成骨细胞与血管内皮细胞联合培养的生物学特性

目的探讨成骨细胞与血管内皮细胞联合培养的生物学特性. 方法取2周龄乳兔颅盖骨及肾脏皮质传代培养制备成骨细胞(A组)、血管内皮细胞(B组)及成骨细胞与血管内皮细胞联合培养(C组),用Ⅰ型胶原和血管Ⅷ因子免疫细胞化学染色鉴定成骨细胞和血管内皮细胞,倒置相差显微镜和组织学染色观察细胞的生长特性和细胞相容性,检测碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase,ALP)活性,观察血管内皮细胞对成骨细胞产生的ALP活性有无影响,MTT法检测细胞活力,分析细胞生长和增殖情况. 结果免疫细胞化学染色证实,培养的细胞为成骨细胞和血管内皮细胞.倒置相差显微镜、HE和Masson染色均显示两种细胞混合生长良好.ALP检测结果:C组ALP活性明显高于A组和B组(P＜0.01),A组高于B组(P＜0.05).MTT检测结果表明:C组细胞早期增殖较慢,而后期增殖较快. 结论成骨细胞与血管内皮细胞具有良好的相容性,血管内皮细胞能够增强成骨细胞的ALP活性,提高成骨细胞的增殖能力.联合培养细胞具有很强的增殖潜能.     

60Coγ射线对体外培养成骨细胞作用的实验研究

目的：研究放射性骨损伤的发病机制，探讨骨折合并射线损伤愈合能力下降的原因。方法：将体外培养的成骨细胞用^60Coγ射线一次性照射3、6、9、12Gy，以建立体外培养成骨细胞受射线作用的实验模型；同时，观察成骨细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性改变，骨形态发生蛋白（BMP）和转化生长因子β1（TGF-β1）的胞质内表达量，以及细胞内钙离子的含量。结果：成骨细胞受射线照射后，其ALP活性明显降低，且与照射剂量呈明显量效关系，3Gy组抑制率为31.59%，而12Gy组则为84.95%；BMP、TGF-β1的表达量下降，但与照射剂量无明显量效关系；胞质内钙含量亦降低，但受照各组间的抑制率无明显统计学差异。结论：射线对成骨细胞具有直接损害作用，放射性骨损伤的重要方面就是射线对成骨细胞的主要功能酶ALP活性的损害，抑制BMP、TGF-β1等生长因子的合成，且干扰细胞内第二信使钙离子，从而致骨组织的再生重建机能下降。     

兔骨髓基质细胞诱导成骨细胞复合同种异体生物衍生骨实验研究

目的探讨体外培养的骨髓基质细胞与自体来源的生物衍生骨复合后的生长特性，为进一步研究骨髓基质细胞作为种子细胞，以及探索一种良好的支架材料提供实验依据。方法分离纯化兔骨髓基质细胞并诱导成成骨细胞后与同种异体来源的生物衍生骨复合后体外培养，并在相差显微镜和扫描电镜下观察其生长情况。结果骨髓基质细胞在生物衍生骨上贴附生长、增殖良好。结论骨髓基质细胞可作为骨组织工程的理想种子细胞，与生物衍生骨复合后可作为骨组织工程的载体。     

隔膜条件下骨再生成骨细胞来源的实验观察

目的:研究在隔膜条件下引导性骨再生过程中成骨细胞的来源,进一步认识引导性骨再生的机制.方法:以成年新西兰兔为研究对象,在双侧挠骨中段制作标准骨缺损不愈合模型,用硅胶膜成管状包裹一侧骨缺损,另一侧无特殊处理为对照.术后分别进行X线检查、常规HE染色以及SP方法BMP、BGP抗体的免疫组化染色.结果:硅胶膜在骨缺损处形成隔离密闭的腔室,将周围组织阻挡于骨缺损之外.早期骨端骨内膜、骨髓基质细胞大量增殖,形成肉芽组织占据骨缺损.骨再生过程中表现出明显的组织学特征:骨痂表面为2～3层成骨细胞,骨缺损中央为肉芽组织,两者之间为数层细胞形成的移行区,细胞排列疏松.早期骨端骨内膜、骨髓基质细胞BMP、BGP呈强阳性染色,骨痂生长过程中,移行区部分细胞呈阳性染色.结论:结果表明在隔膜条件下骨再生的成骨细胞在早期来源于髓内的骨内膜和骨髓基质细胞,骨痂形成后,成骨细胞则来源于骨内膜、骨髓、骨膜增殖细胞共同形成的肉芽组织中的间质细胞或成纤维细胞.     

