乳铁蛋白对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的观察乳铁蛋白(Lf)对大鼠成骨细胞增殖分化的影响,初步探讨Lf对成骨细胞的作用机制。方法用不同浓度的Lf干预成骨细胞,在不同时间分别测定细胞数目的增殖、细胞内碱性磷酸酶活性,并用半定量RT-PCR法检测成骨细胞内RANKL/OPG mRNA基因的表达。结果Lf呈时间和浓度依赖性地促进大鼠成骨细胞增殖及碱性磷酸酶活性,每组实验在不同时间的差异均有显著的统计学意义(P<0.05),其中400μg/ml组在72h时细胞增殖数目达到最大。在碱性磷酸酶活性方面,400μg/ml组在72h时则有所下降。不同浓度Lf、不同作用时间均能促使成骨细胞中OPG mRNA表达增加,同时抑制RANKL mRNA表达。结论Lf能促进成骨细胞的增殖分化,并且能够调节成骨细胞RANKL/ OPG mRNA表达,从而抑制破骨细胞介导的骨吸收。     

颧骨缝牵张成骨过程中组织超微结构变化的研究

目的:观察天然骨缝牵张成骨过程中组织和细胞超微结构的变化。方法:对牵张成骨的缝区组织经过系列处理,进行超薄切片、透射电镜观察。结果:间充质细胞在牵引早期大量增生,并不断分化为成纤维细胞和成骨细胞,后2种细胞的超微结构显示出具有活跃的合成和分泌功能。1周标本成纤维细胞沿牵引力的长轴方向排列,胞核增大,在其周围包绕着发达并扩张的内质网系统;3周标本大量增生活跃的成骨细胞和成纤维细胞,成骨细胞核仁增大、粗面内质网扩张、核糖体丰富、线粒体增多、富含紧密排列的嵴;5、8周标本中骨细胞形成并发育成熟,骨基质逐渐矿化,清晰可见新形成的胶原纤维、哈氏管,以及骨基质矿化的过程。结论:三维牵张过程中,成纤维细胞、成骨细胞活跃,缝区形成新骨。     

侗药马卡列丙提取物对成骨细胞增殖、分化、矿化的影响

目的:研究侗药马卡列丙提取物促进骨形成的药理活性。方法:用噻唑蓝(MTT)法测定马卡列丙提取物促进成骨细胞增殖作用;采用碱性磷酸酶活性评价马卡列丙提取物促成骨细胞分化作用;以茜素红染色法检测马卡列丙提取物对成骨细胞矿化的影响。结果:MTT法检测表明乙醇、乙酸乙酯和正丁醇提取物可显著促进成骨细胞增殖;碱性磷酸酶检测结果表明乙酸乙酯提取物和粗多糖具有较好的促成骨细胞分化活性。马卡列丙提取物诱导14 d后,剩余水提物、乙酸乙酯提取物和粗多糖有比较明显的钙化结节。结论:马卡列丙乙酸乙酯提取物可显著促进成骨细胞增殖、分化和矿化,是促进骨折愈合的主要活性部位。     

成骨细胞龛通过上调白血病细胞IL-1的表达促进白血病干细胞增殖的研究

目的：探索骨髓微环境对白血病干细胞的调控机制,阐明成骨细胞龛是否通过上调白血病细胞中白细胞介素-1(IL-1)的表达,促进白血病细胞的增殖及自我更新。方法：获取AML1-ETO9a(AE9a)小鼠白血病模型的小鼠骨内膜和骨髓腔的白血病细胞,进行转录组测序（RNA-seq）,利用GSEA对转录组差异基因进行功能富集分析;实时荧光定量PCR检测并验证与成骨细胞共培养后,AE9a小鼠白血病细胞中IL-1的表达。同时采用实时荧光定量PCR测定43例急性髓系白血病（AML）患者中IL-1的表达;通过集落培养体系检测在与成骨细胞共培养后及加入IL-1β,AE9a小鼠白血病细胞的集落形成能力。结果：RNA-seq及GSEA分析结果显示,在AE9a白血病小鼠,骨内膜区域的白血病细胞中表达上调的基因,显著富集于炎症通路相关分子,其中IL-1α和IL-1β在骨内膜区的白血病细胞中的表达均显著高于骨髓腔内的白血病细胞（IL-1α:P<0.001, IL-1β:P<0.001）。与成骨细胞共培养后,AE9a小鼠白血病细胞IL-1α和IL-1β表达升高,分别是未与成骨细胞共培养的2.5倍和3.5倍,...     

