细胞形态学变化,并且对培养第5天时细胞碱性磷酸酶(ALP)功能活性进行检测。结果:成骨细胞在新合金表面增殖百分率、碱性磷酸酶活性检测值均高于对照组,细胞增殖百分率及碱性磷酸酶吸光度值与对照组间统计学分析无显著性差异(P>0.05)。扫描电镜观察细胞在新合金表面伸展状况良好、黏附牢固,并具有成骨细胞典型形态特征。结论:2种新型钛合金对成骨细胞学行为无不良影响。     

两种纳米晶羟基磷灰石的细胞相容性比较

目的 比较两种不同形态纳米晶羟基磷灰石的细胞相容性。方法 采用化学湿法合成的两种纳米晶形态羟基磷灰石。采用原代培养的成骨细胞检测两者的细胞相容性。采用MTT法观察成骨细胞在几种材料表面3d后的增殖情况，细胞培养第5d时对碱性磷酸酶活性进行检测，并用SEM观察第3d时细胞在材料表面的附着形态。结果 成骨细胞在球形纳米晶羟基磷灰石表面的细胞增殖数显著高于同直径的棒状纳米晶羟基磷灰石，并具有更好的细胞伸展形态；而碱性磷酸酶表达没有明显差别。结论 羟基磷灰石球形纳米晶较棒状纳米晶更能促进成骨细胞生长。     

成骨细胞对血管内皮细胞增殖与形态的影响

目的:观察兔成骨细胞与血管内皮细胞在直接共培养条件下的形态学的变化及对血管内皮细胞增殖的影 响。方法:将体外培养的成骨细胞与血管内皮细胞经传代后分别以细胞数量为0:1、1:1、2:1、4:1设为4组,置于 同一培养皿中,培养1、3、5、7 d后观察两种细胞形态学的变化及成骨细胞对血管内皮细胞增殖情况的影响。结果: 两种细胞随共培养时间的延长,其细胞形态均呈长梭形。从生长曲线可见,细胞比例为2:1血管内皮细胞增殖程度 明显高于其他两实验组。结论:当成骨细胞与血管内皮细胞直接共培养时,各自失去自身细胞的形态而呈长梭 形;血管内皮细胞增殖程度可有显著的提高。     

左归丸通过线粒体途径抗叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡

目的:观察左归丸对叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的保护效应,探讨其作用机制是否与其干预线粒体途径有关。方法:以成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,建立叔丁基过氧化氢(t-BHP)成骨细胞MC3T3-E1氧化应激模型,实验分为空白组,t-BHP组,左归丸+t-BHP组,补佳乐+t-BHP组。孵育24,48,72 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测左归丸含药血清对t-BHP诱导MC3T3-E1细胞存活的影响;孵育48 h后,采用吖啶橙溴乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡,采用Hoechst 33342染色法观察凋亡细胞核变化,采用罗丹明123荧光染色法观察线粒体膜电位的改变,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法分析线粒体蛋白家族B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,t-BHP组显著抑制细胞增殖(P0.05,P0.01),细胞凋亡增加,线粒体膜电位降低,Bcl-2蛋白表达明显下调(P0.01);与t-BHP组比较,左归丸加t-BHP组促进暴露于t-BHP诱导的MC3T3-E1氧化损伤细胞的存活(P0.01),48 h者尤佳,逆转细胞凋亡情况,提高细胞线粒体膜电位,上调Bcl-2蛋白表达(P0.05),抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P0.01)。结论:左归丸含药血清能够抗t-BHP诱导的MC3T3-E1细胞凋亡,其作用机制可能与其干预线粒体途径有关。     

青蛾丸对去势鼠成骨细胞增殖以及MMP3-OPN-MAPK通路蛋白表达的影响

目的探讨青蛾丸对去势鼠成骨细胞增殖和MMP3-OPN-MAPK通路蛋白表达及其作用机理。方法将15只饲养12周的去势鼠处死,选取股骨胫骨骨髓,进行体外成骨细胞传代培养。将含青蛾丸2g生药的药液喂养40只SD大鼠,随机均分为空白对照(A)组(给蒸馏水1ml),低浓度(B)组(给药0.5ml),中浓度(C)组(给药1ml),高浓度(D)组(给药2ml),提取各组处死大鼠含药血清干预成骨细胞,运用MTT法测定成骨细胞增殖能力,RT-PCR法测定通路蛋白MMP3、OPN和MAPK的mRNA水平。结果 1术后12周模型组大鼠腰椎及股骨骨密度为(0.153±0.011)g/cm2和(0.162±0.015)g/cm2,假手术组为(0.336±0.016)g/cm2和(0.293±0.005)g/cm2,两组有明显差异(P0.05),表明大鼠骨质疏松的模型建立成功。2成骨细胞增殖中B至D组均使MTT法检测的光吸收值升高,较A组显著性增加P0.01和P0.05),增加幅度与组别关系近似斜线,以D组促增殖作用最显著,增值率达到156%。3D组中MMP3含量明显低于其余各组(P0.01),OPN和MAPK含量高于其余各组(P0.05)。同时,B、C、D是随着复方含药血清依次增加的三组,B组中MMP3表达最多,其余组含量依次下降,三组中OPN含量基本依次增加,而MAPK含量在含药血清药物添加后明显增加,不同于A组(P0.01)。结论我们发现中药复方青蛾丸含药血清可以促进去势鼠成骨细胞的增殖并且通过MMP3-OPN-MAPK通路激活骨重建。