异补骨脂素对体外培养大鼠成骨细胞增殖分化成熟的影响

目的:研究异补骨脂素(Isopsoralen,IP)对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖与分化成熟的影响。方法:取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法获得成骨细胞,培养于含10%FBS的MEM培养液中,3 d后首次换液,铺满90%皿底后传代培养;增殖分析采用96孔板,加入在培养液中终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L的异补骨脂素,MTT法分析;分化分析采用24孔板,于成骨性诱导培养第3、6、9、12、15天分别测碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)活性、钙含量、骨钙素,第12天进行ALP组织化学染色,第14天进行茜素红染色和钙化结节计数。结果:终浓度为1×10-4mol/L的异补骨脂素对细胞增殖有抑制作用,而1×10-5mol/L浓度虽对ROB增殖无明显影响,但能显著提高细胞ALP活性、增加钙含量、促进骨钙素分泌,并增加钙化结节数量。结论1×10-5mol/L异补骨脂素能促进ROB分化成熟,应为中药补骨脂抗骨质疏松的有效成分。     

纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架材料复合大鼠成骨细胞培养的实验研究

目的 将纳米羟磷灰石/壳聚糖(nHA/CS)支架材料与大鼠的成骨细胞在体外复合培养,研究其生物相容性,以期在骨组织工程支架材料的选择方面提供依据.方法 原代培养大鼠成骨细胞,倒置显微镜作细胞形态学观察,碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红钙染色对细胞进行鉴定.将第三代细胞与nHA/CS材料体外复合培养,采用MTT比色法和...     

人骨唾液蛋白和基质金属蛋白酶-9在风湿性心脏病瓣膜表达的研究

<正>人骨唾液蛋白(hBSP)是细胞外基质中的一种酸性糖蛋白,主要分布在矿化的组织中,由成骨细胞、破骨细胞和软骨细胞表达和分泌。近年来对于其在肿瘤骨转移性钙化方面引起了人们的普遍关注。基质金属蛋白酶-9(MMP-9)是一种锌离子依赖性明胶酶,可降解细胞外基质成分,在     

菟丝子定向诱导成骨细胞向神经元细胞转化的研究

目的：开展菟丝子醇提物诱导大鼠成骨细胞向神经元细胞转化的定向诱导研究．方法：采用菟丝子醇提物刺激成骨细胞的分化，用RT-PCR检测和倒置显微镜下观察菟丝子水提物对成骨细胞刺激后的变化。结果：RT-PCR检测有神经元细胞和神经胶质细胞的特异性蛋白神经元烯醇酶（NSE）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达，在倒置显微镜下观察到神经元样细胞生长．结论：在体外，菟丝子醇提物具有诱导大鼠成骨细胞向神经元细胞定向分化的作用。     

自噬对糖皮质激素作用下MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响

背景:目前,糖皮质激素(GCs)作用下成骨细胞自噬与其增殖能力的关系尚存争议.目的:探讨自噬对GCs作用下MC3T3-E1成骨细胞增殖能力的影响.方法:不同浓度(0、10-8 M、10-6 M、10-4 M)的地塞米松(DXMS)分别作用于MC3T3-E1成骨细胞,CCK-8检测不同时间(12 h、24 h、48 h)...     

淫羊藿甙对OVX大鼠成骨细胞Smad4 mRNA的作用

目的：探讨淫羊藿甙（icariin）抑制骨质疏松的细胞内信号机制。方法：36只雌性Wistar大鼠随机分成3组：OVX（双侧卵巢切除）；OVX-I （OVX并注射icariin）；OVX-E（OVX并注射雌二醇）。术后4，6，8周时检测血清碱性磷酸酶（AIJP）的含量，并于术后8周时测体质量，取股骨干分离培养成骨细胞，用RT-PCR检测各组成骨细胞Smad4的mRNA含量。结果：（1）Icariin可以控制OVX大鼠体质量增加。（2）术后4，6周OVX-I和OVX-E组血清ALP值升高差异无统计学意义；OVX组ALP升高值与其他2组间差异有统计学意义（P〈0．01）；术后8周OVX、OVX-I和OVX-E组血清ALP值依次降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）术后8周，RT-PCR显示OVX、OVX-I和OVX-E组Smad4的mRNA含量依次增高，以OVX-E组最多。结论：淫羊霍甙可抑制OVX大鼠血清ALP水平的升高，且可能通过提高Smad4 mRNA抑制OVX大鼠体质量的增加。     