诱导成骨的组织学及超微结构

选用免32只,手术截除桡骨2cm。缺损区充填DGB,手术后2、3、6、9周分别杀死动物作光镜及电镜观察。结果在电镜下发现有三类细胞,即成骨系、破基质系细胞和血管内皮细胞,并见到非成骨性结缔组织的间充质细胞分化为前成骨细胞→成骨细胞→骨细胞以及其同时分化为血管内皮细胞的全部过程。表实验从组织学和细胞学二方面证实DGB确有诱导成骨的作用。     

骨的应力集中效应

骨的最主要的功能是给身体提供支撑框架并协助机体的运动。其重要特点是具有应力适应性 ,当其受到扭曲、拉伸、压缩等力作用时 ,它可改变自身的结构和质量以适应功能性应变。由于生命体时刻处于力学环境中 ,因而应力对骨的生长、重建和成形起着重要的调节作用。然而骨也有一个最适应的应力范围 ,应力过低或过高都会使骨逐渐萎缩 ,甚至破坏。骨处于应力区内会增加其密度和硬度 ,而处于没有力学刺激的区域则会弱化密度乃至失去钙化特征。在含有几何不连续区的弹性体中 ,应力集中点的应力状态是力学研究的一个课题。在应力集中点及其邻近区域上…     

钛颗粒负荷对成骨细胞白细胞介素6生成的影响

磨损碎屑颗粒所诱发的无菌性松动是人工关节置换术后最常见的并发症.研究表明,假体-骨界面的骨组织细胞吞噬磨屑颗粒后,以自分泌或旁分泌的方式释放细胞间介质因子,而引起假体旁骨改建紊乱,导致假体松动.为了探明不同直径的磨屑颗粒对细胞释放细胞间介质因子的影响,本研究采用3种不同直径(mean sizeφ0.9 μm、φ2.7μm、φ6.9 μm)的钛颗粒,在浓度分别为0.25wt%,0.1wt%,0.05wt%下与兔成骨细胞共孵育4、8、12、24、36、48 h后,检测各组细胞白介素6(IL-6)分泌的变化情况.结果表明,3种钛颗粒均能刺激成骨细胞分泌IL-6因子,但其上调作用因不同直径,不同负荷浓度,不同负荷时间而有所不同.随着浓度增加和时间的推移,φ2.7μm和φ6.9 μm钛颗粒对IL-6生成的上调作用持续升高,而φ 0.9 μm钛颗粒的上调作用却呈先升高后快速下降的双相变化过程.结果提示磨屑颗粒能明显刺激细胞释放细胞间介质因子IL-6,而颗粒直径大小不同,上调IL-6的程度有所不同,使得细胞间介质因子影响假体旁骨改建紊乱的机制有所不同,这种由细胞因子介导的信号传递机制若进一步深入研究必将有助于人工关节材质的优化选择及临床预防用药指导.     

雌激素对成骨细胞的作用及作用机制

雌激素缺乏是绝经后骨质疏松(PMOP)的首要原因,雌激素替代治疗(ERT)是PMOP的首选方案.雌激素对骨代谢有重要调节作用,雌激素在成骨细胞增殖、分化、功能表达、凋亡等过程中起调节作用.雌激素对成骨细胞的作用与ER亚型、细胞因子/生长因子的旁分泌和自分泌作用、成骨细胞的凋亡关系密切.雌激素对成骨细胞的作用机制是ERT的重要理论依据.     

白细胞介素1刺激破骨细胞性骨吸收作用的实验研究

目的：了解白细胞介素1β（IL－1β）在破骨细胞性骨吸收中的刺激作用及其相应的作用机制。方法：分别将新生大鼠破骨细胞单独以及和成骨细胞联合接种于预置象牙片的培养板中。24h后培养液中加入不同浓度的IL－1β。继续培养48h,然后取出象牙片,超声处理后行甲苯胺蓝染色,光镜下观察骨吸收陷窝的数目并计算其部面积。结果：IL－1β能够明显增加坡骨细胞和成骨细胞联合培养组象牙片上吸收陷窝的数目和面前,且刺激作用呈剂量依赖性,但对单独培养的破骨细胞无明显刺激作用。结论：IL－1β的刺激骨吸收作用由成骨细胞所介导,而非直接作用于破骨细胞。     

氟化物对体外乳鼠颅盖骨分离细胞活力的影响

目的：建立较成熟的体外成骨细胞培养鉴定技术,初步观察氟化物对体外乳鼠颅盖骨分离细胞活力的影响。方法：采用颅盖骨分离细胞体外培养、传代、鉴定及MTT比色法。结果：染氟110.5mg/L时细胞活力明显降低;染氟44.2mg/L、110.5mg/L 120h对细胞活力有抑制作用,表明高剂量氟能抑制细胞增殖;而染氟8.84mg/L 120h,氟刺激细胞活力增强。结论：高剂量氟能抑制细胞增殖,表明培养时间较长时,方能显示低剂量对细胞增殖的促进作用。