成骨细胞和Ⅰ型胶原

人类已发现了7种胶原，最常见的是Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ胶原。它们在人体有不同的分布，如骨、皮肤中主要是Ⅰ型胶原(COLLI)，而软骨中是Ⅱ型胶原、瘢痕中存有Ⅲ型胶原。     

青娥方调节MMP2/EGFR通路影响成骨细胞凋亡的实验研究

目的:探讨中药青娥方调节MMP2/EGFR通路影响成骨细胞凋亡的作用机制。方法:成骨细胞分为6组,A组只加入培养液。除A组外,均加入30ng/mL的TNF-α培养液,C组再加入MMP2重组蛋白,D组再加入5%含药血清,E组再加入10%含药血清,F组再加入MMP2重组蛋白干预后5%含药血清。最后测定各组凋亡率和信号蛋白表达水平。结果:B组比A组细胞凋亡数目增加显著,F组凋亡细胞比例最小(仅为22.97%),而D组中处于G0-G1期的细胞最少,S期的细胞最多。C组中ERK2和Bad表达显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。D和E两组比较,EGFR含量轻微下降,ERK2含量稍有增加,而Bad含量无变化,差异均无统计学意义(P>0.05)。F组中EGFR表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);ERK2和Bad明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:只有中药青娥丸和基质金属蛋白酶同时应用可降低EGFR-ERK2-Bad通路蛋白表达,成骨细胞失凋亡,促进成骨。     

异补骨脂素对体外培养大鼠成骨细胞增殖分化成熟的影响

目的:研究异补骨脂素(Isopsoralen,IP)对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖与分化成熟的影响。方法:取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法获得成骨细胞,培养于含10%FBS的MEM培养液中,3 d后首次换液,铺满90%皿底后传代培养;增殖分析采用96孔板,加入在培养液中终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L的异补骨脂素,MTT法分析;分化分析采用24孔板,于成骨性诱导培养第3、6、9、12、15天分别测碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)活性、钙含量、骨钙素,第12天进行ALP组织化学染色,第14天进行茜素红染色和钙化结节计数。结果:终浓度为1×10-4mol/L的异补骨脂素对细胞增殖有抑制作用,而1×10-5mol/L浓度虽对ROB增殖无明显影响,但能显著提高细胞ALP活性、增加钙含量、促进骨钙素分泌,并增加钙化结节数量。结论1×10-5mol/L异补骨脂素能促进ROB分化成熟,应为中药补骨脂抗骨质疏松的有效成分。     

自噬对糖皮质激素作用下MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响

背景:目前,糖皮质激素(GCs)作用下成骨细胞自噬与其增殖能力的关系尚存争议.目的:探讨自噬对GCs作用下MC3T3-E1成骨细胞增殖能力的影响.方法:不同浓度(0、10-8 M、10-6 M、10-4 M)的地塞米松(DXMS)分别作用于MC3T3-E1成骨细胞,CCK-8检测不同时间(12 h、24 h、48 h)...     

淫羊藿甙对OVX大鼠成骨细胞Smad4 mRNA的作用

目的：探讨淫羊藿甙（icariin）抑制骨质疏松的细胞内信号机制。方法：36只雌性Wistar大鼠随机分成3组：OVX（双侧卵巢切除）；OVX-I （OVX并注射icariin）；OVX-E（OVX并注射雌二醇）。术后4，6，8周时检测血清碱性磷酸酶（AIJP）的含量，并于术后8周时测体质量，取股骨干分离培养成骨细胞，用RT-PCR检测各组成骨细胞Smad4的mRNA含量。结果：（1）Icariin可以控制OVX大鼠体质量增加。（2）术后4，6周OVX-I和OVX-E组血清ALP值升高差异无统计学意义；OVX组ALP升高值与其他2组间差异有统计学意义（P〈0．01）；术后8周OVX、OVX-I和OVX-E组血清ALP值依次降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）术后8周，RT-PCR显示OVX、OVX-I和OVX-E组Smad4的mRNA含量依次增高，以OVX-E组最多。结论：淫羊霍甙可抑制OVX大鼠血清ALP水平的升高，且可能通过提高Smad4 mRNA抑制OVX大鼠体质量的增加。     

条件性敲除骨髓间充质干细胞中3-磷酸肌醇依赖蛋白激酶1基因后的成骨细胞分化

背景:国内外对于3-磷酸肌醇依赖蛋白激酶1(3-phosphoinositide-dependent protein kinase-1,PDK-1)的研究主要集中在内分泌和肿瘤学等学科领域,在骨科学中关于其对成骨分化的影响尚未有系统研究与报道。目的:通过使用稳定表达cre酶的腺病毒(pHBAd-cre-EGFP)转染PDK-1^flox/flox小鼠骨髓间充质干细胞,观察PDK-1在成骨细胞分化中的作用。方法:体外培养获得来源于纯合子PDK-1^flox/flox小鼠的骨髓间充质干细胞,设立对照组、空载病毒组(pHBAd-EGFP)和pHBAd-cre-EGFP组,对照组仅用成骨细胞诱导培养基诱导培养骨髓间充质干细胞,空载病毒组使用pHBAd-EGFP转染骨髓间充质干细胞,pHBAd-cre-EGFP组使用含Cre重组酶的重组腺病毒(pHBAd-cre-EGFP)干扰骨髓间充质干细胞中的PDK-1基因,然后进行成骨诱导,采用碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性、茜素红染色和qPCR检测成骨相关基因表达来评价各组成骨细胞的分化成熟情况。结果与结论:pHB...