高糖环境中吡格列酮对MC3T3-E1成骨细胞的作用及其机制

目的观察高糖环境下吡格列酮对MC3T3-E1成骨细胞的作用并探讨其可能机制。方法高糖(22.5 mmol·L~(-1))环境培养MC3T3-E1细胞,分为对照组,吡格列酮2.5、5、10μmol·L~(-1)组,干预24、48 h。检测细胞增殖活性、凋亡率、骨钙素和碱性磷酸酶(ALP)分泌水平,以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、成骨因子runt相关基因2(Runx2)和骨形态蛋白2(BMP-2)mRNA的表达水平。并分析PPARγ、Runx2的表达与骨钙素、ALP、BMP-2的相关性。结果在相同干预时限,吡格列酮各组MC3T3-E1成骨细胞增殖活性、骨钙素和ALP的分泌水平、Runx2 mRNA和BMP-2 mRNA的表达均低于对照组,凋亡率和PPARγmRNA的表达高于对照组(P<0.05)。随吡格列酮浓度增加,细胞增殖活性、骨钙素和ALP的分泌、Runx2 mRNA和BMP-2 mRNA的表达均降低,而细胞凋亡率和PPARγmRNA的表达增高(P<0.05)。与干预24 h相比,干预48 h时相同浓度吡格列酮组细胞增殖活性,骨钙素和ALP的分泌水平,PPARγ、Runx2、BMP-2 mRNA的表达或无变化或略增加。结论高糖环境下吡格列酮对成骨细胞有损害作用,促进PPARγ表达、抑制Runx2的表达可能为其作用机制之一。     

NMP4/CIZ基因与成骨细胞功能调节

成骨细胞黏附于细胞外基质,调节细胞外环境,同样成骨细胞的正常结构和功能亦有赖于细胞外基质的调节作用.基质-细胞间相互作用是由细胞黏附分子介导的.黏附分子多位于黏着斑部位,细胞外基质来源信号可通过此黏附装置传递至细胞内部,调节细胞的基因转录.因此,位于黏着斑部位,同时调节核内基因转录的分子很可能参与细胞功能及细胞外基质调节.NMP4/CIZ存在于黏着斑部位,调节成骨细胞功能、成骨细胞表型相关基因及骨基质金属蛋白酶基因表达,对NMP4/CIZ的研究或许能使我们对成骨细胞与细胞外基质间的相互作用有一全新的认识,现就NMP4/CIZ的基因结构、功能及表达调控的分子机制综述如下.     

条件性敲除骨髓间充质干细胞中3-磷酸肌醇依赖蛋白激酶1基因后的成骨细胞分化

背景:国内外对于3-磷酸肌醇依赖蛋白激酶1(3-phosphoinositide-dependent protein kinase-1,PDK-1)的研究主要集中在内分泌和肿瘤学等学科领域,在骨科学中关于其对成骨分化的影响尚未有系统研究与报道。目的:通过使用稳定表达cre酶的腺病毒(pHBAd-cre-EGFP)转染PDK-1^flox/flox小鼠骨髓间充质干细胞,观察PDK-1在成骨细胞分化中的作用。方法:体外培养获得来源于纯合子PDK-1^flox/flox小鼠的骨髓间充质干细胞,设立对照组、空载病毒组(pHBAd-EGFP)和pHBAd-cre-EGFP组,对照组仅用成骨细胞诱导培养基诱导培养骨髓间充质干细胞,空载病毒组使用pHBAd-EGFP转染骨髓间充质干细胞,pHBAd-cre-EGFP组使用含Cre重组酶的重组腺病毒(pHBAd-cre-EGFP)干扰骨髓间充质干细胞中的PDK-1基因,然后进行成骨诱导,采用碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性、茜素红染色和qPCR检测成骨相关基因表达来评价各组成骨细胞的分化成熟情况。结果与结论:pHB...